Способ получения анорексогенного средства из сыворотки крови, обладающего эндогенным эффектом насыщения для регулирования потребления пищи через центральную нервную систему

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК НЮ 04 А 61 К 35/ з ф САНИЕ И ЕТЕНИ У 21Ведьесети Дья Хуба Калас, Надь (НП) /55(088.8)ИЯ АНОРЕКСОГЕНВОРОТКИ КРОВИ, НЫМ ЭФФЕКТОМ НАОВАНИЯ ПОТРЕБЛЕ НУЮ НЕРВНУЮ СИС ИЯЕ(57) Изобрет не, а именно мии, предназ средства, об фектом насыщ регулированисыворотки кр бретения - в крови челове ци сится к м ативной б я получен эндоген централь ние от к преп ачено адающе ния дл ного ления пищи, и века. Цель из ви чел делени из сыворотки тва гликопептида вещ ГОСУДАРСТВЕННЫИ НОМИТЕТ СССРпо делАм изОБРетений и ОтнРытий(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕННОГО СРЕДСТВА ИЗ СЬОБЛАДАЮЩЕГО ЭНДОГЕСЫЦЕНИЯ ДЛЯ РЕГУЛИРПИЩИ ЧЕРЕЗ ЦЕНТРАЛЬ ной природы - сатиетина, обладающего избирательным воздействием на сигнал насыщения и ингибирующим потребление пищи в опытах на крысах, непотребляющих пищи 96 ч. Для этогопроводят ультрафильтрацию сывороткичеловека через мембранный фильтр поддавлением 3 атм с размерами пор, пропускающими вещество мол.м, 1000050000 дальтон. В результате сыворотка разделяется на 2 фракции: "низкомолекулярных" и "высокомолекулярных"веществ. Сатиетин - во фракции низкомолекулярных веществ, Затем проводятлиофилизацию, гель-хроматографию через гель с объемом пор, пропускающимвещество мол.м. 15000-50000 дальтон.далее элюцию ведут О, 1-0,97.-ным водным раствором МаС 1, лиофилизируют,хроматографируют через гель с объемом пор, пропускающим вещество мол,м.2000-50000 дальтон, снова лиофилизируют. Получают вещество белого цвета, анализ показывает, что оно является гликопептидом. В результате егокислотного гидролиза получают аминокислоты и углеводы.Изобретение относится к медицине,а именно к препаративной биохимии икасается способа получения средства,обладающего эндогенным эффектом насыщения для центрального регулирования потребления пищи из сывороткикрови человека,Целью изобретения является выделение из сыворотки крови человекавещества гликопептидной природы -4сатиетина, обладающего избирательнымвоздействием на сигнал насыщенияи ингибирующим потребления пищи вопытах на крысаА, которые не потребляли пищи в течение 96 ч.Укаэанная цель достигается путемультрафильтрации сыворотки человекачерез мембранный фильтр с размерамипор, пропускающими вещество смол.м. 10000-50000 дальтон, лиофилизации, гель-хроматографии через гельс объемом пор, пропускающими вещества 1500-50000 дальтон, элюации0 1-0 9%-ным водным раствором хлоэ О25ристого натрия, лиофилизации, гельхроматографии через гель с объемомпор 2000-50000 и лиофилизации,Способ осуществляется следующимобразом.Сыворотку крови человека подвергают ультрафильтрации через мембранные фильтры, пропускающие вещества смол.м. ниже 50000 дальтон, ультрафильтрацию проводят под давлением3 атм.с постоянным перемешиванием. 35В результате такой процедуры сыворотка разделяется на две фракции: низкомолекулярных и высокомолекулярныхвеществ. Сатиетин находится во фракции низкомолекулярных веществ. Несмотря на мол. м. 60000-100000 дальтон Фильтрат высушивают и подвергают гель-хроматографии через гельсефадекса или биогеля с объемом пор1500-50000, активный продукт выходит 45в свободном обьеме колонки, при элюции раствором хлористого натрия принейтральных значениях рН, фракции,содержащие активное вещество, собирают и лиофилизируют, а затем очищают на колонке с биогелем р 2-р 30,элюируют дистиллированной водой,Фракции, обладающие активностью, собирают и лиофилизируют.. П р и м е р 1, 100 л сыворотки подвергают ультрафильтрации через мембрану Ашдсоп ИМ, 700 мл ультрафильтрата лиофилизируюти затем растворяют в зоне дистиллированной водыи подвергают гель-хроматографии наколонке с сефадексом С(диаметрколонки 5 см, высота 90 см), элюируют 0,9%-ным раствором хлористогонатрия при нейтральных значениях рН,собирают фракции по 10 мл. Фракциимежду полимерами 50 и 60 (между 500и 600 мл элюирующего раствора) былинайдены биологически активными. Биологически активные фракции собирают,лиофилизируют и растворяют в 10 млдистиллированной воды, затем наносятна колонку с биогелем Р, размерколонки 2,5 х 90 см и элюируют дистиллированной водой, собирают фракциипо 10 мл, фракции между 10 и 15 были биологически активными, их объединяют и лиофилизируют,В зависимости от качества исходной сыворотки получают 200-240 мг сухого продукта, который был снежнобелым, сходным по структуре с хлопкоми гомогенным веществом.