Способ определения тироксина в слюне

(5 Ц 5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР БРЕТ АНИЕ И ЕЛЬСТ МУ СВ К АВТО(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИРОКСИНА В СЛЮНЕ(57) Изобретение относится к биологии и. иологии и кри- . медицине и может быть использовано в кли-нической лаборатории, Целью изобретения н, Л.Я.Черный, . является упрощение способа и расширение И.М.Бондарева его универсальности за счет использованиялюбой тест-системы дйя определения тиунологический роксинаСлюну подвергают сублимационринологии. Ки- ной сушке при (-25) - .(ЗО)С до остаточнойвлажности 0,5 6. Сухой остаток растворяют в воде и проводят радиоиммунологический анализ с использованием.стандартйого набора для определения тироксина в крови. Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в клинике и научно-исследовательских лабораториях.Целью изобретения является упроще-. ние способа и расширение его универсальности за счет использования любой тест-системы для определения пироксина.:Для этого в способе определения ти-, роксина в слюне, включающем обработку пробы и ее радиоиммунологический анализ, слюну обрабатывают путем сублимационной сушки до остаточной влажности 0,4-0,6 .Способ осуществляют следующим обра-зом.Слюну объемом не менее 4 мл помещают во флаконы и подвергают сублимацион ной сушке при (-25) - .(30 С) до остаточно влажности 0,4-0,6. Сухой остаток рвство ряют в 0,5 мл воды. Определение Т 4 пров дят при помощи стандартного набор реактивов для определения тироксина крови. Рассчитывают по формуле шка проводится до остаточн4 - 0,6 ,.аратура для сублимационооляет провести упариванио объема пробы с точностьюдля радиоиммунологи. сухого и сушки е до тре- необхоческого ается до 1(71) Институт проблем криоомедицины АН УССР(56) Славнов В.Н. Радиоиманализ в клинической андоев: Здоровье, 1988, с. 11. Ч 2 (Т 431Ч 1где (Т 4)1 - содержание тироксина, найденное из калибровочного графика;Ч 2 - объем, в которомрастворен сухой остаток после сублимации; .Ч 1 - объем исследуемой слюны.Применяемая лиофильная сушка позволяет сократить время подготовки к определению до 8-10 ч посравнению с 10. неделями в прототипе. Кроме того, определение тироксина в сконцентрированной слюне становится доступным с использованием стандартных наборов,8 биологических жидкостях тироксинне устойчив, образцы могут храниться не , более 2 недель при -20 С.Проведенные исследования показывают, что в данном способе продолжительность хранения проб может быть существенно увеличена и сравнима с таковой для коммерческих преператов тироксина (:тироксин 3 г срок хранения), не требуя для сохранности низких температур. Эти факторы позволяют производить накопление материала при массовых обследованиях в полевых и экспедиционных условиях, где нет специализированных изотопных лабораторий.П р и и е р. 6 мл слюны, собранной иэустья выводного протока околоушной железы с помощью специального устройства по. мещали в стеклянные флаконы обьемом 45 х 100 мл, которые устанавливали в камеры сублимационной сушки КЯ - 6 для плазмы крови. Сублимационную сушку проводили в вакууме в интервале температур. (-25) - (30) С до остаточной влажности 0,5 масСухой остаток растворяли в 0,5 мл воды.Определение тироксина проводили сприменением набора РИО-Т - ПГ института биоорганической химии АН БССР следующим образом.Из растворенного в воде сухого остаткаотбирали по 0,25 мл и вносили в аналитические пробирки, входящие в комплект набора РИО-Т 4 - ПГ. Приливали по 0,.5 мл раствора антисыворотки, туда же добавляли 0,1 мл раствора 1251-тироксина и оставляли на 1 ч при комнатной температуре, После этого в пробирки приливали 0,1 мл раствора полиэтиленгликоля и тщательно перемешивали. Пробирки помещали в центрифугу с горизонтальным ротором и центрифугировали в течение 15 мин при ускорении 15000- 2000. Надосадочную жидкость сливали в пробирку и помещали в гамма-счетчик для измерения количества импульсов в каждой пробирке в течение 1 мин. По калибровочному графикуопределяли концентрациютироксина.Определение тироскина в слюне проводили у здоровых людей и больных гипертиреоэом. Параллельно определяли известным способом.Результаты приведены в табл. 1.5 10 30 35 для исследования не поддается длительному хранению, а должна использоваться сразу после забора; 40 45 50 15 20 25 Из табл, 1 видно, что в обоих способах значения содержания тироксина в слюне согласуются, являясь величинами одного порядка.Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить тироксин в слюне с такойжеточностью, какиизвестный, напри этом он намного проще, что требует меньше затрат труда и времени. Так, в прототипе на приготовление антигена и иммунизацию кроликов требуется 8-10 недель, Процесс же сублимации в данном способе длится 8-10 ч.В табл. 2 представлена зависимость открытия тироксина из слюны от остаточной влажности.Из табл. 2 видно, что процент открытия гормона максимальный при остаточной влажности 0,3- 0,6 %, но при 0,3 % влажности ухудшается растворимость осадка, поэтому в качестве оптимального выбран диапазон 0,4-0,6 овлажности.При остаточной влажности выше 0,6 онаблюдается уменьшение открытия гормона из слюны, что снижает. точность определения. Положительный эффект изобретения достигается за счет использования сублимационной сушки для сокращения времени анализа и удлинения срока хранения материала, в известном способе это не достижимо. В прототипе создается новая тест-система, требующая на ее изготовление длительного времени, слюна Форрмула изобретения Способ определения тироксина в слю-не путем добавления специфической антисыворотки к исследуемой пробе с последующей регистрацией реакции антиген-антитело по включению радиоактивной метки, о т л и ч а ю щ и й с.я тем, что, с целью упрощения способа и расширения его унйверсальности за счет использования любой тест-системы для определения тироксина, исследуемый материал подвергают сублимационной сушке до остаточной влажности 0,4-0,6,1725.128 Таблица 1 ца 2 Составитель П.Бонарцевльникова Техред М;Моргентал Корректор, О; КундриКг ор М.Ст ательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 10 оизводственн Заказ 1172 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/б