Способ получения мукополисахаридов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 9) ( ) 20 ГОСУДАРСТВЕ ПО ИЗОБРЕТЕ ПРИ ГКНТ СС ЫЙ КОМИТЕТ ИЯМ И ОТКРЫТИЕНИЯ РЕ АТЕН ИСАНИЕ ИЗО(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУКОПОЛИСАХАРИДОВ(57) Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно кполучению мукополисахаридов путем деполимеризации гепарина, обладающих биолоИзобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимериэации гепарина. обладающих биологическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови.Целью изобретения является упрощение процесса получения мукополисахаридов и повышение их антикоагулянтной активности.П р и м е р 1. Растворяют 60 г гепарина, имеющего отношение показателя Юина - Весслера, характеризующего способность активных продуктов вызывать ингибирова)5 С 08 В 37/10 // А 61 К 31/72 гическими своиствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови, Изобретение позволяет упростить процесс и повысить их антикоагулянтную активность за счет того, что гепарин обрабатывают нитритом натрия в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2 - 2,75 и массовом соотношении гепарина и нитрита натрия 1:(0,158 - 0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом. Целевой продукт может быть дополнительно обработан боргидридом или перманганатом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и боргидрида калия, 47;7 или деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:1 при у рН 8,5. 2 э.п. ф-лы, 2 табл. ние фактора Ха-крови ингибированием ан- О( титромбином 111(АТ 111), к показателю, характеризующему способность активных продуктов ингибировать общую коагуляцию крови или плазмы (УСП) (ЮВ/УСП), близкое к 1, и показатель УСП 160 Е/мг, в 3 л дистиллированной воды при 4 С, Добавляют нитрит натрия в количестве, достаточном для ф получения 0,05 М раствора (10,35 г; массовое соотношение гепарин:нитрит натрия = 1;0,172), затем рН доводят до 2,5 при помощи чистой соляной кислоты, раствор при 4"С взбалтывают в течение 10 мин. Далее рН доводят до 7,5 при помощи 5 н, раствора соды. Добавлением 5 обьемов чистого эта 1658820нола (15500 мл) продукты реакции осаждают. Образовавшийся осадок извлекают при помощи центрифугирования. Его промывают этанолом и сушат при 60 С под глубоким вакуумом. Собирают 60 г продукта, обладающего следующими характеристиками; показатель УСП 17 Е/мг, показатель ЮВ 240 Е/мг.В качестве исходного материала используют гепарин, имеющий показатель УСП 165 Е/мг, а отношение ЮВ/УСП порядка 1, Растворяют 3 г гепарина в 150 мл дистиллированной воды при 4 С, затем добавляют 517 мг нитрит натрия в реакционную среду (массовое соотношение гепарин:нитрит натрия = 1;0,172), После окончания обработки, проведенной в соответствии с приведенным описанием, извлекают 2,8 г продукта с показателем УСП 24 Е/мг и показателем активности ЮВ 250 Е/мг.Используют 50 г гепарина с показателем УСП 158 Е/мг и отношением ЮВ/УСП, близким к 1. Указанное количество гепарина растворяют в 2500 мл дистиллированной воды и при 4 С добавляют 8,625 г нитрит натрия (массовое соотношение гепарин:нитрит натрия = 1:0,172). После завершения обработки получают 46 г продукта, обладающего следующими характеристиками; показатель УСП 13 Еlмг, показатель активности ЮВ 270 Е/мг.П р и м е р 2. При окружающей температуре растворяют 47 г продукта, полученного в примере 1, в 1200 мл дистиллированной воды. При перемешивании добавляют 7 г боргидрида калия, Перемешивание продолжают в течение 2 ч при окружающей температуре, а затем добавляют в реакционную среду уксусную кислоту для того, чтобы снизить рН до 4,0 и разрушить тем самым не использованный боргидрид калия. Смесь еще перемешивают в течение 30 мин, затем рН увеличивают до 7,5 при помощи 5 н, раствора соды. В реакционную смесь добавляют 5 объемов спирта. Образовавшийся осадок собирают, просушивают, промывают чистым этанолом