Способ диагностики туберкулеза

союз советскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ СР 00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Тбилисский государственный институтусовершенствования врачей(56) Справочник по микробиологическим ивирусологическим методам исследования. М.:Медицина, 1982, с. 133 - 135. ЯО 1171038 А(54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА, включающий добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к исследуемой сыворотке с последующим определением титров противотуберкулиновых антител, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуемую сыворотку адсорбируют антисывороткой против сыворотки туберкулинотрицательного донора, 1171038Изобретение относится к медицине и может быть использовано и ри диагностике туберкулеза.Способ осуществляют следующим образом.Берут 200 мл флакон с эритроцитарной массой донорской крови 1 (0) группы, добавляют равный объем физиологическогораствора (изотоницеской раствор хлорида натрия - 0,85 о/о-ный раствор химически чистой поверенной соли рН 7,2 - 7,4) и взвесь центриругируют при 2000 в 30 об/мин в течение 5 - 7 мин, надосадочную жидкость выливают, осадок отмывается 5 раз 10 объемами физиологического раствора центрифугированием по 5 мин при 3000 об/мин.Затем определяют количество осадка, из которого делается взвесь (из расчета 1,2 мл осадка на 8,8 мл физиологического растворя). К ней постепенно прибавляется 37"/о-ныйраствор формалина (из расчета 2 мл 37/о-ного формалина на 8 мл физиологического 20 раствора) в половине объема данной взвеси эритроцитов. Полученную формалинизированную взвесь взбалтывают в тецение 1 ч и помещают в холодильник при 2 - 4 С на 48 ч, после чего ее центрифугируют 5 мин при 3000 с)ГГРИГ. 11 олученный осадок отмывают 5 -6 рдз Обьемами физиологического раствора центрифугированием по 5 мин при 3000 Об/мин до Рсрозрачности надосадочной жидкости. Зятем из Осадка делают взвесь (из расчста 1,2 мл осадка на 8,8 мл физиологицеского раствора), к которой добавляют 37 о/)-ньЙ форма,)и) (из рясче 1 с 1 Ро, 37 /о-ного формалина на 100 мл взвеси), взбалтынд;От 1 О .15 мин. Псозучснную взьесь форч)дс 1 И )Ч 555 РС)Р)сРНЫХ ЧЕЛС)ВЕЧС СКПХ ЭРИТРОЦИТОВ 1 РО) ГруГГЫ Хряи 5)Т Г):соСГОдИРЬНИКЕ ПРИ 35 с 4 оЗатем 3 м. этои взвеси центРифУГИР)сГО 5 мин Р)рР 3000 )оР 5)5, д полученный осадок О 1 ы вспот 3 )с)зс 1 О ООГ 1 емс ми физиООис)ес КОГО рсСтнорд цептрифу5)ОР)д 5 Р)ЕМ По 5 МИПри 3000 Об/мин, осле чего из полуценного с)с;)с 1 кс 5)тс)в)Рт 45)/о-РС,Р;) вз)5 сс ь РРд физР 5 ОЛО- ии.с к) м 1,я с гворс, ко 1 с)р 1 к) выдср)к и в; ютечене 15 мин в термостате при 37"С. Одновременно количество раствора танР 55 а на физиологицс.ском растворе ( 1:1000), рад нос указанному осадку, сме 55 ивают с таким же количсстьом сризиологи еского раствора, кдк и при получении 4/о-ной взвеси, а так- ЖЕ 5 ГОМСс 55 Сс)50 Нд5 МИН В 5 ЕрМОСТдТ ПРИ 37 "с,. Зятем опи смешиваются. ГО)РуцеРГРРую смесь выдсрживдют в термостате в гсчение 30 мин при 37 С, после чего центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкс)с г Г)ь)г)ивя)от, я Осадок Отмывают 1 раз 10 Объс мами физиологического раствора це)ггрифугировднием в течение 5 мин при 3000 об/мин и здтс м доводят физиологичесИм раствором до исходной 4 о/о.ной взвеси, ко)т)рм)О сме)пинают с равным количеством буферного раствора, рН 6,4 (состав КНРО 1 7 мл, хаНРО 3 мл, физиологический раствор 100 мл).К полученной смеси добавляют сухие очищенные туберкулины человеческого типа серии1 (контрольный2450) и бычьего типа серии1 (контрольный958 Ленинградского НИИ вакцин и сывороток) из расчета 400 мкг (200 и 200 мкг) на 1 мл смеси. Затем смесь выдерживают, периодически взбалтывают в термостате 4 ч при 37 С, после чего к ней добавляют 37/,-ный формалин (из расчета 1 о/о к общему объему смеси). Смесь выдерживают 30 мин в термостате при 37 С, после этого помеща)от на 20 ч в холодильник при 2 - 4 С. Затем смесь центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин и полученный осадок отмывают 2 раза 10 объемами 0,5 о/о-ного раствора нормальной кроличьей сыворотки на физиологическом растворе центрифугированием по 5 мин при 3000 об/мин (НКС получают следующим образом: 5 мл крови, взятые из сердца кролика, помешают в термостат на 20 мин при 37 С и выделенную сыворотку центрифугируют 5 - 7 мин при 2000 об/мин; полученную надосадочную жидкость инактивируют в водяной бане при 56/57 С в течение 30 мин, после чего ее адсорбируют взвесью формалинизирова нных человеческих эритроцитов, полученных описанным ранее способом, из расчета 2 капли взвеси (из 1 - -2-миллиметровой пипетки) на 1 мл сыворотки, затем смесь центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин) Из осадка готовят 10 о/о-ную взвесь на физиологицеском растворе и полученный эритроцинарный диагностикум в дальнейшем хранят в холс)дильнике при 24 С. Контроль диагц)остикума Осуцест)ляется на сыворотке заведомо больного туберкулезом по прсдг)с)гас:с 5)55 с)ГОСОГ) диагностик т берклезя.