Способ удаления т-лимфоцитов из суспензии мононуклеарных клеток человека
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1577520
Авторы: Ермолович, Кожевников, Лозовой
Формула
СПОСОБ УДАЛЕНИЯ Т-ЛИМФОЦИТОВ ИЗ СУСПЕНЗИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА, включающий добавление интактных эритроцитов барана к суспензии мононуклеарных клеток для образования розеток, последующее осаждение розеток на градиенте плотности Т-лимфоцитов в растворе верографин-фиколл, отличающийся тем, что, с целью обеспечения полноты удаления Т-лимфоцитов за счет удаления предшественников Т-лимфоцитов, дополнительно к интактным эритроцитам барана добавляют 22-27% эритроцитов барана, нагруженных Е-рецептором.
Описание
Цель изобретения обеспечение полноты удаления Т-лимфоцитов за счет удаления предшественников Т-лимфоцитов.
Сущность изобретения заключается в том, что очищенную от Т-лимфоцитов популяцию получают удалением розеток, образовавшихся с эритроцитами барана, в которые добавлено 22-27% эритроцитов барана, нагруженных Е-рецептором, в связи с чем в розеткообразовании участвуют не только зрелые, несущие Е-рецептор Т-клетки, но и их предшественники, которые не несут Е-рецептор, но имеют структуру для его реабсорбции; розетки удаляют в растворе верографин фиколл.
П р и м е р. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяют из периферической крови, стабилизированной гепарином (250 ед/мл), методом градиентного центрифугирования в растворе верографин фиколл. Получение Е-рецептора проводят путем инкубации МНК в концентрации 2,5 х 106 кл./мл на водяной бане при 45оС в течение 30 мин, добавления равного объема среды 199 (подогретой до 45оС) и инкубации еще в течение 30 мин при 45оС. Затем клетки осаждают при 400g 10 мин, надосадок замораживают, используя по мере необходимости в качестве источника Е-рецептора.
Розеткообразование: к 0,5 мл МНК (10 х 106 кл./мл) добавляют 0,15 мл 10% -ной взвеси ЭБ, 0,1 мл 5%-ной взвеси ЭБ-Ер и 0,25 мл 2%-ного раствора желатина в среде 199. Смесь клеток перемешивают, осаждают при 200 g 10 мин и наблюдают 40 мин при комнатной температуре.
Получение ЭБ-Ер: кровь барана трижды отмывают средой 199 и готовят 10% -ную взвесь. Часть взвеси инкубируют с равным объемом Е-рецепторсодержащего надосадка клеток при комнатной температуре в течение 1 ч.
Выделение "не Т"-клеток: после инкубации розеток удаляют 0,8 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачиванием пробирок, добавляют 0,8 мл надосадка, перемешивают и медленно наслаивают на 3 мл раствора верографин фиколл (содержащего 0,25% желатина). После центрифугирования (10 мин, 1000 g, при комнатной температуре) с поверхности раствора собирают клетки, которые трижды отмывают средой 199 и суспендируют для подсчета в 1 мл среды.
Предлагаемый способ позволяет получить более чистую популяцию "не Т"-клеток, содержащую в семь раз меньшее количество малодифференцированных Т-лимфоцитов по сравнению со способом-прототипом. Кроме того, в два раза уменьшается и количество зрелых, несущих Е-рецептор Т-лимфоцитов.
Изобретение относится к иммунологии. Целью изобретения является обеспечение точности удаления Т-лимфоцитов из суспензии мононуклеарных клеток человека. Цель достигается путем добавления интактных эритроцитов барана к суспензии мононуклеаров для образования розеток, последующего осаждения розеток на градиенте плотности Т-лимфоцитов в растворе верографин фиколл, причем дополнительно к интактным эритроцитам барана добавляют 22 27% эритроцитов барана, нагруженных Е-рецептором. Способ по изобретению позволяет получить более чистую популяцию "неТ"-клеток, содержащую в семь раз меньшее количество малодифференцированных Т-лимфоцитов по сравнению со способом-прототипом.
Заявка
4445785/14, 20.06.1988
Институт клинической иммунологии СО АМН СССР
Кожевников В. С, Ермолович Е. Ю, Лозовой В. П
МПК / Метки
МПК: G01N 33/53
Метки: клеток, мононуклеарных, суспензии, т-лимфоцитов, удаления, человека
Опубликовано: 10.09.1995
Код ссылки
<a href="https://patents.su/0-1577520-sposob-udaleniya-t-limfocitov-iz-suspenzii-mononuklearnykh-kletok-cheloveka.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ удаления т-лимфоцитов из суспензии мононуклеарных клеток человека</a>
Устройство для удаления газов из водной суспензии бумажной массы
Номер патента: 1384210
Опубликовано: 23.03.1988
Автор: Йони
МПК: A21D 2/26
Метки: бумажной, водной, газов, массы, суспензии, удаления
...движения потока в резервуаре,снабженный несколькими последовательно расположенными струйными трубками 253 для подачи суспензии в резервуарс одного его конца, сборную емкость(не показана), соединенную черезвходной трубопровод 4 с противоположным концом резервуара, трубопровод 5 30удаления избытка суспензии из резервуара и средства 6 для поддержанияпостоянства уровня суспензии в резервуаре и создания в нем и в сборнойемкости вакуумметрического давления.Днище резервуара на конце, где размещена по крайней мере одна струйнаятрубка, имеет конический участок 7.Уровень загрузки массы поддерживается в резервуаре постоянным с помощью перелива 8. Струйные трубки 3 -вертикальные, Число их может меняться в широких пределах.Устройство работает...