и сушат под вакуумом при 60 С, Получают 46,5 г продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 17 Е/мг, показатель активности ЮВ 250 Е/мг,П р и м е р 3. Растворяют 40 г продукта, полученного по примеру 1, в 400 мл дистиллированной воды при окружающей температуре. Значение рН обеспечивают на уровне 8,5 при помощи 5 н, раствора соды, затем добавляют 2 г перманганата калия КМп 04, растворенного в 40 мл воды. Реакционную смесь подвергают перемешинанию втечение 15 ч, В течение этого перемешива 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ния рН смеси постоянно поддерживают на уровне 8,5 при помощи 5 н, раствора соды. Через 15 ч добавляют 0,2 объема спирта (90 мл) с тем, чтобы удалить КМп 04, который не участвовал в реакции.Реакционную смесь отстаивают в течение 1 ч. Образовавшийся осадок Мп 02 удаляют центрифугированием, Осаждением этанолом извлекают продукты реакции, промывают и сушат. Таким образом получают 35 г продукта, обладающего следующими характеристиками; показатель УСП 12 Е/мг, показатель активности ЮВ 270 Е/мг,П р и м е р 4. Растворяют 3 г гепарина в 150 мл дистиллированной воды при 4 С. Добавляют 517 мг нитрита натрия для получения 0,05 М раствора. рН устанавливают на значении 2,2 добавлением чистой кислоты НО и перемешивают раствор при 4 С в течение 10 мин, Затем рН доводят до 7,5 при помощи 5 н. гидроокиси натрия, Добавлением 5 объемов чистого этанола осаждают полученный продукт. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием, промывают этанолом и сушат при 60 С под вакуумом, Получают 2,8 г продукта.Используя те же самые исходные, осуществляют реакцию при рН равном 2,5; 2, 6 и 2,75. Выход продукта 2,8 г. Характеристики полученных продуктов сведены в табл, 1,П р и м е р 5. Растворяют 10 г торгового гепарина (соотношение УЮ/ОЯР около 1; титр ОЯР 160 ед/мг) в 1 д дистиллированной воды при 4 С, Добавляют нитрита натрия МаМО 2 в количестве. достаточном для получения 0,02 М раствора, т,е, 1,58 г (соотношение гепарина и нитрита натрия 1;0,138), затем доводят рН до 2,5 с помощью чистой соляной кислоты, Перемешивают при 4 С в течение 10 мин и доводят рН до 7,5 с помощью 5 н. щелочи натрия. Путем добавления 5 объемов чистого этанола (т,е, 5 л) осаждают продукты реакции, Рекупериочют осадок центрифугированием, затем промывают чистым этанолом и сушат при 60 С под глубоким вакуумом,Получают 10 г продукта, имеющего следующие характеристики:Титр ОЯР 15 м.е,/мгТитр Юина-Весслера 253 ед/мгТитр АРТТ 11 ед/мгСравнительные данные по свойствам продуктов, полученных предлагаемым и известным способами, приведены в табл. 2,Упрощение процесса достигается эа счет получения продуктов, которые непосредственно могут быть использованы в терапевтии без дополнительной очистки.1658820 В известном способе целевой продукттребует очистки с помощью адсорбционнойхроматографии. Таблица Составитель Т. МартинскаяТехред М.Моргентал Корректор М Демчик Редактор И. Дербак Заказ 1724 Тираж 327 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул Гагарина, 101 Формула изобретения 1. Способ получения мукополисахаридов обработкой гепарина деполимеризующим агентом,отл ича ю щи й с я тем, что, целью упрощения процесса и получения целевого продукта с повышенной антикоагулянтной активностью, в качестве деполимеризующего агента используют нитрит натрия, а обработку проводят в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2 - 2,75 и массовом соотношении гепарина и нитрита натрия 1:(0,138-0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом5 2. Способ по п,1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что целевой продукт дополнительно обрабатывают боргидридом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и боргидрида калия 47:7,10 З,Способпоп,1,отличающийся тем, что целевой продукт дополнительно обрабатывают перманганатом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:115 при рН 8,5,