АнтисГ)воротку получают путем иммунизации кролика человеческой сывороткой тубер кули нотр и цательного донора ( 2)0 мс крови, взятой из локтевой вены туберкулинОтрицателшюго донора, поГРешакт Га 30 мин в термостат при 37 С, после чего выделенную сыворотку центрифугируют 7 мин при 3000 об/мин и полученную нддосадоцную жидкость используют для иммунизации кролика). Иммунизацию осу)цествляют пятикратным введением, подкожно, в боковую область тела кролика, с интервалами 5 дней, в возрастающих дозах следующих коИО)Рентов:1 0,2 мл человеческой сыворотки с г),2 мл )Р)зиологического раствора:11 0,4 мл человеческой сыворотки с 0.4 мл физиологического раствора;11 0,7 мл человеческой сыворс)зкиадковант (из расчета ням, сыворотки 5.)5 м. адювантя);1 1,5 м, чсловсчссеой сы 5 Г). ки - я,")О.вант;1171038 ГКоличество епс:то положительных РНГЛ Нозологические Аормытуберкулеза легких реакций Предлоягенная иСтандартная Лбсолютноечисло М( о -.юг и ос число 55,6 100,0 диссеминированный 24 100,0 100, О 16,7 24 Очаговый 19 19 Инйильтративный Кавернозный и Аиброзно-.кавернозный 71 92,9 14 ч 100,069 98,6 25,0 Прочие 41,4 29 70 Всего Составитель Г. Крюкова Редактор В. Петраш Техред И. Верес Корректор В. Гирняк Заказ 47643 Тираж 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Ъ 2,5 мл человеческой сыворотки + адювант (адювант: берется 10%-ный раствор квасцов, получающийся растворением 50 г кристаллических квасцов в 500 мл дистиллированной воды, с последующим кипячением в течение 1 ч три дня подряд). Через 7 дн. из сердца кролика берут 15 мл крови, помещают на 15 - 20 мин в термостат при 37 С и выделенную сыворотку центрифугируют 5 - 7 мин при 2000 об/мин.Для постановки основной реакции берут исследуемую человеческую сыворотку, для чего из локтевой вены берут 5 - 7 - 8 мл крови, которые помещают на 30 мин в термостат при 37 С и выделенную сыворотку центрифугируют 7 мин при 3000 об/мин. Полученную надосадочную жидкость инактивируют в водяной бане при 56 - 58 С в течение 30 мин, 0,5 мл жидкости разводят стериальным физиологическим раствором в центрифужной пробирке в соотношении 1:10 и в полученную смесь добавляют 3 кап ли (из 1-миллиметровой пипетки) антисыворотки. Затем смесь взбалтывают и помещают на 20 мин в термостат при 37 С,после чего ее центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. Из полученной надосадочной жидкости берут 0,25 мл, которые титруют от 1:20 до 1:2560 в восьми луночках пластины из органического стекла, имеющей в ряду 2 луночек, в каждую из которых предварительно 30 разливается по 0,25 мл разводящей жидкости (разводящая жидкость: берутся 0,5%-ный раствор нормальной кроличьей сыворотки, получающийся смешиванием 0,25 мл НКС и 50 мл физиологического раствора) . Затем в каждую из восьми луночек добавляют по одной капле (из 1 - 2-миллилитровой пипетки) эритроцитарного диагностикума и пластину выдерживают 1 ч в термостате при 37"С, после чего помещают в холодильник при 2 - 4 С.Ори,чер. Больной А.,46 лет, поступил в клинику с жалобами на стойкую субфебрильную температуру, вялость и общую слабость. Рентгенологический метод и попытки выделения туберкулезных палочек успеха не принесли. Другие лабораторные методы и известный иммунологический способ диагностики туберкулеза также дали негативный результат. В то же время по предлагаемому способу диагностики туберкулеза выявлено наличие противотуберкули новых антител. Заболевание было в дальнейшем подтверждено клинико-лабораторными данными с установлением диагноза очагового туберкулеза верхушки правого легкого в фазе инфильтративной вспышки.Положительный эффект способа подтверждается и данными группового обследования заведомо больных туберкулезом легких.Результаты сравнительного использования на больных туберкулезом легких стандартной и предлагаемой реакций непрямой гемагглютинации РНГА) приведены в табл ице.Статистический анализ показывает, что с высокой достоверностью предлагаемый способ превосходит известный в диагностичесой ценности (Х- = 51,734; Р = 0,001).Таким образом, повышается точность диагностики на 50%.