Способ определения содержания плазминогена в плазме крови

)4 С 01 И 33/4 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ И АВТОРС 14 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(56) Хватов В,Б Петренко О.А. Получение специфического субстрата - плаэминогена человека для количественного определения активатора плазминогена , в плазме крови внезапно умерших. Проблемы гематологии и переливания крови, 1975, Ф 6, с. 57-60, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПЛАЗМИНОГЕНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к способам ,определения биологически активных,. 801386902 соединений (БАС), предназначено длягематологии, физиологии, биохимии,кардиологии. Цель изобретения - повышение точности способа при определении БАС у животных. Для этого к плазме крови крысыразведенной физиоло"гическим раствором в соотношении 1:71:24, добавляют одинаковое количество взятых в равных соотношениях растворов эуглобулиновой фракции, которуювыделяют из плазмы крови человека иразводят боратным буфером до 25-757 ной концентрации, и стрептокиназы вконцентрации 150-400 МЕ, Способ позволяет определить соединение плазминогена у человека и животных.Изобретение относится .к способам определения биологически активных соединений и может быть использовано в гематологии, физиологии биохимии, кардиологии.Целью изобретения является повыше ние универсальности и точности способа при определении у животных.К плазме крысы, разведенной физио логическим раствором в соотношении 1:7-1:24, добавляют одинаковое количество взятых в равных соотношениях растворов эуглобулиновой фракции, ко" торую выделяют из плазмы крови чело века известным способом и разводят боратным буфером до 25-75 -ной концентрации, и стрептокиназы в концентрации 150-400 МЕ.П р и м е р 1. Плазму крысы раэ водят физиологическим раствором в соотношении 1:7, т.е. концентрация плазминогена соответствует верхней границе допустимого диапазона, К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0,05 мл 25 (400 МЕ) стрептокиназы и 0,05 мл 75%-ной эуглобулиновой фракции иэ плазмй человека, инкубируют 10 мин при комнатной температуре, добавляют 5 .-ный раствор казеина, смесь инкубируют 3 ч при 38 С, реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют при 12 тыс. об/мин и спектрофотометрически определяют продукты расщепления казеина плазмином.уровень ,плаэминогена в плазме крыс получают равным 26 КЕ. П р и м е Р 2 Плазмы крысы разводят физиологическим раствором в со отношении 1:24, т.е. концентрация плазминогена соответствует нижней границе допустимого диапазона. К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0,05 мл (150 МЕ) стрептокиназы и 0,05 мл45 25%-ной эуглобулиновой фракции иэ плазмы человека, инкубируют б мин при комнатном температуре, добавляют ЗЕ-ный раствор каэеина, смесь инкубируют 1 ч при 36 С, реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют 50 при 8 тыс,об/мин и определяют продукты расщепления казеина на спектрофотометре. Уровень плаэминогена получают равным 22 КЕ.55П р и м е р 3, Плазму крысы раз"водят физиологическим раствОром в соотношении 1:19, т,е, концентрация плачплазминогена соответствует среднему значения диапазона. К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0,05 мл 200 МЕ) стрептокиназы и 0,05 мл 50 -ной эуглобулиновой фракции, инкубируют 7 мин при комнатной температуре, добавляют 4 .-ный раствор каэеина, смесь инкубируют 2 ч при 37 С, реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют при 10 тыс.об/мин и спектрофотометрически определяют продукты расщепления казеина плазмином. Уровень плазминогена получают равным 27 КЕ, что соответствует.максймальному значению концентрации плазминогена в плазме крыс.Повышение точности способа достигается тем, что добавление в пробу, содержащую стандартные количества стрептокиназы, такой же конструкции эуглобулиновой Фракции человека приводит к образованию постоянных количеств активатора, а также подбором соответствующего разведения исследуемой плазмы, Это дает возможность получать точные и хорошо воспроизводимые результаты с высокой статистической достоверностью, которые отражают истинное содержание плазминогена в крови,Повышение универсальности достигается тем, что использование эуглобулиновой фракции человека устраняет видовую специфичность стрептокинаэы и позволяет определять содержание плазминогеиа не только в крови человека, но и в крови целого ряда животных, Это особенно важно для тех видов, у которых резко выражена видовая специфичность и определение содержания плаэминогена со стрептокинаэой практически невозможно.1 езультаты определения содержания плазминогена в крови человека и животных предложенным способом: человек 17 КЕ + 0,5; кролик - 19 КЕ + 0,3; собака - 20 КЕ + 0,3; крыса - 24,5 КЕ + +0,3; бык - 11 КЕ 1 0,1,Формула изобретенияСпособ определения содержания плазминогена в плазме крови, заключающийся в обработке разведенной физиологическим раствором плазмы крови растворами стрептокиназы и добавлении казеина, инкубации, добавлении хлорной кислоты с последующим спектрофотомет138 б 902 Составитель Н, ЛитвиненкоТехред Л.Сердюкова Корректор С, Черни Редактор О, Юрковецкая Заказ 1491/43 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 4Ф рированием надосадочной жидкости,о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения универсальности и точности способа при определении у живот-5 ных, плазму разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1-1:24, добавляют смесь равных количеств 25752-ной зуглобулиновой фракции кровичеловека и 1 50-400 МЕ стрептокиназы.