Способ определения т-и в-лимфоцитов на цитологическом препарате

(5)5 6 01 й 1/28 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Нарциссов Р,П, Прогностические возможности клинической цитохимии. М 1984,с, 267,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ НА ЦИТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ Способ относится к медицине, в частности к иммунологическим методам исследования, и может применяться в клинической и лабораторной практике для количественной оценки популяций Т- и В- лимфоцитов.Целью изобретения является повышение точности способа.Способ осуществляют следующим образом.Мазки крови или мазки отпечатки на холоде обрабатывают раствором акридинового оранжевого в разведении 1:500000 в течение 1-2 мин, Влажные мазки накрывают покровным стеклом и исследуют с водной иммерсией при увеличении в 900 раз (ок. 15, об, 60) на люминесцентном микроскопе МЛ. Т-лимфоциты дифференцируют по кольцевой крупноглыбчатой организации хроматина, а В-лимфоциты определяют по диффузной, мелкоглыбчатой организации последнего.(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что на препарате выявляют клетки с кольцевым и диффузно расположенным хроматином. При этом в качестве красителя используют акридиновый оранжевый в концентрации 1:500000, а окрашивание проводят в течение 1 - 2 мин. При наличии в клетках кольцевого хроматина определяют ее как Т-лимфоцит, а при наличии в клетках диффузно расположенного хроматина - как В-лимфоцит. Способ позволяет точно и быстро выявить эти.две разновидности клеток; П р и м е р 1, 8 белых крыс интактных и 10 крыс на 7 сут после введения им 20 млрд. микробных тел Ятарйуососсоэ ацгеоэ штамм 75 забивали под легким эфирным наркозом. Отпечатки селезенки на холоде обрабатывают раствором акридинового 3 оранжевого 1:500000, в течение 1-2 мин, фнакрывают покровным стеклом, помещают Я на предметный столик микроскопа МЛ.При рассмотрении препарата под водой д иммерсией Т-лимфоциты определяют по кольцевому крупноглыбчатому расположению хроматина, а В-лимфоциты - по диф- с фузному, мелкоглыбчатому, Параллельно ф проводят определение Т-лимфоцитов и В- ф лимфоцитов по известному способу, а такжепутем определения Е- и ЕАС-розеткообразующих клеток.Дополнительно был проведен контроль распределения клеток на Т- и В-лимфоциты по органиэаци хроматина в тесте с ЕА- и ЕАС-розеткообразованием с эритроцитами1712817 Составитель Л.СтебаеваТехред М.Моргентал Корректор М.Максимишинец Редактор Э.Слиган Заказ 530 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 барана и в тесте с анти- О-сывороткой, После обработки препарата анти- О-сывороткой крупноглыбчатая организация хроматина выявилась в 1-4 случаев, а клет.ки с мелкоглыбчатой, полиморфной организацией при увеличении в 900 раз (об, 60, ок.15) на люминесцентном микроскопе или микроцитофлуориметре при 530 и 640 нм. Т-лимфоциты дифференцируют по наличию крупноглыбчатой организации хроматина в ядре, а В-лимфоциты - по мелкоглыбчатой, полиморфной . Определяют параметры интенсивности свечения ядер Т- и В-лимфоцитов в зеленой и красной областях спектра и вычисляют для них в отдельности индекс метаболической активности.Таким образом, предлагаемый способ повышаетточностьопределения Т-и В-лимфоцитов эа счет специфичности связывания красителя с исследуемой структурой - хроматином, поскольку акридин оранжевый соединяется с нуклеиновыми кислотами. Кроме того, разрешающая способность метода флуоресцентного зондирования на порядок и более превышает чувствительность методов микроскопии в видимых областяхспектра, что также повышает точность исследования,Способ может быть использован в5 лабораторной и клинической практике какэкспресс-методдля определения Т- и В-лимфоцитов при различных состояниях с цельюдиагностики нарушений в системе иммунитета и их коррекции.10 Формула изобретенияСпособ определения Т- и В-лимфоцитовна цитологическом препарате путем инкубации мазков с красителем и определениемклеток по организации хроматина, о т л и 15 ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышенияточности способа, на препарате выявляютклетки с кольцевым и диффуэно расположенным хроматином, при этомкачествекрасителя используют акридиновый оран 20 жевый в концентрации 1:500000, а окрашивание пооводят в течение 1-2 мин и приналичии в клеткахкольцевого хроматина определяют Т-лимфоциты, а при наличии вклетках диффузно расположенного хромэ 25 тина - В-лимфоциты,