Способ моделирования эпилепсии

СОЮЗ СОНЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 487 1) 4 С 09 В 23/28 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН Т К АВТОРСКОМ,Ф СВ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ ИОТКРЫТИИ(56) КаграК Б,Е. еС а 1. АцИяегцш1 о Ъгаы дацдНояЫея ргойтсея гессцггеп 1 ерПерИГогце асИчИу. Ясепсе 1969, 194, 660-662,(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЭПИЛЕПСИИ(57) Изобретение относится к экспе-,риментальной медицине. Цель изобретения - повьппение воспроизводимостиспособа, Животным в течение 20-25дней ежедневно однократно вводятсубконвульсивную дозу коразола. Настадии развития эпилептиформных проявлений удаляют головной мозг у животных и замораживают его. Замороженную ткань помещают в гомогенизаторс уксусной кислотой и выдерживают вкипящей бане. Ткань диспергируют.Суспензию охлаждают и центрифугируют.Доводят рН надосадочной жидкости до7,0. Осадок отделяют Фильтрованиеми полученный раствор лиофилизируют.На кору головного мозга животных апплицируют полученные кристаллы.Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть ис- о пользовано для изучения патофизиологических механизмов развития эпилеп 5 тического синдрома.Цель изобретения - повышение вослроизводимости способа.Способ осуществляется следующим образом. 10Крысам в течение 3 недель ежеднев" но однократно вводят субконвульсивную дозу коразола (25-30 мг/кг).При этом отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от 5 единичных миоклонических вздрагиваний отделъных мышц до повторяющихся клонико-тонических судорог с падением животных на бок, вегетативными.расстройствами и постприступной депрес сией. На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг с моз-, жечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при -20 С. 25 Замороженную ткань помещавт в гомогенизатор, содержащий 1 М уксусную кислоту, нагретую до 90 С, гомогенизатор выцерживают 5 мин в кипящей бане, а затем диспергируют ткань стеклянным 30 пестиком 10 мин 9). В некоторых опытах используют экстракцию хлороформметанольной смесью (10), Суспензию охлаждают и центрифугируют при 10000 об/мин 15 мин К). Надосадочную жидкость отбирают и доводят рН до 7,0 концентрированным раствором аммиака, Осадок отделяют фильтрованием, полученный раствор лиофилизируют. Полученные кристаллы аппли цируют на кору головного мозга экспериментальных животных. Наблюдают развитие в зоне аппликации эпилептических потенциалов типа спайковых разрядов, а также острых волн. 45П р и м е р 1. Крысам линии Вистар массой 250-300 г в течение 20 дней ежедневно однократно внутри-, брюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (30 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпи.пептиформных проявлений от отдельных миоклонических вздрагиваний до повторных генерализованных клонико-тонических судорожных припадков с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией, На этой стадии развития эпи" лептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг смозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при-20 С. Замороженную ткань помещаютов гомогенизатор, содержащийМ укРсуснув кислоту, нагретую до 90 С,гомогенизатор выдерживают 5 мин в кипящей бане, а затем диспергирувтстеклянным пестиком 1 О мин. Суспензив охлаждают и центрифугируют Hри10000 об/мин 15 мин. Надосадочнуюжидкость отбирают и доводят рН до7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяют фильтрованием,полученный раствор лиофилизируют.Полученные кристаллы хранят при-20 С. Кошке весом 2,7 кг под эфирным наркозом проводят трахеотомию,трепанацию черепа, вскрытие твердоймозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путемвведения миорелаксантов. Через 2,5 чпосле прекращения подачи эфира напереднюю сигмовиднув извилину апплицируют кристаллы экстракта. Через5,5 мин в зоне аппликации отмечаетсяпоявление спайковых разрядов амплиту"дой 500-800 мкВ и частотой 7-10 в секунду, а также острых волн амплиту"дой 500-700 мкВ, возникающих с частотой 1-4 в секунду, сгруппированныхв "пачки" разрядов длительностью10-15 с,П р и м е р 2, Крысам линии Вистар массой 250-300 г в течение 25дней ежедневно однократно внутрибрюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (30 мг/кг), Отмечаютпостепенное нарастание тяжести эпи-лептиформных проявлений от отдельныхмиоклонических вздрагиваний до повторнйя генерализованных клонико".тонических судорожных припадков с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступнойдепрессией, На этой стадии развитияэпилептиформных проявлений животныхдекапитируют, удаляют головной мозгс мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при-20 С. Замороженную ткань помещаютв гомогенизатор, содержащий 1 М уксусную кислоту нагретую до 90 С,гомогенизатор выдерживают 5 мин в кипящей баке, а затем диспергируют атеклянным пестиком 1 О мин. Суспензиюохлаждают и центрифугируют "-при0000 об/мин 15 мине Надосйдочную1444872 жидкость отбирают и доводят рН до 7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяют.фильтрованием, полученный раствор лиофилизируют. Полученные кристаллы хранят при -20 С. Крысе массой 290 грамм под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное . 10 переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 3,0 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга апплицируют кристаллы экстракта. Че рез 6,0 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амплитудой 400-900.мкВ и частотой 7-10 в секунду, а также острых волн амплитудой 400-600 мкВ, возникающих 20 с частотой 2-3 в секунду, сгруппированных в "пачки" разрядов дли"гельностьи 10-20 с.П р и м е р 3. Крысам линии Вистар массой 250-300 г в течение 20 дней 25 ежедневно однократно внутрибрюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (25 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от отдельных миоклоничес ких вздрагиваний до повторных генерализованных клонико-тонических судорожных припадков с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постпристуcной депрессией, На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, а затем готовят экстракт, Полу,ченные кристаллы хранят при -20 С.Кролику массой 2,37 кг под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 2,5 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга апплицируют кристаллы экстракта. Через 6,5 мин:в чоне аппликации отмеча О ется появление спайковых разрядов амплитудой 650-.1000 мкВ и частотой 8-11 в секунду, а .также острых волн амплитудой 500-650 мкВ, возникающих с частотой 2-5 в секунду, сгруппированных в "пачки" разрядов длительностью от 5-10 до 20-30 с.Ф П р и м е р 4, Крысам линии Вистар массой 250-300 г в течение 25 дней ежедневно однократно внутрибрюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (25 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от отдельных миоклонических вздрагиваний до повторных генерализованных клонико-тонических судорожных приступов с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией. На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируит, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при -20 С, приготавливают экстракт. Морской свинке массой 280 г под эфирным наркозом проводят трахеотомию, фтрепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 3,0 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга апплицируит кристаллы экстракта, Через 5,0 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амплитудой 400-800 мкВ и частотой 6 10 в секунду, а также острых волн амплитудой 400-600 мкВ, возникающих с частотой 1-5 в секунду, сгруппированных в "пачки" разрядов длительностью 10-20 с.Предлагаемый способ позволяет воспроизводить модель эпилепсии в 1 ООХ экспериментов, тогда как прототип только в 10-40 Х. Формула изобретения Способ моделирования эпилепсии путем воздействия веществами пептидной природы на головной мозг экспериментальных животных, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, группе животных дополнительно ежедневно в течение 20-25 дней однократно вводят коразол в субконвульсивной дозе, затем из мозга этих животных выделяют пептиднуи фракцию и прбизводят аппликации этого вещест- ва на кору головного мозга экспериментальных животных.