Питательная среда для культивирования бактерий кlевsiеllа рnеuмоniае вкпм в-1823 продуцента рестриктазы крп i

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при получении из биомассы рестрикционной эндонуклеазы для биотехнических работ 5 и биохимии.Цель изобретения - повышение выхода биомассы.Приготавливают питательную среду из расчета нал следующим образом. О Пептон и дрожжевой экстракт взвешивают и растворяют в 200 мл воды, кипятят 15-20 мин, охлаждают, доводят рН . до 7,0-7,2 и осадок отделяют на центрифуге при 6000 об/мин в течение 15 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в мерный сосуд, добавляют соли, глюкозу, воду до метки. Проверяют рН среды, при необходимости доводят до 7,0-,2 и стерилизуют при давлении 20 в 1 атм в течение 30 мин.Результаты культивирования клеток в средах 1-4 представлены в табл. 1,Как видно из данных табл. 1, через 5 ч,клетки растут следующим об разом. В средах 2 и 3 с меньшей кон-. центрацией компонентов рост хуже изЗа начинающегося голодания клеток, В среДе 4 с большей концентрацией компонентов рост не улучшается по отношению к росту клеток на среде 1. Следовательно, выбранная концентрация компонентов среды 1 является оптимальной.П р и м е р 1. Для сравнения выхода сырой биомассы проводят параллельНое культивирование К.рпецшопае (ОК 8) ВКПМ Вв предлагаемой среде и контрольной среде (известное). Предлагаемая среда, г/л: глюкоза 6,5; 40 пептон 17; дрожжевой экстракт 13; На НРО . 8,7; ИНС 1 4,0; МАЗО НО 0,02, вода дистиллированная до 1 л. Среда (контроль), г/л: глюкоза 1; ИаС 1 10,0; дрожжевой экстракт (ЭНсо) 45 5; бакто-пептон (Метео) 10, вода дистиллированная до 1 л, рН сред 7,0. Выращивание проводят в качалочных колбах Эрленмейера объемом 750 мл в 200 мл среды при 37 С с качанием 200- 250 об/мин. Оптическую плотность суспензии клеток выражают в оптических единицах (о.е.) и замеряют на приборе фотоэлектрокалориметр КФКпри длине волны 540 нм в кювете толщиной 5,05 мм. Пробы отбирают одновременно.55Результаты представлены в табл.2,По результатам табл. 2 видно, что .рост клеток на предлагаемой среде вФормула изобретения Питательная среда для культивиро" вания бактерий К 1 еЬве 11 а рпецшоп 1 ае ВКПМ В- продуцента рестриктазы Крп 1, содержащая глюкозу, пептон, дрожжевой экстракт, минеральный источник натрия и хлора и дистиллированную воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения выхода биомассы, она дополнительно содержит сернокислый семиводный магний, в качестве источника натрия - двузамещенный фосфорнокислый натрий, а источника хлора - хлористый аммоний, при следующем соотношении компонентов, мас, 7,: 0,60-0,65 1,6-1,7два раза лучше, чем на известной.Кроме того, эксперименты показалипрямую корреляционную зависимостьмежду ростом клеток и накоплением фермента, поэтому клетки осаждают изкультуральной жидкости к концу логарифмической фазы роста. Выход сыройбиомассы на предлагаемой среде в 3-5раз выше, чем на известной, Следовательно, и общий выход фермента выше.Концентраций рестрикционной эндонуклеазы Крп 1 в грузом клеточном экстракте после разрушения клеток ультра"звуком составляет ,-10-18 10 усл.ед,на 1 г .сырой биомассы. За единицуактивности принимали минимальное количество фермента, необходимое дляполного гидролиза 1 мкг ДНК фага 3опри 3 С за 5 мин. Рестрикционныеэндонуклеазы, получаемые из биомассы,являются ценными препаратами, используемыми для научных исследований,к ним предъявляются высокие требования по активности и чистоте,Таким образом, питательная средавключает компоненты, используемыев микробиологической промышленности,Совокупность компонентов в предлагаемой среде, подобранной по результатамдвухэтапного дробно-факторного эксперимента на ЭВМ, позволяет получатьклетки К,рпецшопае ОК 8 в количестве 20-30 г с 1 л среды,1402615 О, 015-0,020 0,85-0,87 Остальное Т а б л и ц а 1 Результаты культивирования К,рпепшопае ОК 8 Среда Оптическая плотность, оптические единицы, при времени культивирования, ч 3 5 6 1007 21 27 37 1,5 0,28 0,7 1,9 2,3 2,8 0,27 0,7 1,6 1,7 2,5 0,26 0,7 2,1 2,7 3,2 0,27 Таблица 2Концентрация клеток К.рпелпопае ОК 8на предлагаемой среде и . известной Выход сырой биомассы, гпредла- контгаемая роль предла- контгаемая роль 4,5 3,1 1,9 4,6 2,9 24 8,0 4,0 Составитель И. ПриваловаРедактор Н. Киштулинец Техред А,Кравчук . Корректор С. Шекмар Заказ 2826/18 Тираж 520 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб.д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ДвузамещенныйфосфорнокислыйнатрийСернокислый Времяроста,ч Оптическая плотность куль"гуры (о.е) в среде семиводныймагнийДистиллированная вода 4 36 . 420-30 6-7