Способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ЯВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ггг 1993 096. (22) Заявлено 26.06,81(21) 3307177/28-13 РМ К з с присоединением заявки Мо 6 01 М 1/28 А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 30,01,83 Л.А.фаустов и А.И.Едемский(72) Авторы изобретения Курский государственный медицинский МнстИтут.(54). СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ КЛЕТОК ПАНКРЕАТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ Изобретение относится к медицине, а именно гистологии, и может быть использовано для выявления гистоло" гических структур панкреатических островков.Известен способ выявления клеток панкреатических островков на гисто; логическом препарате путем окрашива" ния нейтральными красителями, приготовленными по методу Бенсли и его модификациям (1. Однако приготовление красителей занимает много времени, очень сложно, а их применение дает непостоянные ре- зультаты окраски островковых клеток.Известен также способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате, включающий их окрашнвание альдегид-фуксином 21. Однако известный способ не .позволяет дифференцировать А- и, В- клетки панкреатических островков, кроме того, требуется проведение дополннтель" ных окрасок, а введение в раствор альдегид-фуксина кислых красителей приводит к потере красящих свойств раствора. Цель изобретения - дифференцирование А- и В- клеток панкреатическихостровков.Укаэанная цель достигается согласно способу выявления клеток панкрватических островков на гистологическом препарате, включающему их окрашивание альдегид-фуксином, при кото"10 ром окрашивание ведут в красителесостава, вес. ЪгАльдегйд-фуксин 0,07"0,1Этиловый спирт 90-95Оранжевый Ж0,1-0,19Вода Остальноез течение 15-20 с.Окраску панкреатических островковпроводят следующим образом,Денарафинированные срезы поджелу 20 дочной железы, наклеенные на предметные стекла белком с глицерином, окис"ляют в течение 15-20 с в смеси, содержащей 3 мл насыщенного водногораствора марганцовокислого калия,3 мл 3-ной серной кислоты и 44 млдистиллированной воды. г Обесцвечивают срезы в 3"ном растворе метабисульфита калия 15-20 с,Промывают в дистиллированной во" 30 де 1-2 минОкрашивают в спиртовом растворе предлагаемого красителя (0,2 г сухого порошка растворяют в 50 мл 9 б-ого этилового спирта) в течение 15"20 мин.Срезы промокают бумажным фильтром. 5Щепараты обеэвоживают в этиловом( спирте и через ксилол заключают в канадский бальзам.Результат окраски цитоплазма В-клеток фиолетовая) цитоплазма А-кле 1 р ток и эритроциты оранжевые; ядра А- и В-клеток желтовато-коричневого цве" таП р и м е р 1. При патологоанатомическом вскрытии трупа мужчины обна-(5 ружена опухоль поджелудочной железы диаметром 0,5 см. Ткань опухоли фиксируют в 10"ном растворе нейтрально. го Формалина в течение суток. Материал по общепринятой методике заливают в парафин, Готовят гистологичес" кие срезы толщиной 7 мкм и наклеивают их на предметные стекла белком с глицерийом. Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3-ной серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды, Затем срезы обесцвечивают в 3-ном водном растворе метабисульфита калия в течение 15 с и промыва- ЗО ют в дистиллированной воде,. Срезы окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя (0,2 г су" хого красителя растворяют в 50 г 70-ого этилового спирта, подкислен ного 0,5 г соляной кислоты, удельный вес которой 1,2) в течение 20 мин, затем йромокают бумажным фильтром, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и через ксилол заключа р ют в канадский бальзам.При микроскопическом излучении гистологического препарата опухоли, окрашенного предлагаемым красителем, установлено, что цитоплазма опухоле-,45 вых клеток содержит альдегид-Фуксинофильные гранулы Фиолетового цвета.Заключение: опухоль является В-клеточной.