Способ лечения кризов отторжения почечного аллотрансплантата

СОЮЗ СООЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1671303 А 1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ рственны Горького оваленко дицин. А,Г.Луневаин.И.К индром отторжки, - М.: Ме ия ицина,Я КРИЗОВ АЛЛОТРА ОПОР ПЛАН ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(71) Донецкий госудаский институт им, А.М(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНЖЕНИЯ ПОЧЕЧНОГОТАТА Изобретение относится к медицине, в астности к трансплантологии, Цель изобретения - повышение обратимости криэов отторжения при уменьшении сложнений гормональной терапии Способ осуществляют следующим обра При диагностировании у реципиента криза отторжения почечного трансплантата выделяют из забранной венозной крови реципиента на градиенте плотности фиколлверографин лимфоциты, концентрацию которых доводят до 2 млн. в 1 мл среде, вводят по 1 мл взвеси лимфоцитов в 6 пробиоок, содержащих в качестве среды инку бации состав, содержащий 100 мМ Вас. 20 мМ КС 1, 2,5 мМ М 9 С 12 0,5 мМ ЭДТА, 5 мМ Бааз, 50 мМ трис-НС (рН 7,4) и метилпредниэолон в концентрациях 0,036; 0,0712; 0,142;0,214; 0,285; 0,428 мг в 1 мл среды инкубации, одновременно с этим вводят по 1 мл 5 А 61 К 31/56. 6 01 И 33/(57) Изобретение относится к медицине, в частности к трансплантологии, Цель - повышение обратимости криэов отторжения при уменьшении осложнений гормональной терапии. Для этого перед каждым введением метилпреднизолона определяют 1 чэ - К-АТФ-азную активность лимфоцитов, выделенных иэ крови реципиента, в присутствии метилпреднизолона в различных концентрациях и вводят препарат в минимальной концентрации, рассчитанной с учетом обьема циркулирующей плазмы крови, вызывающей максимальное сниже ние Иа -К-АТФ-азной активности лимфоцитов 1 и чтго. 1 табл. взвеси лимфоцитов еще в 6 пробирок, содержащих, кроме укаэанных ингредиентов, 0,5 ммоль уабаина, являющегося специфичным блокатором г 1 а-К-АТФаэы.Инкубируют пробирки при 37"С в тече- О ние 15 мин. Затем вносят в пробирки 2,5 4 ммоль АТФ-йа 2 и инкубируют при темпера- й туре 20"С в течение 20 мин, после чего вно-,( ) сят в пробирки по 1 мл смеси, содержащей С) 2,5 трис-ацетатного буфера (рН 4,3), содержащего для определения неорганическогоФосфора 0,2-ного молибдата аммония й О,2 мл 1%-ного аскорбата на 5 мМ СиЯО 4 и через 20 мин определяют фотокалориметрически оптическую плотность проб при длине волны 735 нм,Рассчитывают содержание неорганического фосфора, образовавшегося при ферментативном распаде АТФ в лимфоцитах по разности оптических плотностей пары пробирок, содержащих одинаковые концентра 167130310 1520 20 мин 25 35 40 45 50 55 ции метилпредниэолона с добавлением ибез уабаина, которая характеризует активность Иа-К-АТФазы инкубируемых лимфоцитов, определяют минимальнуюконцентрацию метилпреднизолона, при которой происходило максимальное снижение выделение неорганического фосфора.Реципиенту вводят дозу препарата,рассчитанную по произведению оптимальной концентрации препарата и чтго на объем циркулирующей плазмы реципиента(мл).Повторяют определение эффективнойконцентрации метилпреднизолона ежедневно перед каждым введением препаратареципиенту.Эффективную дозу препарата. которуюнеобходимо ввести для лечения отторженияпочечного трансплантата, определяют поформуле. эффективная доза (мг препарата)=- оптимальная концентрация и чгго(мг/мл)хх ОЦП; где ОЦП - объем циркулирующейплазмы у данного реципиента (мл), определяемый любым доступным методом.Таким образом, предлагаемый способ всравнении с известным позволяет достоверно повысить эффективность лечениякриэов отторжения и уменьшить частотуразвития основных осложнений, связанныхс купированием криза. Кроме того, способ. позволяет сократить расход стероидов, вданном случае, метилпреда, используемыхдля лечения криза,П р и м е р 1. В отделении гемодиализаи трансплантации почки выполнена трансплантация почки больному Б, 40 лет. Диагноз до операции; первично-хроническийгломерулонефрит, хроническая почечнаянедостаточность, терминальная стадия,пролонгированная гемодиализом.В послеоперационном периоде больной получал профилактическую иммуносупрессию метипредом 0,5 мг/кг; аэатиприном1 мг/кг и сандиммуном циклоспорин А)8 мг/кг. Функция трансплантата после операции удовлетворительная.На 12 сут диагностирован острый кризотторжения, Для лечения криза отторжениябыл выбран метилпредниэолон. Перед назначением препарата произведен заборкрови у больчого для определения эффективной дозы препарата, Доза была определена следующим образом: выделилилимфоциты из гепаринизированной(25 ЕД/мл) веноэной крови реципиента путем наслоения на градиент плотности(1076 - 1078) фиколл-верографин.