Способ получения высокомолекулярного левана

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советск ихСоциалистическихРеспубпиипо делам изобретеиий и открытий(72) Авторы изобретения М. С. Лойцянская и В. И. Элисашвили Ленинградский ордена Ленина и ордена Трудового-Красного .Зйамени государственный университет им. А. А, Жданова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГОЛЕВАНА Изобретение относится к способам полученйя полисахаридов, предназначенных цля использо. вания в пищевой, химической промышленности, в медицине и научных исследованиях.Наиболее близким к предлагаемому является способ получения левана в растущей куль 5 туре СосопоЬастег охудапз Л - 1. Согласно этому способу культивирование бактерий осуществляют в течение 72 ч в среде с 5% сахарозы в стерилыгых условиях в. ферментере, снабжен 1 О ном устройством для перемешивания питательной среды. В начале процесса (через 24 ч культивирования) синтезируются всего около 2 г левана/л, из которых 70% составляет высокомолекулярный полисахарид (мол. вес более15 1 млн.) и 30% - низкомолекулярный (мол,вес менее 30000), Через 48 ч, когда количество синтезированного левана увеличивается до 13 мгмл, доля низкомолекулярной фракции возрастает до 95% и остается на этом уровне до окончания процесса. После окончания куль. тивирования бактериальную массу отделяют центрифутированием, а из насадочнсй жидкости выделяют леван путем двукратного осаждения полисахарида этиловым спиртом и растворения его в дистиллированной воде, Затем леван освобождают от следов бактериального белка встряхиванием со смесью хлороформа и фенола (10:1), дополнительно очищают диализом против дистиллированной воды и высушивают в Вакууме над СаС,. Конечный выход высокомолекулярного левана составляет 1-2 г(л 111Известный способ получения левана требует специального оборудования для выращивания бактерий и сохранения стерильных условий.В конце процесса необходимо удаление бактериальной массы, а после осаждения полисахарида эталоном требуется его очистка от бактериаль. ного белка и других веществ, содержащихся в,культуральной жидкости. Еще одним недостатком способа является то, что концентра ция сахарозы в питательной среде составляет 5 - 10%. Повышение ее с целью увеличения выхода левана не приводит к увеличению выхода продукта, так как при этом, с одной стороны, замедляется рост бактерий и синтез левансахв. розы, с друтой, быстро увеличивается кислот. ность среды (рН падает с 5,9 - 6,0 до 2,5859375 20Способ получения высокомолекулярного ле.вана с использованием водного раствора сахарозы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью упрощения способа и увеличения выхода целевого продукта, 25-35 с.ный растворсахарозы выдерживают 18 - 24 ч в присутствии5 - 7,5 единиц левансахаразы/мл при 10 - 25 Си рН 5,2 - 5,4,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Авторское свидетельство СССР М 461616,кл, С 12 О 13/04, 1975 1 прототип). Составитель Т, Мартинская Техред А. Ач. Корректор Е. Рошко Редактор В. Петраш Заказ 746640 Тираж 530 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий,3,0) и вследствие этого происходит инактивация левансахарозы и прекращение синтеза левана,Цель изобретения - упрощение способаи увеличение выхода целевого продукта,Поставленная цель достигается тем, что вспособе получения высокомолекулярного левана с использованием водного раствора са.харозы, 25 - 35%-ный раствор сахарозы выдер.живают 18 - 24 ч в присутствии 5 - 7,5 единиц 10левансахаразы/мл при 10 - 25 С и рН 5,2 - 5,4(1 единица левансахаразной активности -количество фермента, которое катализируетгидролиз 1 мкмоль сахарозы при рН 5,2 - 5,4,температуре 30 С и концентрации сахарозы025 М).П р и м е р 1. Берут три объема 35 о ногораствора сахарозы и 1 объем раствора левансахаразы в 0,05 М фосфатном буфере с рН 5,4 иакивностью 20 единиц/мл, Смесь перемешивают и оставляют при 25 С на 18 ч. После окончания инкубирования смесь разводят в три раза дистиллированной водой и добавляют к нейпри перемешивании два объема этанола. Леван,выпавший восадок; отделяют центрифугированием и растворяют в дистиллированной воде,Выход левана высокого молекулярного веса(1 - 10 млн) составляет 50 г/л.П р и м е р 2. Берут три объема 48%-.ногораствора сахарозы и 1 объем раствора левансахаразы в 0,05 М фосфатном буфере с рН5,3 и активностью 30 едикщ/мл. Смесь перемешивают и оставляют при 10 С на 24 ц, а затем осуществляют все приемы, описанные в примере 1, Выход левана высокого молекулярного веса составляет 61 г/л.Таким образом, в предлагаемом способе выход левана высокого молекулярного веса со. ставляет 50 - 61 г/л, т,е. более чем в 6 - 10 раз выше, чем в известных способах, Предлагаемый способ получения левана значительно проще, так как не требует специального оборудования, а может быть осуществлен в любом сосуде, колбе. Эффективность процесса также выше, так как он длится не более суток, тогда как в известном способе 3 сут для выделения левана требуется в три раза меньше этанола, чем в известном, способе. Формула изобретения