Способ получения ингибитора трипсина

,8014409 ЕСПУБЛИН дц 4 С 12 М 11/О РСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР М ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ т1 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ выитакже ипсина, апособ закл очистки ингибитора тускорение процесса.ся в адсорбции ингибиз коричневого соканом сорбенте, предстполивиниловый спирт ора трипсцерны наляющем солокнистой инааффинтносит айти пр(7 1) Ленинградский институт текстильной и легкой промьполенностиим. С.М.Кирова(56) Хорунжина С,И. и др. Исследования процесса сорбции трипсина карбоксилсодержащими поливинилспиртовымиволокнами, ЖПХ, т. 1, вып. 1, 1977,с. 195-196.М 1 яяоп К., МояЬасЬ К. р-То 1 пепеяц 1 йопу 1 с 1 гЫе ая ап асгучагоп аяепоЕ аеагояе аког Ье ргерагайъоп.ойдшшоЬд 1 дкей аГГ 1 п 1 у 1 Цапйя апйргогехпя. - Еигор, 3. ВосЬеш.р1980, ч, 112,2, з. 397-402.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРАТРИПСИНА(57) Изобретение о ся к биотехнологии и может н именение при выделении ингибитора трипсина ссокой степенью чистоты в биохимикой промышленностиЦель изобрения - повышение выхода и степен труктуры, предварительно активироанный п-толуолсульфохлоридом, соержащий 47-60 мг трипсина на 1 г сухого сорбента, и в последующеи десорбции целевого продукта. Применение данного способа позволяет увели- Я вить выход от 28 до 31-382 и степень очистки ингибитора от 105 до 150 " 159 рав, а также ускорить процесс.Способ может быть использован для вы.деления ингибитора из многотонажного сырья по эффективной технологической схеме благодаря дешевизне и хорошим 81 фа фильтрующим характеристикам волокнис- ДаЬ того поливинилового спирта. 1 табл. 48 ЬСРИзобретение относится к биотехнологии и может найти применение нри выделении ингибитора трипсина с высокой степенью чистоты в биохимической промьпдленности.Цель изобретения - повьппение выхода и степени очистки ингибитора, а также ускорение процесса.Способ заключается в ",ом, что для .10 получения ингибитора из субпродукта производства протеинового зеленого концентрата люцерны " коричневого сока путем адсорбции на аффинном сорбенте, в качестве такого сорбента используют поливиниловый спирт (ПВС) волокнистой структуры, а содержание трипсина устанавлюзают равным 47-60 мг трипсина на 1 г сухого сорбента, причем иммобилизацию трип сина проводят с помощью ковалентного связывания с активированным и-толуолсульфохлоридом поливиниловым спиртом. При одинаковом содержании трипсина (60 мг/г сухого полимера) известный 25 сорбент, полученный на основе полисахарида (сефарозы СЬВ) позволяет повысить чистоту ингибитора трипсина в 105 раз, в то время как БВС обеспечивает очистку его более чем ;30 в 150 раз. При этом выход ингибитора трипсина по активности составляет от 28 и до 31-38% соответственно.Волокнистая структура ПВС позволяет регулировать скорость прохождения препарата, содержащего ингибитор трипсина (коричневый сок, полученный из вегетативной массы люцерны), через слой сорбента, сократить длительность отмывки его от неспецифи чески сорбированных белков, а также значительно сократить время десорбции ингибитора трипсина с 240 мин при применении трипсинсодержащей сефарозы СЬ - 6 В до 90 мин при использовании трипсинсодержащего ПВС в виде волокна. Способ иллюстрируется следующими примерами.50П р и м е р 1. 1 г свежесформованного ПВС волокна отмывают ацетоном от замасливателя и подвергают набуханию в пиридине при 40 С в те чение 30 мин, после чего обрабатывают 10%-ным раствором и-толуалсульфохлорида в пиридине при 4 С в течение 20 мин, Полученное ПВС волокно, содержащее 0,015 ммоль/групп толуолсульфата, обрабатывают при рИ 8,5 раствором трипсина с концентрациейо1 мг/мл при 40 С в течение 60 мин, Получают трипсинсодержащее ПВС волокно, в котором фермент в количестве 10 мг (04 х 10 кчоль) занимает место толуолсульфата. Количество прореагировавших гидроксильных групп ПВС при степени полимеризации СПв среднем составляет п = 2 1. Продукт промывают дистиллированной водой и обрабатывают 100 мл коричневого сока люцерны, содержащего ингибитор трипсина, который с иммобилизованным трипсином образует комплекс. Разрушение этого комплекса (десорбцию) осуществляют 50 мл О, 1 НС 1, активность ингибитора трипсина в растворе составляет ,3% от исходной, а удель. ная активность повышается в 173 раза. Остальные примеры исполнены аналогично.Результаты исследований сведены в таблицу.Анализ данных таблыы показывает, что увеличение времени обработки отмытого от замасливателя и обезвоженного ацетоном ПВС-волокна после нао бухания в пиридине при 40 С, 10%-ным раствором п-толуолсульфохлорида в пиридине приводит к возрастанию содержания групп толуолсульфата от 0,015 ммоль/г до 0,07 ммоль/г, При взаимодействии,с трипсином происходит замена активированных групп толуолсульфата на белок, в связи с чем содержание трипсина в ПВС увели" чивается с 10 до 75 мг/г. Использование трипсинсодержащего волокна для выделения ингибитора трипсина из коричневого сока показывает, что увеличение содержания трипсина в ПВС влечет за собой увеличение выхода ингибитора трипсина с 7,8 до 39% от начального содержания в коричневом соке. Степень очистки выделенного ингибитора трипсина уменьшается, Учи тывая это, оптимальное количество трипсина в ПВС составляет от 47 до 60 мг/г сухого сорбента. Таким образом, использование предлагаемого изобретения позволяет получать ингибитор торипсина из коричневого сока люцерны с большим выходом (31-38% вместо 28%) и с повьппенной степенью очистки (150-159 вместо 105), а также значительно уско0924 Характеристика процесса очистки ннгибитора трипсинаселективными сорбентами с различным содержанием Н аиме нов аниеобразца трипснна 1 Коричневы сок Ю 10 0,4 101,03 10 20 0,05 30 0,027 0,0 0,13 50 47 1,88 1 О 1 60 2,40 10 1 72 2,881 О 1 0,04 4в5 50 0,1 20 60 . 0 6 139. 9 0 1 Э 9 .1 Э 9 9 О,3,10 20 0,08 7 75 3,10 10 17 16 180 0,0 1,15 СефароСЬ0 15,0 10 аз 6143/29 тираж 520 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектна 3 144 рить процесс (на стадии десорбции с 240 мин до 90 мин).,Одновременно волокнистая структура данного полимера обеспечивает осуществление технологического процесса выделения биологически активного препарата из многотоннажного растительного сырья по непрерывной схеме с использованием простых технических решений (фильтры из нетканого материала) с сокращением времени проведения процесса. Формула изобретения Способ получения ингибитора трипсина, включающий адсорбцию ингибитора трипсина из субпродукта производства протеинового зеленогО концентрата люцерны - коричневого сока на аффинном сорбенте, содержащем трипсин, ковалентно связанный с нерастворимым органическим носителем, активированным п"толуолсульфохлоридом, и десорбцию целевого продукта, о т - 10 л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения выхода и степени очистки ингибитора трипсина, а также ускорения процесса, в качестве аффинного сорбента используют поли виниловый спирт волокнистой структуры, а содержание трипсина устанавливают равным 47-60 мг трипсина на 1.г сухого сорбента.