Полученный пул лимфоцитов дваждыотмывали средой 199 и доводили концентрацию клеток до 2 млн е 1 мл. Лимфоцитарную взвесь в объеме 1 мл вводили в 6 пробирок со средой инкубации, включающей 100 мМ чаС; 2,5 мМ МдС 2;05 мМ ЭДТА; 20 мМ КС; 5 мМ чайэ; 50 мМ трис-НС (рН 7,4), и метилпреднизолон в концентрациях 0,036 мг/мл (пробирка 1);0,0712 мг/мл(пробирка 2); 0,142 мг/мл(пробирка 3); 0,214 мг/мл (пробирка 4);0,285 мг/мл (пробирка 5); 0,428 мг/мл (пробирка 6).Одновременно с этим 1 мл лимфоцитарной взвеси вводили еще в 6 пробирок(7 - 12), в которых содержалась аналогичная среда инкубации с такими же концентрациями метилпредниэолона, отличающаяся присутствием 0,5 мМ уабаина, являющегося специфическим блокатором ча-К-АТФаэы.Инкубировали содержимое пробирок в термостате при температуре 37 С в течение 15 мин, после чего в пробирки вводили по 1 мл раствора Ма-АТФ (2,5 мМ) и продолжали инкубацию при температуре 20 С в течение Тормозили реакцию путем введения в каждую пробирку 1 мл смеси, содержащей 0,2;-ного раствора молибдата аммония на ацетатном буфере (рН 4,3) и 0,2 мл 1-ногораствора аскорбата на 5 мМ Си 04. Через 20 мин измеряли оптическую30 плотность содержимого пробирок на фотоэлектрокалориметре ФЭКМ (длина волны 735 нм). Определяли активность Ма-К-АТФазы лимфоцитов (мг фосфора/мл ч) по разности оптических плотностей (концентрации фосфора, образовавшегося в процессе ферметативного гидролиза АТФ) в каждой паре пробирок с одинаковыми концентрациями в, них метилпредниэолона с и без уабаина (пробирки 1 и 6,2 и 8,3 и 9,4 и 10,5 и 11, 6 и 12).Находили минимальную концентрацию метилпреднизолона, которая приводила к максимальному снижению йа-К-АТФазы лимфоцитов. Оптимальная концентрация метилпредниэолона, при которой наступило максимальное снижение ферментативной активности лимфоцитов реципиента, составляла 0,285 мг/мл.Рассчитывали эффективную дозу для купирования реакции отторжения аллотрансплантата в первые сутки развития криза по произведению найденной оптимальной концентрации метилпреднизолона п чйго на объем циркулирующей плазмы реципиента, который определяли по методу разведения красителя (синий Эванса). Эффективная доза = 0,285 х 3250(мл) 922,5 мг метилпреднизолона.1671303 Формула изобретения Составитель Н,ШТехред М.Морге льгина рректор М.Кучерявая едактор М.бланар Заказ 2784 Тираж 458 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 10 изводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гага В водили реци пиен ту в н утри вен но эффективную дозу препарата метипред.Через сутки повторяли определение МаК-АТФазной активности лимфоцитов периферической крови для нахождения эффективной дозы препарата. Установили, что минимальная концентрация метилпреднизолона, при которой происходило максимальное снижение ферментативной активности лимфоцитов, составляла п ч 1 тго 0,214 мг/мл, объем циркулирующей плазмы 2890 мл. Эффективная доза метипреда 618,5 г. Провели внутривенную инфузию препарата метипред в данной дозировке.В течение последующих 2 сут оптимальная концентрация метилпреднизолона 1 и чтго составляла 0,142 мг/мл, Объем циркулирующей плазмы на 3 сут лечения криза отторжения составил 2900 мл, а на 4 сут 2800 мл. Соответственно этим показателям больному был инфузирован метипред в дозе 411,8 и 397, 6 мг,На 5 сут купирования криза оптимальная концентрация метилпреднизолона 1 и ч 1 тго составила 0,0712 мг/мл, При объеме циркулирующей плазмы 2950 мл больному был введен внутривенно метипред в дозе 209, 0 мг.На 6 сут от начала лечения криза отторжения отмечено восстановление функциональной активности трансплантата. Решено лечение криза метипредом прекратить. Осложнений, связанных с применением стероидов, не регистрировали. Больной был выписан иэ отделения через 60 сут послетрансплантации с удовлетворительной функцией аллотрансплантата (мочевина крови8,9 ммоль, креатинин 0,1 ммоль, клубочко 5 вая фильтрация по клиренсу эндогенногокреатинина 30 мл/мин).Распределение основных осложнений,связанных с применением стероидных препаратов (метипреда) при лечении кризов от 10 торжения в контрольной и опытной группах,представлены в таблице,Таким образом, предлагаемый способпозволил снизить частоту развития основных осложнений, связанных с кУпировани 15 ем кризов отторжения стероидами, всравнении с известным с 80,7 до 42,1.в20 Способ лечения кризов отторжения почечного аллотрансплантата, включающий введение метилпреднизолона, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения обратимости кризов отторжения при умень шении осложнений гормональной терапии,перед каждым введением препарата определяют йа-К-АТФ-азную активность лимфоцитов, выделенных из крови реципиента, в присутствии метилпреднизолона в различ ных концентрациях и вводят препарат в минимальной концентрации, рассчитанной с учетом объема циркулирующей плазмы крови, вызывающей максимальное снижение йа-К-АТФ-аэной активности лимфоцитов, 35