Штамм 5003 т-1, используемый для получения протеазы холерного вибриона

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 2 11 15/00, 9/00 2 К 15 ОП С 2 915727/ 6.06.85 0,12,86 остовск дена Тр аучно-и 21) 22) 46) 71) л. У 4 на- о осударственного Знаный дового, Кр следовате ни кии п тивочумныи институ (72) И.М.Бадалова, и Б.Н,Мишанькин (53) 576.8.093.1(0 (56) Езепчук И,В. основы патогенност Наука, 1977, с. 16 Н. Я. Шиман ок 88.8)Биомолекули бактерий1-171. ные М.: Д 5003ИЯ ПРО 01.,1 ЛУЧ микроо для имен ного 1 бри 500 со 1 ь (тсФорг ацие ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(54) ШТАММ ЕЯСНЕЕ 1 СН 1 А Т, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ П ТЕАЗЫ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОН (57) Изобретение относи биологии, может быть пр получения протеазы холе она. Штамм Евс 1 ег.с 1 т 1 а Т- получен путем котр с ДНК векторной плазмиды рВБ. 322, переданной в клетки бесплазмидного штамма кишечной палочки ЦД 5003. Штамм несет плазмиду рЯЬ возбудителя холеры, определяющую синтез протеазы. Плазмида сообщает штамму способность расти на модиФицированной диагностической соеде следующего состава, г/л: СаС 1 0,1; МАМБО 0,1;2 пБО 0,05; 11 аС 1 5,0; 11 аНСОэ 0,25, агар ДиФко 10, желатин 1 О, рН 7,2- 7,3. Желток смешиьают в объеме 1:1 с Физиологическим раствором, добавляют 70 мл этой эмульсии на 1 л готовой среды, охлажденной до 40-45 С Штамм Евс 1 тег 1 сЬ 1 а со 11 ЯД 5003 Тдепонирован в коллекции Государствен ного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под Р 128.1 табл.Изобретение Относится 1 с микробиологии и может быть испопьзоезано и:Ея получения протеазы холерного вибриона.Цель изобретения - создание безопасного штамма, способного продуцировать протеазу холерного вибриона,йййтамм Евсйееггсйе 1.а сой.: ;йД 5003 Т-й получен путем котрансформаци;1 с ,ДНК векторной плаэмиды йЕВЕ 322, пе- йО реданной в клетки бесплазмидного штамма кишечной палочки (Д 5003, Штамм несет плазмиду рй.В возбудителя холеры, опредеп 5 пощую синтез протеазы. Плазмида стаб 1 ельно наследуется в к,петках нового хозяина и сообщает ему способность расти на модифицированной активно-диагтсостической среде С 11 едуеощего состава,. г/и: СаСй О,й; МАМБО,е О,й; пБО.0,05, ;ййаС 1 5,0; ййаНСО 025;. агар Дифко йО, екелатина йО; рйй 7,2-73, Желток смешивают в объеме й:й с физиологическим раствором и добавляют25 70 мл этой эмульсии па 1 и готовой среды, охлажденной до 40-45"С.Штамм Евсйаег 1 сйе 1 а со 11. Ц 1 й 5003 Т-й депонирован в Коллекции йосударственного ееау Еео-исследов ателе. - ского института стандарте 1 заце 111 и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л,Л.Тарасевича под ййе й 28 и характеризуется следуошими признаками,Культурально-морфоло 1.11 ческие признаки,летки штамма й 28 в мазках иэ -уточной культуры имеют вид коротких аОпалочек й,0-2,0 х 0,3-04 мкм. ".е Еодвижные. Грамотрицателье 1 ые. й:Опимор .физм выражен умеренно.На агаре Т.В образуют мутные колонии серовато-белого цве" а. д 5На агаре Хоттингера ,рН 7,6) образуют мутные колонии, серовато -белыеБульоп Хоттингера - вь 1 зывают помутнение бульона, рост дифсйЕуэпыйй,Устойчивы к ампициллину (более 50йОО мкг/мл), зависят от пролиеЕа.Лизируются кишечными фагами Т и т,г.Сбраживают с образованием кислотыи газа пактоэу, глюкозу арабинозу, маннозу, гапактозу, Не ферментируютсахарозу,Образуеот вибриоцин, коагупазу,фибринопизин и пецитиназу.тамм авирупентен для белых мышей и морских свинок при подкожном, аэрозопьном и виутрико:Еъ:онктивапьном методах заражения, а также при внутриЕсиеэеп 1 ом заражении на модели кролиЕсов-сосунесоез в дозе до йО м.кл.Штамм несет дзе плазмиды рВК 322 и ру 1 йе с молЕкулярной массой 2,8 и й,9-22 мегадальгон соответственно. р Чт.Ь плазмида позволяет штамму в контролируемых условиях образовывать протеазу, аналог.1 чную ферменту, продуцируемому роди"ельским штаммом Че.Ьг 1 о е 1 й:ог Р. Использование среде.П р и м е р 2. Культуры штамма ;8 и контрольных штаммов засевают в йК-пую пептонпу.о во,цу в дозебйО кп/мл и .выращивают на Есачалкетсчение й 8 ч при 37 С. Клетки отбрасывают центрифугированием, а в падосадочной жидкости определяют активность п.ротеазы с использованием аз аказ ее 1 е 1 а в каче:тв с субстрата, Резу;п.таты выража:от в условных единицах актив .ости з 1 мл культуральной жидкости в пересчете наоптическу 1 о единицу му.ности выросших есупьтур.Сразнеггепьные,1 анные по пролукпии поотеазы, Штамм про- дуцент Ко 1 ичест во условных единиц Е.СО 11. ЯД 5003 (исходныи) Есой.1 ЕД 5003 -28 ей,е 1 йеог р(прсототип) штамма ипп острир Еется следующими примерами.йй р и и е р , Суточную агаровуео культуру оЕтае.ма Евсиеге.сйеЕ.а со 1128 стерипепЕой палочкой ипи платиноой петлей 11 аеЕОС 51 т на пластину вышеописанной диагностической среды в вице макроколонии.Посевы инкубируют при 37 С в течение 24-48 ч. Учет продукции протеазы производят по образованию циркулярных зон просветления вокруг посева, В качестве контроля используют бесплаз. - мидный штамм ЕзсЬег 1 СЬе.а со 11. (1 Д 5003, не способный к продукции протеазы и не растуши 11 на элективной1280008 Составитель Г.СмирноваТехред И.Попович Корректор М.Демчик Редактор В.Ковтун Заказ 7022/24 Тираж 490 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Штамм Езсйег 1 сМа со 11 ЯД 5003 Т, У .1.28 (Коллекция Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратовим. Л.А.Тарасевича), используемыйдля получения протеазы холерноговибриона.