Способ определения витамина в травяной муке

(51) 4 0 01 4 УДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ САНИЕ ИЗОБРЕТ РСИОМ Н содержащим тонкнием эктелей г Бюл. Н. С целевог стракци ледующим та, о т с целью деления способа нау тице 088 свид 6 015467) спосоБ о, В тРАВЯно 11 мУ го иэ аналиэиру об ом ваниемраствле.,8)етельство СССР М 31/08, 1983 . ЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА путем экстракции ой пробы бензолом,щим н-бутанол, с последуюослойным хроматографироватракта в системе раствориексан-хлороформ, удалениемкомпонента с пластинки и экего этиловым спиртом с посфотометрированием экстракл и ч а ю щ и й с я тем, что сокращения длительности опреи повьдпения чувствительностиэкстракт перед фотометрирорабатывают 0,1-0,2%-нымборгидрида натрия в этано1 1175874 2Изобретение относится к химичес- рителей гексан-хлороформ, взятых в ким методам определения витамина К: объемном соотношении 50:50. После то(филлохинона) с применением.хромато- го, как фронт подвижной Фазы подниграфических методов очистки, в част- мается на высоту 15 см, пластинку ности тонкослойной хроматографии, и 5 вынимают из камеры, просушивают и может быть использовано в различных быстро определяют положение витамианалитических лабораториях при опре- на К по свидетелю под ультрафиоледелении содержания витамина К в кор- товой лампой 1,проявляется в виде мах и других продуктах растительного . темной полосы), происхождения и кормовых препаратах.1 О Пятно силикагеля с адсорбированЦель изобретения - сокращениеным на нем витамином К соскаблидлительности определения и повыше- вают с пластинки, переносят в проние чувствительности способа. бирку с притертой пробкой, заливаютЖИзобретение иллюстрируется.сле- ,3 мл 96%-ного этилового спирта и ста 15 дующими примерами,Пример 1, Берут 500 мг травяной муки, вносят в пробирку с притертой пробкой, заливают 1 О мл экстрагирующей смеси - бензол с 2% (объем вят в темное место на 30 мин. Затем отФильтровывают раствор черезбумажный Фильтр (красная полоса),смоченный этиловым спиртом, пробирП р и м е р 2, Осуществляют определение витамина К, аналогично примеру 1 с раствором боргидрида нат рия различной концентрации .с цельюустановления оптимальных количествиспользуемого восстановителя. Результаты представлены в табл, 1. Таблица Определение оптимальной концентрации боргидрида натрия для востановления Филлохинона Используемая концентрация боргидрида натрия в этаноле, % 0,02 0,05 0,1 О, 2 / О, 1 / О, 51, О Определено витаминаК) 81 е 5 8913 100 100 98 1 9 бвО 96 2) В каждом варианте добавляли по 0,1 раствора,) н-бутанела к 10 мл бензола: добав ляют 0,2 мл н-бутанола и хорошо перемешивают, Пробирку ставят в темное место на 3 ч. Заполняют колонку диаметром 10 см слоем силикагеля 2 см ) и св.ерху него насыпают 1 см 25 безводного сульфата натрия, Содержпое пробирки пропускают через колонку, а пробирку .ополаскивают пятью порциями по 5 мл экстрагирующей смеси, которые также пропускают через ЗО колонку. Фильтрат выпаривают на ро" торном испарителе при 80 С и сухой остато: растворяют в 0,2 мл бензола.Затем с помощью микропипетки переносят полученный раствор (0,2 мл 1 на пластинку "Силуфол", размером 15 х 15 см, и по обе стороны. образовавшейся полости наносят свидетель- -раствор - 3 мкг филлохинона в 0,1 мл хлороФорма,Развитие хроматограммы проводят в камере (180 х 70 х 170 см), насыщенной в течение 30 мин парами смеси раствоку ополаскивают 1 мл этанола, который переносят на этот же фильтр.Далее к элюату добавляют 0,1 мл 01%-ного раствора боргидрида натрия в этаноле. Содержимое пробирки быстро перемешивают, переносят в кювету для измерений и через 20 с после внесения боргидрида натрия проводят первое Фотометрирование элюата на длине волны 243 нм, Затем после достижения максимума экстинции (через 3-4 мин) проводят повторное Фотометрирование и по разнице показаний между начальным и конечным измерениями находят прирост экстинции и определяют количество витамина К по калибровочной кривой.3 1175874 4П р и м е р 3. Осуществляют оп- образец люцерновой муки. Результаределение витамина К 1 аналогично ты экспериментов представлены в примеру, анализируя усредненный табч.2. Таблица 2. Чувст Среднеевремяанализа,ч вительность мкг(Известный . 20,37 + 0,02 б ч 8 3 5-30 24191 + Ов 02 18,2 20 но и весь находящийся в растворе витамин К( не определяется. В случае добавления к исследуемому злюату витамина К избытка боргидрида натрия элюат мутнеет, что делает невозмож ным фотометрирование. Данные табл. 1 свидетельствуюто том, что оптимальной концентрациейраствора боргидрида натрия в этаноле.является,0,1-0,2 Х. при.добавлениинизких концентраций 0,02-0,05 Х )прирост экстинций идет очень медленСоставитель .С. Кованская ФРедактор М. Бандура Техред Т.Фанта Корректор Л.БескидЗаказ 5304/26 Тираж 897 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Я, Раушская наб д, 4/5аФилиал ПЙ(п "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4