Способ получения вакцины

(51) М, Кл. С 12 К 5/О ооударственнмй комитетСовета ейиннотров СССРоо делам изооретенийн открмтий 53) 9 088,8 С, Е, Бреслер,В. М, Коликов,В. В, Мчедлишв Н. В. Железно Л, М. Мо одк или, Т. В. Пер а, Н, В, Катушкина,ина, В. М. Молодкин, дзе и Э, А, фриама(72) Авторы изобретеи и Леиингра ордена Ленина полятехнический инсм. М, И, Калинина 1) Заявите 54) СПОСОБ НИЯ ВАКБИ Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к получению вак н способ пр овления вакцинугирования вируссозв лученный достаточ и опреде тим сповысокой иной аллер 1 О итум е иммуноности препаповышен еактоге ни ни рат й оследоваографии 15 или геле атно или юции на ьхромат стекле однокр циее эл осуществляют ультуру ) в кодин. РГА ом яснуюГонк320 вируса гличествпропуск итр (ед, РГА)ейтраминидазн 25 ив диаметр путем зонального цент держащей суспеизии.Однако препарат, по собом, обладает как не иммуногенностью, так ген костью.Цель изобрете ягенности и сниже е Юля этого суспензию в лтельности подвергают гелна натрий-борь-силикатномкремневой кислоты и I илиповторно подвергают адсорбтом же материале,Способ получения вакцинследующим образом,П р и м е р 1. Алланториппа (штамм Ае 840 мп и титромают через колонку с 3,0 см и высотой 32 см, заполненнуто на-трийборосилякатным стеклом (раем еер гранул0,1-0,3 мм, диаметр пор 500 А) со скоростью 0,3-0,6 см/мин. Удаление примесейи элюцию вируса проводят поэтапно трис-буферами, приготовленнымн на апирогенной воде (0,005-0,05 М, рНд 8,2-8,3, с концентрацией ЧаСт от 0 до 0,5 Й,причем50-100% элюированного натрийборосилика 1ного материала содержится в 30 мл с т10000 ед. РГА,Выделение вакцины проводят на колонкес диаметром 3 см и высотой 50 см, заполненной крупнопористым гелем кремниевойкислоты (размер канул 0.16-0,25 мм,диаметр пор 450 А, пористость 1,3 см /г)Вирусный материал элюируют фосфатным буфером 0,02 М, рН=. 7,4-7,5 с концентрацией ЙаСе и 0,85% со ск-ростью 0,5 см/мСравнительные характеристики исходногои очищенного вирусного материала:Исходный Очищенн-,ыййТ 320 2560(мг/мл) 7 05 07 Титр (.ед. РГА) Белок по Лоури (мг/мл) 2,5 0,1 Составитель С. Малютина Редвкто И Ма ховская ТехРед А, Богдан Ко ек С. ШекмаРЗаказ 4337/28 Тираж 541 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по дедам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Рвушсквя набд, 4/5.Беяок по Лоурн мг/мл5,5 0,04В резулвгате получают около 100 мл бвакцины с характеристиками приведеннымивыше, содержащей не менее 50% исходноговирусного материала,Инактнвнрование вируса в вакцине пронзаодится с помощью ультрафиолетового об- Олучения. Толщина слоя вируссодержащейжидкости от 0,1 ро 0,5 см, мощность 380 400 эрг/ммф с. в течение 5 мин,Иммуногенность для мышей была изученапутем однократного введения 0,3 мл уби-той вакцины внучрибрюшинно. Средний титрантигемагглютининов равен 1-223. ИммуВогенность для людей оценивалась послевведения 20 волонтерам подкожно по 0,5 млвакцины безыгопьным ннъектором, Кратность 20прироста антител в среднем составила 17,2при отсутствии выраженной реактогенносги,П р и и е р 2. Аллантонсную культурувируса гриппа (штвмм А 2 Виктория 36/72)с титром 640 ед. РГА гель-филвгруют нвколонке диаметром 3 см и высотой 50 см,заполненной натрнйбороснлнкатным с теклом(рвами гранул 0,1-0,3 мм, дзнаметр пор-1800 А, пористость - 16 см /г). Вирусный материал элюнруют трисовым буферомрН а 7,5 концентрацией ВвС 1 =0,85 % соскоростью 0,5 см/мнн,Дальнейшие операции проводят также квки в щамере 1Сравнительные характеристики исходногои очищенного вирусного материалаИсходный Очищенный Титр (ед,РГА) 320, 1280Нейтраминидазнаяактивность 0,03 04Белок (мг/мл) 24 003,В результате получают около 200 млвакцины, содержащей около 50 % исходноговирусного материала,45Инактивнрование также, как в примере ХВ опытах на мышах среднйй титр антигемаггелютннннов = 1;275,П р и м е р 3. Аллантоисную культурувируса гриппа (штамм А 2 Виктория 36/72)с титром 1;512 ер, РГА очишают с помощьювдсорбции-элюции нв формвлизнрованных эритроцитах (5-10%). Затем концентрируют наколонке (диаметр.1 см, высота = 23 см),заполненной гелем кремниевой кислоты (диаметр пор 2000-3000 Д, размер гранул 0,10,3 мм и порнстость 1,2 см /г). Удалениепримесей и элюцню проводят как и в примере 1,Сравнительные характеристики исходногон- очищенного вирусного материала и элюага:Исход- Очищен Элюатный ный512 2048 4196 После инвктивирования иммуногенностьв опытах на мышах средний титр антнгемвгглютннннов = 1-300,П р и м е р 4. Культурвльную суспензню вируса клещевого энцефалита (штаммСофьин), выращенную на первичной культуреткани;,Ыурнных; эмбрионов в присутствии19,9 среды с 2% НБС с титром 1024 ед.РГА гельб-фильтруют на колонке, заполненной нвтрийборснлнкатным стеклом, диаметрром 3 см и высотой 50 см (размер гранул 0,1-0,3 радиусу пор 1000 А, пористость 1,1 см- /г).3Дальнейшие операции проводят квк и впримере 4,Сравнительные характеристики исходногои очищенного вирусного материала.Исходный Очищенный1024 2048 Формула изобретения Способ получения вакцины путем очистки и концентрирования вируссодержащей суспензни, о т л и ч в ю щ и й с я тем, что, с целью повышения иммуногенностн и снижения ревктогенности, суспензию в любой последовательности подвергают гель-хроматографии нв натрий-борсиликвтком стекле или геле кремниевой кислоты и/нли однократно или повторно подвергают адсорбции - элюцин на том же материале,