Способ отбора клеток инсулярных островков для трансплантации

Сото з СоветскихСоциапистнчесиихРеспубпин ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К . АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 907433пе делам изобретений и открытейОпубликовано 23.02.82Бктллетень7 Дата опубликования описания 25, 02, 82-й Московский ордена Ленина институт им. Н. И,осударироговр 1) Заяви 54) СПОСОБ ОТБОРА КЛЕТОК ИНСУЛИНОВИХ ОСТРОВКОВ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ к медицине, деленил жизулиновых ости при лечеакридино м с последующим нил люминисценци ым оранжев ем полвле пределе пределя ии, при юмини сцен-12 мин время полвлени величине торо трансплантации ют следующим о ирают длл осущестол летки о Спосо азом.е- та Изобретение относитсяа именно к способам опренеспособности клеток инсровков для трансплантацинии диабета.Известен способ отбора клеток инсулиновых островков длл трансплантации путем обработки их акридиновыморанжевым с последующим определениемпоявления люминисценции 1.Однако при осуществлении известного способа инсулиновые островки,отобранные для трансплантации какжизнеспособные и дающие зеленую люминисценцию, в значительном числеслучаев на практике оказывались нжизнеспособными и не давали эффекпри тоансплантации,Цель изобретения - повышение точности способа.Укаэанная цель достигается тем,что при осуществлении способа отбораклеток инсулиновых островков для, сплантации путем обработки их К суспензии изолированных с помощью коллагеназы визуально полноценны островков поджелудочной железы добав ляют равный обьем раствора акридинового оранжевого в концентрации 0,01 мг/мл, рН,4, накрывают покровным стеклом и фиксируют время полвле" ния бледнозеленого свеченил ядер . клеток в видимом спектре люминисцент" ного микроскопа. При появлении свече" ния ядер клеток через 5- 12 мин после добавления фруорохрома клетки остров" ков можно считать жизнеспособными и пригодными длл трансплантации. При более раннем появлении люминисцен" ции ядер клеток, независимо от ее цве35 10 50 та, партию островков считают непригодной для трансплантации,П р и и е р 1. К 0,2 мм суспензииинсулиновых островков добавили 0,2 млраствора акридинового оранжевого вконцентрации 0,01 мя/мг, рН - 7,4.При люиинисцентной микроскопии бледнозеленое свечение появилось через10 мин, Клетки этих островков былипризнаны жизнеспособныии, 80 инсулиновых островков этой партии было введено внутрибрюшинно крысе Иэсег массой тела 142 г с аллоксаноаыи диабетом. На 3-й сут состояние животногоулучшилось: появился аппетит исчезла вялость, жажда, сухость шерсти,цасса тела увеличилась на 100 г,уровень глиемии постепенно нормализовался к 10 сут после введения инсулиновых островков. 6 контрольныхкрыс погибли через 2-6 сут на фоненарастания гликемии и потери массытела.П р и и е д 2. По предлагаемомуф гспособу отобраны инсулиновые островки, Отмечено появление бледнозеле"ной люиинисценции ядер клеток островков церез 7 мин. Крысе йэтегмассой 130 г, введено 100 инсулиновых островков. Состояние животного,у которого была выраженная клиническая картина декомпенсированного сахарного диабета, значительно улуцшилось, уровень гликемии снизился на18-е сут до нормального с 414 мг 7.перед трансплантацией. 4 контрольныекрысы погибли через 2-7 сут послевведения диабеточенного препаратааллоксангидрата.П р и м е р 3. По предлагаемомуспособу отобраны инсулиновые остров,;и. Отмечено появление зеленой люиинисценции ядер клето в первые сек,после добавления флуорохрома. Клеткипризнаны нежизнеспособными. Послевведения 80 инсулиновых островковкрысе с диабетом массой тела 136 г,состояние животного продолжало прогрессивно ухудшаться, гликеиия увеличилась с 460 иг 3 до 800 иг 3 вдень гибели . Крыса погибла через 5 1 О 15 20 25 30 8 сут после введения аллоксангидрата и через 5 сут после введения островков.П р и м е р 4. Немедленная зеленая люминисценция ядер клеток появилась у отобранных инсулиновых островков по предлагаемому способу, но предварительно инкубированных с ал- локсаном, который повреждает В-клетки, составляющие 903 всего клетоцного состава островков, Клетки островков признаны нежизнеспособными.П р и м е р 5. По предлагаеиому способу отобраны инсулиновые островки, Отмечено появление яркозеленого и оранжевого цвета люминисценции в первые две мин после добавления флуорохроиа, Клетки островков при" знаны нежизнеспособными, Изогенная трансплантация островков крысе с аллоксановыи сахарным диабетои не спасла животное. Крыса погибла на 5-е сут после введения аллоксангидрата и 3-е сут после введения островков.Предлагаемый способ позволяет выявить партии инсулиновых островков поджелудочной железы, пригодные для трансплантации и повысить точность отбраковки непригодных, причем способ прост а осуществлении,формула изобретения Способ отбора клеток инсулиновых островков для трансплантации путем обработки их акридиновыи оранжевыи с последующим определением появления люиинисценции, о т л и ц а ю щ и йс я тем, цто, с целью повышения точности способа, определяют время появления люиинисценции, при величине которого 5-12 мин клетки отбирают для трансплантации. Источники информации,принятые ао внимание при экспертизе1. Лопухин О.М Коган З.М. Критсрии жизнеспособности органов и тканей перед трансплантацией, М "Медицина , 1975, с, 187, 188, 192, Составитель Ю. АлмазовРедактор А. Шандор Техред Г. Харитонцик Корректор М, ПожоЗаказ 581/52 Тираж 883 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 1103 Москва Ж, Раушская наб. д. 4/5 филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная,