Штамм 1148697, используемый в качестве тест объекта для индикации бактериофагов

(5 12 Ы 1/00 // С 1 0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЮ(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микрбиологии. (57) Штамм ВасП 1 пз йЬцгдп 81 епз 1 з айаг. еа 11 егхае.1148/69/7/, ЦмнИВ(Центральный музей промышленных мнк- . роорганизмов института "ВНИИгенети.ка"), используемый в качестве тест- объекта для индикации бактериофагов.Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и касается индикаторного штамма Вас 111 цв ГЬцгп 8 зепвв, используемого для. обнаружения умеренных бактериофагов, выделяемых.лизогенными культурами того же вида - продуцентами инсектицидных препаратов.Аналогов в патентной и научноисследовательской литературе не обна О ружено.Цель изобретения - штамм Вас 111 цв ГЬцгдп 81 епвдв, который может быть использован в качестве тест-объекта для индикации .бактериофагов произ водственных штаммов вида Васд 11 цв гЬцг 1 п 8 депвхв.Эта цель достигается с помощью штамма Вас 11 цв 0 шг 1 п 8 ь.епвхв чаг. яа 11 егдае 1148/69/7/. 20Штамм получен из культуры Вас 11- 1 цв гЬцг 1 прдепвдв чаг. яа 11 егдае 69/6 путем последовательной обработки вегетативной культуры нитроэогуанидином и бромистым зтидием и 25 отбора аспорогенного клона, устойчивого к антибиотикам, рифампицину и стрептомицину.Штамм Вас 111 цв гЬцг 1 п 81 епв 1 в чаг. яа 11 егдае 1148/69/7/ хранится в ЗО Центральном музее промьппленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика" под номером ЦМПМ Ви характеризуется следующими признаками.Культурально-морфологические приз-З наки. На среде МПА образует плоские колонии светло-серого цвета, с ровным или слабо изрезанным краем, 3 - 5 мм в диаметре, легко снимающиеся с агара. 40На среде ДПС (дрожжи 30 г, кукурузная мука 15 г, агар 20 г, вода.1 л образует плоские колонии, серые, матовые, 3 - 5 мм в диаметре.На среде Р В 3, содержащей 8 г/л питательной среды, 3 г/л дрожжевого экстракта, 20 г/л агара (все компоненты фирмы "Дифко"), с рН 7,3 колонии плоские, полупрозрачные, 5 мм в диаметре, мягкой консистенции. На полусинтетических средах, содержащих, г/л: МяБО 0,2; СаС 12 0,05; агар 20; НО 1 л и в качестве органического компонента пептон 20 г/л или триптон 20 г/л или каэеин 20 г/л, с рН 7,4 колонии плоские, матовые, округлые 1 - 5 мм в диаметреНа жидких полусинтетических средах и на мясопептонном бульоне рост культуры равномерный по всему объему среды, сплошной без планки или хлопьев.Оптимальные параметры роста при рН ,2 - 7,4 и г = 28 С. форма .клеток палочковидная, клетки одиночные или в цепочках, окраска по Граму положительная, по Н-антигену культура относится к М сероварианту, Спор и кристаллов не образует.физиолого-биологические признаки.Молоко пептонизирует без коагуляции, на агаре с крахмалом зона гидролиза 8,5 мм, пигмент не образует - обладает лецитиназной активностью. Усваивает глюкозу, маннозу, мальтозу, целлобиозу. Активен по отношению к салицину и эскулину, Нитраты не восстанавливает.Штамм чувствителен к вирулентным бактериофагам Вас 111 цв гЬцгдпу.епв 1 в (26 бактериофагов) и к умеренным бактериофагам штаммов,Вас 111 цв гЬцг 1 п 81 епв 1 в 1, 111, 1 У и У серовариантов.1Использование штамма для индикации бактериофагов,спонтанно выделяемых производственными культурами Ва,с 111 цв гйцг 1 п 8 епвав, показано на примерах 1 - 3.П р и м е р 1. Исследуемую и,индикаторную культуры пересеевают с чашки Петри в мясопептонный бульон и инкубируют на качалке 220 об/мин при 28 С в течение 4 - 6 ч. В чашки Петри разливают по 25 мл среды МПА (27 агара), содержащей 50 мкг/мл рифампицина, после застывания агара чашки подсушивают 3 - 4 ч В пробирки разливают по 3 мл среды МПА (0,77 агара), выдерживают на водяной бане при 45 С, вносят по 0,2 мл 4 - 6-ти часовых культур исследуемого и индикаторного штаммов, содержимое пробирок выливают в чашки ,Петри на поверхность среды МПА с антибиотиком. Опыт проводят с двумя контролями: в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45 С мягким агаром вносят 0,2 мл 4 в . 6-часовой индикаторной культуры, содержимое выливают в чашку Петри на поверхность среды МПА с рифампицином; в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45 С мягким агаром вносят 0,2 мл 4 -Э 1138409 4 6-часовой исследуемой культуры, со- тика рифампицина на стрептомицин держимое выливают в чашку Петри на . (250 ед/мл). поверхность среды МПА с рифампици- П р и м е р 3. Опыт проводят ана ном. логично примеру 1, но без использоОпытную и контрольные чаши инкуби-вания антибиотика. Культуру исследуеруют при 28 С 16 ч. В контрольной мого штамма центрифугируют при чашке с индикаторной культурой обра об/мин в течение 15 мин и тит" зуется бактериальный газон. В конт- руют супернатант. Учет результатов рольной чашке с посевом исследуемого проводят аналогично примеру 1, штамма среда остается прозрачной. На оопытной чашке на фоне газона индика- Использование штамма позволит весторной культуры видны негативные ко- ти контроль титра фаговых частиц в лонии бактериофага. различных условиях выращивания, опреП р и м е р 2. Опыт проводят ана- делить стабильность лизогенного сослогично примеру 1 с заменой антибио тояния штаммов.Составитель Г. СмирноваРедактор И. Дербак Техред М.Надь Корректор А. ОбручарЗаказ 10634/18 Тираж 525 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная 4