Диагностикум для выявления антигена гепатита в

СОЮЭ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 19) (111 1 К 39/42 3(5 ГОСУДАРСПО ДЕЛ ВЕННЫИ КОМИТЕТ СССР ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ НТ(72) Джордж Эдвард Лоук и Бела Золта Хорват (США)(54)(57) диАГностикум для выявления АНТИГЕНА ГЕПАТИТА В, содержащий частицы полистирола размером 0,2-0,23 м с сорбированными на них специфически ми антителами при концентрации после них 0,053 и солевой раствор, о т л и ьюостинорчающиис повышения чув я тем, что твительност нительно со ума, он допо альную сывор ачестве соле жит физиологи щем количест онентов, мас ржит вино он с при енин тку морскихого раствораеский раство дерследу ном соот У,.истирол2-0,23 Частицы по размером 0 с сорбиров них специф телами при мкмаант ными ским онце ци О,последних О, Нормальная с морских свин Физиологичес ыв каЧастицы полистирола размером 0,2-0,23 мкм , с сорбированными на них специфическими антителами при концентрации последних 0,05%Нормальная сь 1 вороткя морских свинокФизиологический раствор 2-5 Остальнсе Диагностикум для вьэявления антигена гепатита В содержит водную сусг:;ензию мелко раздробленных частиц синте -тической смолы, покрытых очищеннымантителом, специфическим для повер;Аностного антигена гдпатита В, Этичастицы представляют собой сферические полистироловые частицы и,.еющиедиаметр примерно 0,23 мкм, но падхс,вяэт также частицы полистирола илидругих синтетических смол, напримеракриловых, имеющие одинаковые размеры 0,05-2,0 мкм. Антитела, специфические для поверхностного антигенагепатита В, предпочтительно получаютот млекопитающих, например,.людей,овец, коз, кроликов или морских свинок, или иэ птичьих источников, таких как куры или индейки, которыесодержат антитела, или были иммунизированы в высшей степени очищеннымповерхностным: антигеном гепатита Р,.полученным из крови человека,Изобретение относится к медицине и касается диагностического состава для выявления гепатита В.Известен диагностикум для выявления антигена гепатита В, содержащий частицы полистирола с сорбированными на них специфическими антителами и солевой раствор Г 1 з.Однако известный диагностикум не обладает достаточно высокой чувстви О тельностью.Целью изобретения является повышение чувствительности диагностикума.Эта цель достигается тем что диагноетикум для выявления антигена 15 гепатита В, содержащий частицы полистирола размером 0,2-0,23 мкм с сср,бированными на них специфическими антителами при концентрации последних 0,05% и солевой раствор, дополнитель- :б но содержит нормальную сыворотку морских свинок, в качестве солевого раствора он содержит Физиологический раствор при следующем количественном саотношении компонентов, мас.%: Морских свинок или других животных, таких как кролики, козы, иммунизируют поверхностным антигеном гепатита В по известному методу, Первичная иммунизация антигенам в полном вспомогательном лекарственном вешестве Ф 1 эеунда в подушечки лап сопровождается повторяемыми внутрибрюшинными, внутримышечными, подкожными или внутривенными прививками антигена с использованием или безиспользования вспомогательного лекарственного вещества, После смешивания сывороток, собранных от иммунизиро - ванных животных остаточное антитело для протеинов сыворотки человека, сли оно присутствует., удаляется пссредстьам контактирования антисыворогки с ногмальной сьэвороткой человека, Затем гамма-глобулин может изолироваться посредством преципитации , -ным водным сульфатом натрия диализироваться против буферированнога фосфатом водного физиологического раствора поваренной сали и, предпочо-.Ительно цо 5 б С в течение примерно :О мин, чтабы разрушить комплемент. Далее антитела очищают по общим известным метопам. Специфические поверхностные антитела гепатита В очищают от абсорбированных сывороток живатнсго предпочтительна сывороток морской свинки) посредством смешива: в.:Ия этих сывороток в оптимальных прог;орциях с. сыворотками человека со,.ержащими поверхностный антиген гепатита В, инкубиравания при 37 С в течение часа, а затем в течение ночи :;ри -. С. Образованный таким образом,апрепиг:итат (осадок) антиген-антитела дважды промывают в холодном буфери-, рсваяном Фосфатом Физиологическом растворе поваренной соли, чтобы уда.