Способ выявления ионизированных форм калия в тканях

(54) (57) СПОСОБ ВЬ 1 ЯВЛЕНИЯ ИОНИЗИРОВАННЫХ ФОРМ КАЛИЯ В ТКАНЯХ путем обработки срезов тканей химическим реагентом и подсчета микрокристалло под микроскопом, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упроще ния и повьппения чувствительности 28-14 53 1, 8. 6. Бюл. Еадский наусихоневрол но-исследогическийерева Бех влова62(088.8)Гистохимия. М., 19.3с84 поляроидскопа. яризационного микро СУДАРСТ 8 ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ПИСАНИЕ ИЭ(21) 37 (22) 31 (46) 23 (71) Ле вательс институ (72) Г.(53) 61 (56) Пи с. 883 пособа, в качестве реагента испольуют хлорную кислоту, а подсчетристаллов производят в скрещенных50 55 ния кристалла. Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к анато. мии и нейроморфологии.Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа эа счет обработки срезов ткани хлорной кислотой.Способ осуществляют следующим образом.Срезы исследуемой ткани обрабатывают концентрированной хлорной кислотой в течение не менее 4-5 мин, затем отмывают срезы, высушивают и подсчитывают выпавшие микрокристаллы в скрещенных поляроидах поляриэационного микроскопа.П р и м е р 1. Срезы различных полей коры головного мозга людей (аутопсия) фиксируют 107.-ным формалином или 967.-ным спиртом, затем делают парафиновые срезы толшиной 15 мкм.Срезы сухими наклеивают на сухое обезжиренное предметное стекло, прижимая пальцем. Депарафинируют известным способом, но из 967.-ного спирта, минуя воду, переносят в 407- ный спирт. Избыток спирта вокруг среза убиракт.Непосредственно на срезы, увлажненные 407-ным спиртом, наносят 1-2 капли неразбавленной хлорной кислоты, на срок не менее 4-5 мин,Капли кислоты как бы ншевелятся" на поверхности среза в первые секунды обработки, поэтому надо сразу жеплашмя положенным концом стекляннойпалочки легко разнести их по всейповерхности среза. В данном случаечасть срезов отлипает от стекол, чтозатрудняет работу с ними. Избыток спирта и кислоты на срезе недопустим, так как ведет к размыванию осаждаемых кристаллов по всей увлажненной поверхности, в результате чего кристаллы обнаруживаются не только на поверхности среза, а даже вне его, просто на стекле. Необходимо, чтобы осаждаемые кристаллы закреплялись в тканевой основе среза по возможности ближе к месту, откуда извлекаются ионы калия для образоваХлорную кислоту наносят на срезы на срок 4-5 мин и более. Ополаскивают срезы от кислоты 403-ным спиртом, аккуратно капая его иэ пипетки на 5 1 О 15 20 25 30 35 40 45 косо поставленное стекло выше расположения среза.Затем таким же образом ополаскивают срезы 967-ным спиртом, высушивают срез фильтровальной бумагой (промокают), просветляют ксилолом и заключают в бальзам.Докрашивание срезов ведет к значительной потере осажденных кристаллов и поэтому не может быть рекомендовано.Поскольку большинство выпадающих кристаллов хлорного калия в срезах имеют очень мелкие размеры (менее 1 О мкм), прозрачны и бесцветны или окрашены в очень слабый желтый цвет и их показатели преломления мало отличаются от показателей преломления среды (бальзам), возможности обычного рабочего или исследовательского микроскопа не позволяют их обнаружить в срезах тканей даже специалисту - кристаллооптику.Истинное количество кристаллов обнаруживается только в скрещенных поляроидах поляризационного микроскопа на черном фоне иэотропной среды по четырехкратному просветлению и закономерному угасанию каждого зерна (кристалла) при вращении столикаомикроскопа на 360 . Исследование в скрещенных поляроидах дает возможность легко обнаружить все имеющиеся в срезе мельчайшае кристаллы, даже если имеется только один, наблюдать распределение кристаллов в среде, дифференцировать свечение кристаллов от свечения случайных объектов по просветлению и закономерному угасанию при вращении столика микроскопа, учитывать количество осажденных кристаллов, фотографировать светящиеся объекты. Именно излучение срезов в скрещенных поляроидах поляризационного микроскопа незаменимо при использовании микрохимического способа выявления ионизированных Аорм калия в биологических объектах хлорной кислотой. Микрофотосъемка производится при увеличении 15 16 на пленку Иикрат. Поскольку иэображение характеризуется высокой контрастностью и малой освещенностью, время экспозиции должно быть значительно большим, чем при фотографировании обычного микроскопического иэображения в видимом свете, На исследуемом ма1251856 Составитель Н. ГуляеваРедактор Н. Тупица Техред И.Верес Корректор Л. Пилипенко Заказ 4553/3 Тираж 660 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 териале время экспозиции достигает 40 мин, поэтому вано, чтобы микроскоп и фотоаппарат были хорошо фиксированы и чтобы отсутствовали вибрации.По микрофотографиям выявляют иониэированные формы калия в срезах различных полей коры головного мозга людей. В поле зрения 21- и 10-го полей коры головного мозга людей с психическими заболеванияи обнаружено 99,7+1,5 и 94,6 ф 6,2 кристалла соответственно, а у здоровых людей 176,3+5,6 и 186,7+1,4 кристалла соответственно,Чувствительность способа 0,027 мкг калия. П р и м е р 2. Способ опробованна срезах сердечной мышцы, Порядокобработки срезов соответствует разработанному для срезов мозга (при мер 1) эа исключением того, что длясрезов сердечной мышцы лучше пользоваться не хлорной кислотой, а смесьюее с 407"ным спиртом (1 ч, хлорнойкислоты на 3 ч. спирта). При этом 0 реже отлипают срезы. Техника нанесения этой смеси такая же, как и длякислоты (пример 1), а время экспозиции в кислоте не менее 20 мин.Изучение срезов в скрещенных по ляроидах поляриэационного микроскопа и микрофотосъемку проводят какв примере .