Способ диагностики дизентерии

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 833211 Союз СоветскннСоцналнстнческннРеспублнк(5) М. Кл э А 61 В 1 О/00 Гевудервтеенный квмнтет СССР дв делам изобретений и атнрнтнй(72) Авторы изобретения Трудового Красного намщщлогии им. почетногоый Московский ордена Ленинамени медицинский институтСеченова довательский ордена миологии и микробио и АМН СССР и Перв удового Красного Зним. Й, М. Научно-исслинститут эпидН. Ф. Гамале и ордена Т(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИ ктепо. Изобретение относится к медицине, а именно клинической иммунологии,Известен способ диагностики дизентерии путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител 1 и 2.Однако известный способ не обеспечи. вает высокой точности.Цель изобретения - повышение точностиспособа.Указанная цель достигается. тем, что способ диагностики дизентерии осуществляют путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител, в качестве эритроцитарного диагностикума используют эритроциты, сенсибилизированные К-антигеном шигелл Зонне и при титре К-антител выше 1:160 диагносцируют дизентерию.Поверхностный К-антиген Зонне получают путем препаративного ультрацентрифугирования из антигена Баувена указанных бактерий таким образом,Убитые. и высушенные ацетоном ба рии Зонне 80 - 90% К-форм бактерий в 2пуляции) экстрагируют 1 н. тризлоруксусной кислотой по принятой методике. Антиген Баувена, разведенный в физиологическом растворе, подвергают ультра центри.фугированию при 300000 ф в течение 4 ч,гадосадочную жидкость лиофильно высушивают. Выход К-антигена составляет около 1 Уй. При иммуноэлектрофоретическом изучении К-антигена он образует одну линию преципитации с сывороткой против живь 1 х бактерий Зонне и не реагирует с О-антисы- О вороткой (120 С, 2 ч) этих бактерий. Препарат представляет собой полисахарид (более 80%) с небольшим содержанием (в виде следов) липидов и протеина. Этим антигеном сенсибилизируют формалинизированные эритроциты и таким образом получают эритроцитарный диагностикум Зонне.Для получения эритроцитарного диагностикума 1 мл 5%-ной взвеси формалинизи-.рованных обычным способом бараньих эритроцитов прибавляют к 9 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР) с рН 6,4 и 1 мл раствора (0,1 мг/мл) К.антигена в 0,9%-ном растворе МаС. Смесь инкубиру.ют 30 мин при 37 С в термостате, затем эритроциты трижды отмывают ЗФР с рН 7,2833211 Составитель С. Малютина Техред А. Бойкас Корректор Ю Макарснко Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий П 3035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4при, центрифугировании. Осадок нагруженных эритроцитов ресуспендируют в 5 мл ЗФР с рН 7,2, и эту смесь используют для постановки РНГА.Пример. Больной А находится в стационаре с предположительным диагнозом дизентерия. Реакцию проводят следующи м образом.На полистироловые пластины с углублениями (или плашки из аппарата Токачи) наносят 2 ряда по 1 - 2 капли серийных двукратных разведений сыворотки крови больного (титрование можно производить петлями в аппарате Токачи). Затем к каждому разведению сыворотки первого ряда добавляют по 1 - 2 капли эритроцитарного К-диагностикума Зоние, второго ряда эритроцитарного (коммерческого) диагностикума Флекснера. Пластины осторожно встряхивают и помещают в термостат при 37 С на 1 ч, перемешивая через 30 мин. Учет результатов. проводят через 1 в2 ч после инкубации и через 18 ч выдержки пластин во влажной камере. Реакцию оценивают по 4-крестовой системе (+ + + +, , , +, - ). За титр антител принимают максимальное разведение испытуемой сыворотки, дающее четкую агглютинацию эритрйотов на .Контролями .служат несенсибилизированные формалинизированные эритроциты с ЗФР рН 7,2; несенсибилизированные формалинизированные,эритроциты с Сывороткой крови больного в первых 3-4 разведениях; сенсибилизированные К-антигеном Зонне формалинизированные эритроциты с ЗФР рН 7,2 и эритроциты, сенсибилизированные о-антигеиом Флекснера 2 а, с ЗФР рН 7,2,Испытание сыворотки крови больного А при использовании эритроцитарного К-диагностикума Зонне позволило в течение 3 ч выявить антитела к поверхностному К-анти- гену шигелл Зонне в титре 1:1280. При использовании коммерческого диагностикума Зонне антитела в сыворотке крови данного больного выявлены в титре 1:80, к эритроцитарному диагностикуму Флекснера - в титре 1:40,Предлагаемый. способ определения Кантител позволяет показать их высокий уровень в сыворотке крови больного при от-.сутствии специфических антител к шигеллам Флекснера:.Предлагаемый способ позволяет быстрои точно в течение 3 ч индентифицироватьдизентерийную инфекцию и определить вид 15 возбудителя, вызвашего данное заболевание, Метод высокочувствителен, специфичен, информативен. Формула изобретенияСпособ диагностики дизентерии путемпроведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве Ю эритроцитарного диагностикума используют эритроциты, сенсибилизированные К-антигеном шигелл Зонне, и при титре К- антител выше 1;160 диагносцируют дизентерию. фОИсточники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Методические указания по клинике,диагностике и лечению взрослых больныхдизентерией. М., 1978.2, Сумароков А. А. и др. Оценка диагно 35 стической эффективности антигенных препаратов из шигелл Зонне. ЖМЭИ, 1977,Ма 11, с, 79 - 86.