Способ определения окисления и ферментации глюкозы грамотрицательными микроорганизмами

/04 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТ ОМУ 1.1 ЕТЕЛЬСТВ ководство дл кровского, 3, 297-298.ОКИСЛЕНИЯ И АМОТРИЦАТЕЛЬтся к микро спольэовано рий при бак ваниях. Цел способа.Споельно в двух ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯФЕРМЕНТАЦИИ ГЛОКОЗЪ ГРНЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ(57) Изобретение относибиологии и может быть идля идентификации бактетериологических исследоизобретения - ускорениесоб осуществляют паралл Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий при бактериологических исследованиях.Цель изобретения - ускорение способа.П р и м е р 1, Приготовление питательных сред.К 170 мл раствора, содержащего 11,876 г/л Ба 1 НРО 12 НО, добавляют 30 мл раствора, содержащего 9,078 г/л КНРО 1, устанавливают рН 7,6, К 200 мл буферного раствора добавляют 6 г хлористого натрия, 4 мл 0,4 Х-ного водно-щелочного раствора фенолового красного, (0,016 г сухого вещества), дистиллированную воду до 1 л, рН среды 7,6. Полученный раствор разливают в колбы по 100 мл, стеркпизусредах, при этом среда для определения ферментации глюкозы содержит0,2 л фосфатного буфера рН 7610-30 г Д-глюкозы; 4-6 г хлористого натрия; 0,012-0,016 г фенолового красного и дистиллированную воду до 1 л. В среду дляопределения окисления глюкозы дополнительно вводят О, 1 - 0,7 Хпероксида водорода, Исследуемые организмы вносят в обе среды и инкубируют 60-80 мин. При изменении красного цвета сред на желтый определяют ферментацию глюкозы, а приизменении цвета и наличии газообразования только в среде с пероксидом водороца определяют окисление глюкозы,ют при 120 С 30 мин. Буферная основа среды имеет красную окраску.В стерильную буферную среду добав- ф 3 ляют 3 г порошка Д-глюкозы и переме" 1 ввф шивают. Среда готова к использованию (ф для определения ферментации глюкозы. ДДля получения среды, необходимой для определения окисления глюкозы, к р описанной среде добавляют 0,7 Х пероксида водорода. Исследуемую агаровую культуру грамотрицательных бактериЯ вносят по одной полной петле в две лунки планшета, содержащее по О, мл ,Ьф питательных сред. В одной лунке находится среда для ферментации глюкозы, содержащая ЗХ Д-глюкозы в буферной основе, в другой - среда дляокисления глюкозы, содержащая 37 Д- глюкозы и 0,7 Ж перекиси водорода вбуферной основе. Культуры перемешивают, планшет помещают в термостат при 37 С на 60 мин, после чего учитывают результаты. В лунке со средой для ферментации глюкозы сохраняется исходная красная окраска, а в лунке со средой для окисления глюкозы имеются пузырьки газа и исходная красная окраска, Результаты указывают на то, 10 что по ОР-тесту исследуемые бактерии относятся к группе неферментирукнцих и неокисляющих глюкозу бактерий.П р и м е р 2. Готовят среды в соответствии с примером 1, но компо ненты берут в следующих соотношениях:Фосфатный буфер 0,2 лД-глюкоза 10 гХлористый натрий 4 гФеноловый красный 0,012 г 20Дистиллированнаявода ДолВ среду для определения окисления добавляют 0,17 пероксида водорода.25Исследуемую агаровую культуру грамотрицательных бактерий вносят по одной полной петле в две лунки планшета, содержащие по 0,1 мл питательных сред. В одной лунке находится с,еда для ферментации глюкозы,содержащая 1 Х Д-глюкозы в буферной основе, в другой - среда для окисления глюкозы, содержащая 1 Х Д-глюкозы и 0,1 Х перекиси водорода в буферной основе, Культуры перемешивают, планшет помещают в термостат при 37 С на 60 мин, после чего учитывают результаты. В лунке со средой для ферментации глюкозы исходный красный цвет изменился в желтый, в лунке со средой для окисления глюкозы среда имеет пузырьки газа и желтую окраску. Результаты указывают на то, что по ОР-тесту исследуемые бактерии относятся к груп пе ферментирующих глюкозу бактерий. П р и м е р 3. Готовят среды в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем соотношении;Фосфатный буфер 0,2 лД-глюкоза 20 гХлористый натрий 5 гФеноловый красный 0,014 гДистиллированная вода .До 1 лВ среду для определения окисления глюкозы дополнительно вводят 0,53 пероксида водорода. Исследуемую агаровую культурурамотрицательных бактерий вносят ло одной полной петле в две лунки планшета, содержащего по 0,1 мл питательных сред, В одной лунке находится среда для ферментации глюкозы,содержащая 2 Е Д-глюкозы в буферной основе, в другой - среда для окисления глюкозы, содержащая 22 Д-глюкозы и 0,57 перекиси водорода в буферной основе. Культуры перемешивают, планшето помещают в термостат лри 37 С на 60 мин, после чего учитывают результаты. В лунке со средой для ферментации глюкозы сохранилась исходная красная окраска среды, а в лунке со средой для окисления глюкозы имеются пузырьки газа и желтая окраска, Результаты свидетельствуют о том,что по ОР-тесту исследуемые бактерии относятся к группе окисляющих (но неферментирующих) глюкозу бактерий.Результаты определения ОУ-теста ло данному способу показывают, что все фермеитирующие глюкозу штаммы бактерий (энтеробактерии, вибрионы) завершают ее ферментацию в сроки 20 50 мин, все окисляющие глюкозу штаммы (псевдомонас, ацинетобактер и другие) завершают ее окисление в сроки 10-80 мин, лри этом в течение до 60 мин - 95,84 1 1,837 бактерий Ряецйошопая аеги 1 лояа и 1007. штаммов прочих видов, а в течение 80 мин 1 ООХ штаммов всех видов. В эти же сроки все штаммы неферментирующих и неокисляющих глюкозу бактерий дают четкие отрицательные результаты.Сопоставление результатов определения ОР-теста по данному способу и способу-прототипу Хью-Лейфсона.показывает полное совпадение результатов у всех штаммов, но результаты получают в более короткий промежуток времени.Формула изобретенияСпособ определения окисления и ферментации глюкозы грамотрицательными микроорганизмами путем посева исследуемого микроорганизма параллельно в две среды, содержащей фосфатный буфер, хлористый натрий, Д-глюкозу, индикатор и дистиллированную воду, с последующим инкубированием посевов и оценкой результатов по изменению окраски сред, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения способа,0,2 л 10-30 г 46 г О 0,012 - 0,016 г Составитель Г,СмирноваРедактор М.Петрова Техред М.Ходанич Корректор М,Максимишинец Заказ 6568/31 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 1 О 1 5 1518374.6 инкубирование проводят в течение 60 - Дистиллированная 80 мин, при этом ферментацию глюкозывода До 1 л определяют на среде, содержащей в ка- окисление глюкозы определяют на той честве индикатора феноловый красный, же среде в присутствии пероксида вопри следующем количественном соотно- дорода в концентрации 0,1-0,7 Х к шенин компонентов: объему среды и при изменении цветафосфатнъй буфер рН 7,6 сред на желтый определяют ферментациюЛ-глюкоза глюкозы, а при изменении цвета и налиХлористый натрий чии газообразования только в среде,феноловый красный содержащей пероксид водорода,определяют окисление глюкозы.