Способ определения антибиотика гризина

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(51) М. Кл.зС 12 Р 19/54 С 12 й 1/545 Гасударственный комитет Опубликовано 07.02.81. Бюллетень5Дата опубликования описания 15.02.81(53) УДК 615.779. .931 (088.8) па делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения ститут ьфкробйи 1 оиальн х- прет 1 аратов,с, .Г;с: г: Всесоюзный научно-исследовательский средств защиты растений и бак(71) Заявитель ИЯ АНТИБИОТИКА ГРИЗИН) СПОСОБ ОПРЕ Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам определения антибиотика гризина в препаратах кормогризина.Антибиотик гризин, образуемый культурой Ас 1. дг 1 зецз и относящийся к группе стрептотрициновых антибиотиков, является основным действующим началом препарата кормогризина, применяющегося в животноводстве и прицеводстве при откорме молодняка. Препараты кормогризина выпускаются промышленностью в виде кормогризина, кормогризина, кормогризина.Известен физико-химический метод определения грнзнна в культуральной жидкости 111.Метод заключается в выделении антибиотика из культуральной жидкости и его очистке либо с помощью ионообменных смол, либо путем отгонки с паром хромогена, получаемого при конденсации гризина с ацетилацетоном и определении очищенного антибиотика по реакции Эльмона-Моргана.Недостатками метода являются: большая трудоемкость и многоэтапность стадии выделения и очистки антибиотика, в результате чего способ не может быть использован 2для серийных определений при промышленном производстве кормогризина(недостаточная точность определений, ошибка определений превышает 15%),Цель предлагаемого изобретения - создание быстрого и точного способа определения гризина в препаратах кормогризина.Эта цель достигается тем, что выделениегризина из исследуемых растворов проводят путем избирательного осаждения антибиотика 0,75 - 1,2%-ным раствором молиб 1 о деновокислого аммония в кислой среде прирН 1 - 3 и получением его в виде молибденовокислой соли. Определение антибиотикав осадке проводят с помощью реакции Эльсона-Моргана. Продолжительность стадиивыделения и очистки составляет 10 - 12 мин.Ошибка способа составляет 5 - 7%,Пример 1, Построение калибровочногографика.Готовят основной раствор из эталона гризина с концентрацией 1000 мкг/мл, из которого приготовляют разведения 500 и750 мкг/мл. Далее в ряд центрифужных пробирок вносят по 5 мл каждого разведения.Во все пробы приливают по 1 мл О,1 НС 1и 1 мл 1%-ного раствора молибденовокиг802360 489 8 1 ОА- - тхаг - = ЧД,: - Т 368766 5 1 О Формула изобретения Соответствующая конц.гризина вмкгlмл (пографику) ОптическаяРазведениеплотность 1:8 0,290,425 766 Составитель Т. Тулякова Редактор О. Иванова Техред А, Бойкас Корректор С. Щомак Заказ 10153/32 Тираж 539 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4лого аммония. После двухминутной выдержки центрифугируют при 8 тыс.об/мин. По окончании сливают надосадочную жидкость. К осадку приливают 5 мл 0,5 раствора ХавСОз и 5 мл рабочего раствора ацетилацетона и проводят реакцию Эльсона-Моргана. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром.На миллиметровой бумаге строят калибровочный график, откладывая на оси абсцисс содержание антибиотика в пробе в мкг/мл, а на оси ординат величину оптической плотности.Пример 2. Анализ кормогризина.Готовят 10%-ную суспензию кормогризина в 0,2 НС 1. Экстракцию проводят в течение 2 час, После фильтрации фильтрат разводят дистиллированной водой 1:5, 1:8. По 5 мл каждого разведения ломещают в центрифужные пробирки и далее поступают так, как описано выше.Были получены следующие результаты. Расчет содержания гризина в препарате рассчитывают по формуле:где А - концентрация гризина в препарате мг/г или г/кг; а - полученная концентрация по графику в мкг/мл;б - разведение фильтра препарата;10 - начальное разведение экстракта;1000 - для перевода мкг в мг. 16 Среднее = 38,7 мг/г, т. е. препарат кормогризина. Пример 3. Анализ кормогризина. То же, что и в п, 2, но разведение фильтрата делается 1:2. Способ определения антибиотика гризина в препаратах кормогризина, включающий выделение антибиотика из исследуемых растворов и его выявление с помощью реакции Эльсона-Моргана, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности и способа, выделение гризина из исследуемыхрастворов проводят 0,7 - 1,2%-ным раствором малибденовокислого аммония в кислой среде при рН 1,0 - 3,0. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Попов А. И., Скворцова М. М. Физико-химический метод определения концентрации гризина в культуральной жидкости. Микробиологическая промышленность, 1974, вып. 4, с, 1.