Штамм культивируемых клеток почки мини-свиньи, используемый в качестве тест-системы для репродукции и изучения вируса гриппа
Номер патента: 1430403
Опубликовано: 15.10.1988
Авторы: Дмитриева, Исаенко, Машукова, Царева, Юрченко
МПК: C12N 5/00
Метки: вируса, гриппа, изучения, используемый, качестве, клеток, культивируемых, мини-свиньи, почки, репродукции, тест-системы, штамм
...через 8, третийчерез 6 сут. Ввиду увеличения скорости роста к пятому пассажу клеткипересевают через 3-4 сут. Коэффициентрассева 1/3, В дальнейшем клетки культивируют в монослое с применениемсреды Игла МЕМ, содержащей 107. сывороткикрупного рогатого скота,нативной илиобработанной полиэтиленгликолем.Клетки снимают со стекла смесью 0,027-ного версена (1/2-2/3) и 0,257-ногораствора трипсина (1/2-1/3) беэ центрифугирования, дважды обмыв монослой прогретой до 36,5 С смесью ипроинкубировав в течение 5-10 мин.Далее клетки ресуспендируют в свежей среде и рассевают в сосуды длякультивирования с концентрацией100 тыс. кл. в 1 мл. Пересевы осуществляют через 3-5 сут с кратностьюрассева 1:4-1:5,Полученная линия перевинаемых клеток ПСМ имеет следующие...
Способ определения иммунологического состояния организма
Номер патента: 1090409
Опубликовано: 07.05.1984
Авторы: Васенович, Лебедев, Понякина, Рагозина, Шибанова
МПК: A61K 39/00
Метки: иммунологического, организма, состояния
...ресуспендируют, добавляют к ним 0,05 мл 37-ного раствора глутарового.альдегида, выдержива ют 5 мин. Затем в пробирки наливают по 6-10 мл дистиллированной воды, центрифугируют при 200 я 5 мин, надосадочную жидкость сливают, Готовят мазки, сушат на воздухе. Препараты З 5 фиксируют в метаноле, окрашивают метиловым зеленым - пиронином, подсчитывают количество лимфоцитарных розеток на 100 лимфоцитов и нейтрофиль.ных розеток на 100 нейтрофилов. 40 П р и м е р 2. Берут 3 мл крови в центрифужную пробирку, содержащую 0,6 мл гепарина (207 ед. в мл) имл 37-ного раствора желатины переФ45 мешивают. Центрифугируют при 4 я 15 мин. Верхний алой в количестве 1,5 мл собирают в центрифужную пробирку. Приливают среду Хенкса до объема 1 мл, центрифугируют...
Способ определения инсулинорезистентности имунного генеза у больных сахарным диабетом i типа
Номер патента: 1767433
Опубликовано: 07.10.1992
МПК: G01N 33/53
Метки: больных, генеза, диабетом, имунного, инсулинорезистентности, сахарным, типа
...при 1500 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость слили, а из осадков сделали мазки, которые высушили, зафиксирорвали этиловым спиртом в течение 20 мин и окрасили по Романовскому-Гимза, после чего просмотрели в мазках 100 лимфоцитов, отметив среди них число лимфоцитов, фиксировавших на себе три и более эритроцита,При исследовании сыворотки крови больной заявляемым способом в ней обнаружены аутоантитела к инсулинорецепторам, так как сыворотка заблокирована инсулинорецепторы активированных лимфоцитов крови донора и уменьшила число инсулиновых розеток с 55 до 9 , Заключение: на основании данных проведенного анализа поставлен диагноз инсулинорезистентйости иммунного генеза, обусловленной действием антирецепторных антител.П р и...
Способ получения пептидов в виде кислотно-аддитивных солей
Номер патента: 1277903
Опубликовано: 15.12.1986
Авторы: Бела, Дьердь, Иштван, Лайош, Ласло, Ольга, Юлиа
МПК: A61K 38/07, C07K 5/11
Метки: виде, кислотно-аддитивных, пептидов, солей
...тетрапептид (К= - 0,80) растворяют в 25 ип 8 н, НС 1 в диоксане, через 15 мин добавляют к раствору 70 мл безводного эфира, выпавший осадок отфильтровывают, промывают дважды эфиром и растворяют в 30 мл ДМфА. К раствору добавляют триэтиламин до рН 8,0. а затем 2,4 г С 1 р-ОРЕр. Реакционную смесь перемешивают 1 ч, добавляют 100 мл этацола, выпавший продукт отфильтровывают, промывают этанолом (2 " 20 мл), В итоге получают 3,9 г 2-С 1 р-Агц(ИО)-Ьуя (2)-Аяр(ОВя 1)-Ча 1-ОИВ с т.пл . 166- 172 С, К = 0,80.2,2 г 2-С 1 р-Агу(Ю )-Ьуя(2)-Аяр (ОВг 1)-Ча 1-ОИВ суспендируют в 50 мл1277903 качестве сравнительного экспериментасмешивают 200 мкл суспецзии клетоки 400 мкл ВББ.Полученные смеси инкубируют в воздухе, содержащем 5% двуокиси углерода,...
Предыдущий патент: Способ наплавки заготовок
Следующий патент: Способ извлечения золота из содержащих его материалов
Случайный патент: Тренажер