Способ выявления антител

(51)5 С О 1 М 33 53 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ДЕТЕЛЬСТВ ВТОР СИОМ нстии.В. ных,мевого ицинсые бо 0,025 млгностикуов. Учетмин при бавляют поельного диа эти 0,5 ки анти х эритроци ят через 90 онтроле. Ти Зонне из куринь реакции провод глютинации в к аг- кции ром р едение сы- емагглютиальное р задержк вляется мак оротки, даю способу шигелла эт о ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ О ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ РИ ГКНТ СССР(56) Кузьмин Ю.А., КаральникИзучение эффективности различтодов приготовления эхинококкоантигенного диагностикума.-Ме.кая паразитология и паразитарлезин, 1981, В 2, 26-31. Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.Целью изобретения является повышение точности выявления антител при помощи.агглютинационных реакций.П р и м е р 1. По предлагаемомуисследуемую на антитела км Зонне пробу сыворотки титруют в объеме 0,05 мл в 0,85%-ном растворе ХаС 1, содержащем 0,03% бычьего сывороточного альбумина. Во все разведения пробы и контроль (0,05 мл растворителя) добавляют по 0,025 мл 0,5%-ной взвеси антигенного диагностикума Зонне и" эритроцитов барана. Сенсибилизирующая зона антигена дляого диагностикума - 6,25 мкг/мл (оптимальная доза антигена для приго товления диагностикума, используемог в РПГА, - 50 мкг/мл), Через 15 мин в(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цельизобретения - повышение;точности выявления антител, Способ осуществляется следующим образом. В исследуемуюпробу вносят эритроцитарный диагностикум из бараньих эритроцитов, приготовленный с уменьшением в 4-8 раз дозой антигена в сравнении с оптимальной дозой антигена, а через 10 - .15 мин - антительный диагностикум изкуриных, эритроцитов той же специфичности. Положительный результат учитывают по отсутствию агглютинации эритроциов. нации.По известному способу определяли антитела при помощи РПГА с использованием антигенного диагностикума, приготовленного с оптимальной дозой сенситина - 50 мкг/мл, Титром реакции является максимальное разведение сыворотки, дающее агглютинацию. Каждое определение повторяли 8 раз.Полученные результаты приведены в табл.1. Видно, что чувствительность предлагаемого способа почти в 3 раза вьппе, чем известного, точность пред1536315 5 45 Т а б,л и ц а 1 Способ Обратный Достовер- Коэффициенттитр реакции ность раз- варьированияличия титра % Достоверностьразличия коэффициента варьирования Известный 6017 Ф 1,1Предлагаемый17440 1 1,1 3,1+ 0,8 0,9) Р) 0,8 Р ( 0,001 2,9+ 0,7лагаемого способа, оцениваемая по раэбросу результатов измерения (коэф , ,фициент варьирования), совпадает с точностью известного способа. П р и м е р 2. По предлагаемому способу определяли в сыворотке крови антитела к Тохор 1 азша 8 опд 1 с ис- . пользованием антигенного эритроцитар ного диагностикума, приготовленного с дозой 62,5 мкг/мл сенситина, и антительного эритроцитарного.диагностикума, В остальном способ осуществляли, как в примере 1. 15По известному способу определяли антитела при помощи РПГА с использо, ванием антигенного эритроцитарного,диагностикума, приготовленного с оптимальной дозой - 250 мкг/мл.Каждый опыт повторяли 8 раз, Результаты приведены в табл.2.Видно, что чувствительность предлагаемого способа в 3 раза выше в сравнении с известным, а точность 25 обоих способов не различается.П р и м е р 3. Выбор оптимальной дозы антигена-сенситина Зонне для приготовления антигенного эритроцитарного диагностикума, используемого 30 в предлагаемом способе. Способ осуществляли, как в примере 1, но использовали серии антигенного диагностикума, полученные с разными (1,6- 100,0 мкг/мл) дозами сенситина. Па 35 раллельно применяли известный способ. Каждый опыт повторяли 4-8 раз. Результаты приведены в табл.3.Оптимальной дозой антигена для известного способа является та минимальная доза сенситина, которая обеспечивает получение максймального титра агглютийации, а для предлагаемого способа - та минимальная доза сенситина, которая обеспечивает получение максимального титра задержки агглютинации. Видно, что оптимальней дозой Зонне для известного способа является 50 мкг/мл. Лучшие результатыпредлагаемого способа получены с диагностикумами приготовленными с антигенами, взятыми в дозе в 4 и 8 разменьшей (12,5 и 6,25 мкг/мл), чем до"за, оптимальная для агглютинации.диагностикума антителами. С дозой3,1 мкг/мл в контроле слабая агглютинация, а с диагностикумом, приготовленным с дозой антигена 1,6 мкг/мл,агглютинация эритроцитов в контролеотсутствует, Следовательно, при двухпоследних дозах антигена-сенситинапредлагаемый способ невыполним. Такимобразом, оптимальная чувствительностьпредлагаемого способа обеспечиваетсяприменением антигенного диагностикума на бараньих эритроцитах, приготовленного с антигенцм в дозе в 4-8 разменьшей оптимальной для агглютинациидиагностикума антителами. 1Таким образом, предложенный способ обеспечивает более высокую чувствительность определения антител при помощи реакции агглютинапионного типа при сохранении высокой специфичности и точности определения. Ф о р м у л а изобретения Способ выявления антител путем добавления к исследуемой сыворотке бараньих эритроцитов, сенсибилизированных специфическим антигеном, с последующей оценкой результатов в реакции пассивной гемагглютинации, о т л и - . ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, через 10-15 мин после добавления бараньих эритроцитов вносят куриные эритроциты, сенсибилизированные тем же анти- геном, причем для сенсибилизации бараньих эритроцитов используют антиген в 4-8 раз уменьшенной дозе.1536315 Таблица 2 Способ 4,8+1,2 0,4) Р )0,3 Р 0,001 3,3+ 0,8 Таблица 3 Способ Средний титр антител при сенсибилизирующей дозе антигена, мкгlмп1,6 1 1 1100 50 25 12,5 6,2 3,1 Известный 6400+1, 1600 ф,3 800+1,0 600+1,2 Отр 6400165 Отр,Предлагаемый юВСлабая Отр.Ф 4800+1,29200+1,2 1920011,2 19200+1,3аггл. вконтроле Отр. Нет задержки агглютинации, эритроцитов.%Ф Нет гемагглютинации в контроле,Составитель Г.КрюковаРедактор М.Циткина Техред М.Ходанич Корректор Н,Король Заказ 106 Тирак 502 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно"издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Среднийобратныйтитр реакции Известный 2560+ 1,1Предлагаемый7674 + 1,1 Достоверность различия титра Коэффициентварьирования,й Достоверностьразличия коэффициента варьирования