Способ получения плазминогена

СОЮЗ С 08 ЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 80 51)4 А 61 К 374 ОСУДАРСТЭЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ САНИЕ ИЗОБРЕТЕН ЕЛЬСТВУ 1567/28-141,8310.85. Бюл. У 40титут биохимии им. А,В.ПалКиевское предприятие поству бактерийных препарато.932.4(088.8)орское свидетельство СССР2, кл, А 61 К 37/47, 1980. ИИНОвотногоатном ию,фатномй кисл еле особа отходы полученильтрации зируют.(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛА ГЕНА, включающий обработку жи сырья хлоридом натрия в Фо буфере, аффинную хроматограф элюцию хлоридом натрия в фо буфере, затем аминокапронов той с последующим выделением го продукта, о т л и ч а ю щ тем, что, с целью упрощения в качестве сырья используют получения церулоплазмина, а ный элюат подвергают гель-ф на молселекте С=25 и лиофили826 30 1 1187Изобретение относится к медицинской промьппленности и касается технологии получения ферментных препара-,тов,Цель изобретения - упрощение способа.Способ поясняется следующимипримерами.П р и м е р 1. К 5 л жидкости,являющейся отходом после выделения 10церулоплазмина, прибавляют сухойМаС 1 до концентрации 0,14 М, доводят рН жидкости до 7,4 с помощью0,5 М фосфатного буфера с рН 7,4.Далее выделение плазминогена ведут 15на аффинном сорбенте, Добавляют60 г 1,-лизин-сополимера малеиновогоангидрида с Н-винилпирролидоном,тщательно перемешивают в течение14 ч при (-4) -(-7) С для сорбции 20плазминогена. Затем прекращают перемешивание. После отстаиваниясуспензии в течение 30 мин надосадочную жидкость декантируют и удаляют, Проводят песпецифическую 25элюцию балластных белков 3-4-кратным объемом 0,5 М раствора ИаС 1в 0,01 М Фосфатном буфере, рН 7,4при +18-25 С. Эту операцию повторяют несколько раз до тех пор,пока Едп промывных вод становится ниже О, 1. Затем осуществляютспецифическую элюцию плазминогена;аффинный сорбент с сорбированнымплазминогеном наносят на воронкуБюхнера, прибавляют 2-3-кратноеколичество охлажденного до 4 С элюента 0,2 М раствора Е-аминокапроновойкислоты в 0,05 М фосфатном буфере .рН 7,3,перемешиваютв течение 3-4 мин 40жидкость отсасывают с помощью водоструйного насоса. Операцию повторяютдо тех пор, пока Е и получаемогоэлюата становится не вьппе 0,150.Объем элюата 1-1,5 л. Полученныйэлюат,содержащий плазминоген,подвергают обессоливанию путем гель-Фильтрации на колонках из молселектаС, которые предварительно эквилибрируют дистиллированнойводой,подкисленной уксусной кислотой до рН 4,0(параметры колонки; внутренний диа"метр 8 см; высота 50 см; объем 2,0 л),После гель-фильтрации раствор плазминогена, освобожденный от солей и-50 С, высушивание в сублимационнойкамере ТГв течение 80 ч при подогреве не выше 35 С. Режим лиофилизации соответствует требованиям Типовогорегламента производства губкигемостатической, 1972 г. Выход плазминогена - 904 мг.П р и м е р 2. Способ полученияплазминогена до этапа лиофилизациипроводят согласно схеме, указаннойв примере 1, Раствор плазминогенапосле гель-фильтрации подвергают лиофильной сушке в следующем режиме:озамораживание проводят при -40 С,высушивание - в сублимационной камере ТГв течение 45 ч при подогреове не более 38 С. Режим лиофилизациисоответствует требованиям Регламентапроизводства фибринолизина, 1978 г.Выход плазминогена - 1102 мг.П р и м е р 3. Способ полученияплазминогена до этапа лиофилизациипроводят согласно схеме, указаннойв примере 1. Раствор плазминогенапосле гель-фильтрации лиофильно высушивают в следующем режиме: заморажиованне проводят при -40 С, высушивание - в сублимационной камере ТГ в течение 18 ч при подогреве не более 22 С. Режим лиофилизации соответоствует требованиям Регламента производства иммуноглобулина человеканормального, 9131-79. Выход - 808 мг.Содержание белка в препаратахплазминогена определяли спектрофотометрически в 1 см кювете, принимая,что Е дп 17-ного раствора плазминогена =17 или 16 для растворов белкав кислой среде. Потенциальную активность плазминогена в лиофилизированных препаратах определяли, используяв качестве субстрата 1 Е-ный растворказеина; в качестве активатораплазминогена использовали растворстрептокиназы (препарат "БТгеразе"фирмы Вейгп 8 юегЕе А 8), содержащий750000 Е/фл, За 1 казеинолитическуюединицу принимали такое количествофермента (плазмина, образовавшегосяиз плазминогена), которое освобождает 450 мкМ растворимого в 15 Ж-нойтрихлоруксусной кислоте тирозинав условиях анализа.,Влагу в препаратах плазминогенаопределяли при 105 С (см. Регламентпроизводства фибролизина, 1978 г).БОБ-электрофорез лиофилизированныхпрепаратов плазминогена проводилиСоставитель В.БрусиловскаяРедактор С.Лисина Техред М,Кузьма Корректор Е.Рошко Заказ 6575/5 Тираж 721 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 в полиакриламидном теле в системе трис-бортаного буфера при рН 7,4. 1187826 4 На анализ брали растворы илазминогена. содержащие 25-50 у белка.,