П р и м е р 2. 900 мл сывороткиподвергают ультрафильтрации черезмембрану ХМАппсоп, 700 мл фильтрата лиофилизируют и растворяют вдистиллированной воде, затем наносятна колонку с сефадексом С(5 х 90 см),элюируют 0,9% - ным раствором хлористого натрия и собирают Фракции по 10 мл,Биологически активные фракции от 500до 600 мл объединяют, лиофилизируют,растворяют в 10 мл дистиллированнойводы и очищают на колонке с биогелемР(2,5 х 90 см) с применением в качестве элюэнта дистиллированной воды,с колонки собирают фракции по 10 мл,биологически активной Фракции междуномерами 11 и 15 собирают и лиофилизируют, Получают 20-30 мг сухогопродукта который был снежно-белымчистым веществом,П р и м е р 3. Проводят процессаналогично примеру 1, но вместо сефадекс Сиспользуют крупнозернистыйсефадекс С, а элюцию проводят0,2%-ным водным раствором хлористогонатрия.П р и и е р 4. Проводят процесс аналогично примеру 1, но вместо сефадекса Сиспользуют тонкодисперсный сефадекс Си элюируют 0,1%-ным водным раствором хлористого натрия. Гели с меньшими размерами пор, чем сефадекс Сне применяются, а при использовании гелей с большими разме1316550 витамины, в неограниченном количест"ве. Потребление пищи определяли через 1,5 и 24 ч после предоставлениякорма. Животные с введением сатиетина снижают потребление пищи примерно от 2 до 8 раз в различные сроки по сравнению с контролем и болеевысокой активностью по сравнению самфетамином через 24 ч после воздействия. снижение подвижности, также не оказывают влияния и на продольные мьппцыв изолированном состоянии по сравнению с холецистокинином). Формула и з о б р е т е н и я Составитель С. МельниковаТехред В.Кадар Корректор В, Бутяга Редактор Г. Волкова Заказ 2374/58 Тираж 595ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 рами пор, сатиетин нельзя выделить, так как активное вещество проникает в гель и распределяется по всему объему геля.В результате предложенного способа получено вещество белого цвета, сходное по виду с хлопком, химический анализ показывает, что оно является гликопептидом и после его кислотного гидролиза могут быть полу чены аминокислоты и углеводы: общее содержание аминокислот в продукте составляет 60,6 , редицирующих веществ - 13%, углеводов - 10,7 , содержание воды в продукте составляет 15 10 , фактически в виде связанной воды, При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия обнаружен компонент с мол.м. около 68000 дальтон, но 20 существует компонент с мол.м. 18000 и два компонента с одинаковой мол.м.28000, хорошо разделяемые.Спектр поглощения в ультрафиолетовой области не показывает максиму11 мов поглощения, но появляется плато" примерно в области 275-280 нм, которое может быть характеристикой пептида белка.Биологическая активность продукта 30 на потребление пищи была исследована на самках крыс СРЧ весом 200- 240 г, Животные были лишены пищи, но воду давали неограниченно, В связи с агрессивностью вызванной голоданием, животных индивидуально помещали в различные клетки, Каждому животному вводили внутривенно дозу 10 мг/кг сатиетина внутривенно, растворенного в 0,5 мл физиологического 40 раствора. Животным контрольной группы вводили только 0,5 мл физиологического раствора. Через 1 ч животным давали корм: обычные пищевые таблетки, содержащие альбумин, жир, углевод и 45 Для проверки специфического и избирательного действия было проведено испытание препарата на тест подпрыгивания по сравнению с веществом, обладающим сходным воздействием, химическим продуктом амфетамином (Й 11 - амфетамин гидрохлорид, хиноин, даже большие дозы сатиетина не оказывают никакого влияния на повьппение или Способ получения анорексогенногосредства из сыворотки крови, обладающего эндогенным эффектом насыщениядля регулирования потребления пищичерез центральную нервную системупутем ультрафильтрации сыворотки кро.ви человека через мембранный фильтрс пределами пропускания веществ смол.м, 10000-50000 дальтон, лиофилизации фильтрата, растворения его вводе, гель-хроматографии через гельс объемом пор 1500-50000 дальтон,элюции 0,1-0,9%-ным водным растворомхлористого натрия, лиофилизации целевого продукта и повторной гель-хроматографии через гель с объемом пор2000-50000, элюции водой и лиофилизации,