П р и м е р 2. При патологоанатомическом вскрытии трупа больной, страдавшей язвенной болезнью желудка, берут кусочек опухоли поджелудочной железы для гистологического исследования. Из материала, залитого в параФин, готовят среды, которые наклеивают на предметные стекла белком с глицерином. Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3-ной 60 серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды. Затем срезы обесцвечивают в 3-ном водном растворе метабисульфита калия в течение )5 с и промывают в дистиллированной воде. Срезы 65 окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя (0,2 гсухого красителя растворяют в 50 г70"ого этилового спирта, подкисленного 0,5 г соляной кислоты, удельныйвес которой 1,2) в течение 20 мин,затем промокают бумажным фильтром,обеэвоживают в спиртах восходящейконцентрации и через ксилол заключа(ют в канадский бальзам.При микроскопическом изучении гистологического препарата установлено,что опухоль является аденомой островковой ткани солидного типа. Цитоплазма опухолевых клеток окрашена воранжевый цвет она не содержит альдегид-фукринофильных гранул фиолето"вого цвета, а также вакуолей,Заключение; в поджелудочной железе имеется аденома из А-клеток,П р и м е р 3, При вскрытии кроли"ка через б суток после прививки всеменник опухоли Брауна-Пирс для гистологического изучения берут подже"лудочную железу. Ее фиксируют в 10 ном растворе нейтрального Формалинав течение суток. Ткань поджелудочнойжелезы заливают в парафин по общепринятой методике, Приготавливаютпарафиновые срезы толщиной 7 мкм,Срезы депарафинируют и окисляют ихв течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3"ной сернойкислоты и 44 мл дистиллированной воды, Затем срезы обесцвечивают в 3 ном водном растворе метабисульфитакалия в течение 15 с и промывают вдистиллированной воде. Срезы окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя(0,2 г сухого красителя растворяют в 50 г 70-ого этилового спирта, подкисленного 0,5 г со"ляной кислоты, удельный вес которой1,2)в течение 20 мин,затем промокаютбумажным Фильтром,обеэвоживают в спиртах восходящей концентрации и черезксилол заключают в канадский баль"зам.При микроскопическом изучении поджелудочной железы установлено увеличение в панкреатических островкахколичества и размеров В"клеток и ихядер. В цитоплаэме В-клеток Уменьше"но содержание альдегид-Фуксинофильных гранул фиолетового цвета.Заключение: В-клетки находятся всостоянии гипертрофии.Количество А-клеток, цитоплазмакоторых окрашена в оранжевый цвет,в островках уменьаено. Уменьшен также диаметр этих клеток и их ядер.Заключение А"клетки находятся всостоянии атрофии.Предлагаемый способ позволяет диф"Ференцировать А- и В-клетки панкреатических островков. Кроме того, упрощается и ускоряется способ окрасЗаказ 443/57 Тираж 871 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП фПатентф, г.ужгород, ул,Проектная, 4 кн, так как исключается необходимость последующей докраски А-клеток и клеточных ядер, сокращается многоэтап" ность окраски за счет устранения процедуры дифференцировки препаратов в спиртахиз-за способности красителя избирательно в разные цвета четко и чисто окрашивать В- и Аклетки,а так" же клеточные ядра, Краситель может быть применен в патологоанатомической практике для дифференциальной диагнос.О тики опухолей, исходящих из разных клеток панкреатических островков,а также, в экспериментально-морфологических исследованиях для оценки морфо-функционального состояние гормонопроду цирующих клеток панкреатических островков.Формула изобретенияСпособ выявления клеток панкреати" ческих островков на гистологическом препарате, включающий их окрашивание альдегид-фуксином, о т л и ч а ю щ ий с я тем, что, с целью дифференцирования А н В -клеток панкреатических островков, окрашнвание ведут в красителе состава, вес ЪАльдегнд-фуксин 0,07-01 Этиловый спирт 90-95Оранжевый Ж 0,1-0,15 Вода Остальное в течение 15-20 с. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе