Способ определения активности тимуса

(51) 5 С 01 И 33/53/ И 33/4 РЕТЕНИЯ д.,с .с, дсс; ИЕ ОПИСА СВИДКтЕЛьСТВ 90.Бюл. У 352/28-1486ут клинической 6) 23,09 40710 22.05 Кисти О АМН В.С.К 615.3 Ч 1 ноломононуквзвесью 22 клето м. Ос(71) гии (72) (53) (56) об к 975 ой окентют вновь Опреде озеткоо еткообр.А.у. 7СПОСОСАИзобрии. Цел ю опредемуса. Ес,25, тоункцию лог цине чесиии мевано пии, цииы тальных(т-РОК) лексныхк-РОК) по- ределяют е 66 Для .рана (Энят не с конс абораъема),ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ПНТ СССР жевников и В.П.Ловов5(088.8)Л.Е., 1 пвейу С,Я., Со"гос. М. Асад. Яса, 08 А 1Я 3, р. 1175-1178,ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ение относится к имиуно"изобретения - повышение Изобретение относится к медиа именно к исследованию биологиких материалов иимунологическтодами. Оно может быть испольэов клинической иммунологии, терехирургии и других областях медив диагностических целях.Целью изобретения является пов, шение точности способа.Поставленная цель достигаетсяза счет того, что кроме тоЕ-розеткообразующих клетокопределяют количество компрозеткообраэующих клеток (каэатель функции тииуса оп .по формуле тРОКПФТкРОКхбЬсреднее значение т-РОК у здоровых людей.ФТ от 0,75 до 1,25 диагностимальную функцию тимуса, прй, 1420056 А 1 точности способа. Суспен леарных клеток смешивают эритроцитов барана, Смес осаждают центрифугирован инкубируют, суспендируют рифугируют и инкубируют. количество комплексных р ,зующих и тотальных Е-роз щих клеток. По их отноше ляют показатель функции ли показатель равен 0,75 диагностируют нормальную тимуса. ПФТ "- 0,75 - недостаточную, при ПФТ ( 1,25 - повьппенную. С:Способ осуществляется следующим образом,Мононуклеарные клетки (МНК) выделяют их 5 мл венозной крови, стабилизированной гепарином (250 ед/мл), наслаивают на 3 мл раствора верогра фин-фиколл (б = 1,082 г/см). После . 4 ю центрифугирования при 400 8 40 мин 1") ИНК собирают пипеткой с поверхности ЯД раствора верографин"фиколл и трижды ф отмывают: первый раз при 400 я 10 мин, второй при 200 а 5 мин (в забуференнои физрастворе) и третий - при. 200 к 5 мин в среде 199. Клетки суспендируют в 1 мл среды, подсчиты- ),Э вают в камере Горяева и разводят ессй средой до концентрации 2,5 10 кл/мл.б приготовления эритроцитов ба- Б) веноэную кровь барана храболее двух недель после э ервантом (153 от общего обиспользуют трижды отмытые средой 199 (первая и вторая отмывки при 200 е 5 мин, третья - при 400 я 5 мин) ЭБ в виде 17.-ной суспенэии (О 1 мл осад-,1 5 ка ЭБ плюс 9,9 мл среды).Для проведения реакции роэеткообразования 0,2 мл суспензии ИНК смешивают с 0,2 мл взвеси ЭБ в двух пробирках, смесь клеток .осаждают центри фугированием при 200 8 5 мин. Для подсчета к-РОК осадок инкубируют при 37 ОС 1,5 ч, суспендируют энергичным встряхиванием до получения гомогенной суспенэии (без видимых на глаз сгустков), вновь центрифугируют при 200 я 5 мин и инкубируют при 4 С.16-18 ч, Перед подсчетом удаляют 0,2 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачивани ем пробирки (обычно 10-15 движений), каплю полученной суспензия помещают на предметное стекло и накрывают покровным, При 300-400 увеличении нод воздушной щчмерсией подсчитывают 25 количество лимфоцитов с 3 и более нрикрепившимися ЭБ (розетки) на 100- 200 лимфоцитов. Для определения т-РОК осадок ИНКи ЭБ (вторая пробирка инкубируют при37 С 15 мин и при 4 С 16-18 ч, послечего готовят препарат для подсчетаи считают розетки, как описано вышедля, Х к-РОК,Показатель Функции тимуса опреде"ляется по формулетРОКПФТ =КРОК 66где 66 - среднее значение т-РОК у40здоровых доноров, равное 663.Из формулы следует, что НФТ учитывает интенсивность продукции Е-рецептора Т-лимфоцитами (т-РОК) н45 количество предшественников Т-лимфоцнтов (к-РОК)несущих только структуру для реабсорбцин Е-рецептора.Прн снижении функции тимуса увеличивается количество предшественников Т-лимфоцитов., при повышении. функции тимуса увеличивается интенсивность Продукции Е-рецептора Т-лимфоцитами, а количество предшественников уменьшается. При ПФТ от О, 75 до 1,25 диаг ностируют нормальную функцию тнмуса, при ПФТ0,75 - недостаточную, прн ПФТ1,25 - повышенную П р и м е р 1, Больная К., тяжелая миастения. Определены 7. тотальных и комплексных роэеткообраэующих клеток (т-РОК и к-РОК), по Формуле вычислей ПФТ.ПФТ = 0,90, Функция тимуса оценивается как нормальная (ПФТ у здоровых людей от 0,75 до 1,25).П р и и е р 2. Та же больная, через 5 месяцев после удаления тимуса.Определены 7 тотальных и комплексныхРОК,. по формуле вычислен ПФТ,ПФТ = 0,21, Функция тимуса оцени-.вается как сниженная.В данном случае резко замедленпроцесс дифференцировки Т-лимфоцитоввследствие удаления тимуса. В периферической крови резко снижено количество зрелых Т-лимфоцитов, несущихЕ-рецептор, тогда как общее количество Т-лнмфоцитов (зрелых, несущихЕ-рецептор, и незрелых, не несущихЕ-рецептор, но имеющих структуру дляего реабсорбции) остается высоким.П р и и е р 3. Больному П, проведен курс лечения Т-активином. Дои после лечения определялись Ж тотальных и комплексных РОК, по форму,ле вычислен ПФТ.ПФТ до лечения = 0,80,ПФТ после последней инъекцииТ-активина = 2,52. В данном случаефункция тимуса оценивается как повышенная, что связано с усилением дифференцировки Т-лимфоцитов под влиявием зндоганного тимического фактораи экзогенного - в виде Т-активина.Предложенный способ позволяет/ф более точно оценивать активность тимуса. Более высокая точность предлагаемого способа достигается преимущественно за счет того, что можнооценить не только нормальную и пониженную (как по способу-прототипу),нон повышенную Функцию тимуса.Кроме того, предлагаемый способне требует специальных стимулятороврозеткообразования, аутоплазмы илитимусных факторов, что значительноупрощает спОсОбаФ о р м у л а и э о б р е т е н и яСпособ определения активности тимуса, включающий выделение лимфоцитов иэ крови, инкубацию их с эритроцитами барана с последующим опреде,ВОИИПИ Государственного комитета по,изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Рауиская наб., д. 4/5 ЮЮ Производственно-издательский комбинат "Патент", г,уагород, ул. Гагарина, 1015 1470056 6леиием количества розеткообразувари ду нинн н при снихении отионения и клеток, несущих на своей поверхнос- количества лимфоцитов, несущих Е-рети Е-рецептор, о т л и ч а ю щ н 1- цептор, по сравнению с нормой с я тем, что, с целью повыиения точ- з определяют пониаенную функцию тиности способа, дополнительно в крови муса, а при увеличении отнощения и больных определяют обиднее количество . сникении количества лнмфоцитов, несу- Т"ливюфоцитов, несущих и не иесуври щнх и не несущих Е"рецептор, - пьвм- И-рецептор, внчисляют отновение меа- аенную функцию тииуса.