гить большинство остаточных неспецифических протеинов. Затем этот преципи"ат аптиген-антитела растворяют в холод:.сй 0,2 М уксусной кислоте (2% ахаразь:, рН 2,3) или различньэх мальных ко центраций хаотропических :;снов, пап;эимер 2,0 М тиоцианата натрия, рН 66. Могут использоваться другие ссответствующие буферные смеси чтобы, в .,Иссапиировать комплексы антигенантитело Эти диссациирсван ные антигены и антитела разделяют центрифугирсванием при 25000-28000 оборотов в минуту в течение 12-15 ч или ири 30000 оборотов в минуту в1091844 4лятор), добавляемый после абсорбирования антитела на частицах, напримеринертный протеин, такой как сывороточный альбумин при концентрации,например, 0,1 вес.7,/объем.Диагностикум также содержит нормальную сыворотку (т.е сыворотку,не содержащую ни антитело, специфическое для поверхностного антигенагепатита В, ни сам антиген), полученнуюот той же разновидности животных,что и та, от которой получена сыворотка, содержащая, антитела, Присутствие этой нормальной сыворотки существенно снижает процентный составложно положительных результатов,когда используют диагностикум длявыявления поверхностного антигенагепатита В в пробах крови, Предпочтительно около одной части нормальной сыворотки содержится на 20-50 частей (по объему) водной суспензиичастиц смолы, покрытых антителом.Если нормальная сыворотка от той жеразновидности животных, что и та,от которой была получена содержащаяантитела сыворотка, не содержится вдиагностикуме примерно 107 сыворотокчеловека, не содержащих поверхностного антигена гепатита В, будут агглютинировать частицы смолы, Это происходит благодаря присутствию такого рода веществ в сыворотках человека, которые реагируют с другими материалами,происходящими от антисыворотки животных, из которой получен поверхностныйачтиген гепатита В, Однако, если содержится нормальная сыворотка животного, только примерно 1-37 О сыворотокчеловека будут агглютинироватьчастицысмолы при отсутствии в этих сыворотках поверхностного антигена гепатита В. Это может иметь место при наличии в нормальной сыворотке животного,которые способны реагировать с этимивеществами в сыворотках человека итаким образом предупреждать их от вызывания агглютинации частиц смолы. течение 4 ч на непрерывном градиенте сахарозы порядка 10-407 в зональном роторе Бекмана типа Т 1-15. Ротор разгружают накачиванием в него 507 сахарозы. Чтобы смешать градиент, 20 мл 5 фракции проверя на ультрафиолетовое поглощение в 1 см ячейке при 280 яо-, пиковые фракции смешивают и получают очищенную фракцию специфического антитела и очищенную фракцию 10 антигена. Затем обе фракции нейтрализуют применением 0,1 н. ИаОН. Фракцию антитела концентрируют до объема исходной сыворотки и диализируют в течение ночи против буферированного 5 глицином физиологического раствора поваренной соли. Затем очищенное антитело титрируют и стандартизируют.0,17. азида натрия можно добавлять в качестве противокоагулирующего 20 средства для использования в приготовлении диагностического реагента. Антитела разбавляют путем приготовления небольших дозировок диагностического реал ента с различными разбавлениями антитела и испытания их с рядом сывороток человека, содержащих поверхностный антиген гепатита В, Разбавление, дающее лучшие показатели в сравнении с этим рядом, когда оно покрывает частицы смолы, выбирают для приготовления диагностического реагента.Разбавленные антитела смешивают с имеющими диаметр 0 2 мкм латексны 335 ми зернами полистирола, После смешивания в течение одного или двух часов эти зерна трижды промываются буферированным глицином физиологическим раствором поваренной соли. 40 Водная суспензия содержит примерно 0,5 вес.7/объем частиц смолы, но, может содержать и 0,1-3 вес.7/объем частиц смолы. Для приготовления диагностикума эта суспензия предпочти тельно содержит примерно 0,05 вес.7./ /объем антитела, абсорбированного на частицах смолы, но этот состав может меняться в соответствии с концентрацией частиц, Процентное содержание 50 антитела должно быть достаточным, чтобы предупреждать аутоагрегацию частиц резины. Для шарообразных частиц полистирола порядка 0,23 мкм в диаметре это составляет примерно 55 одну десятую веса частиц.Суспензия предпочтительно содержит стабилизатор дисперсии (антикоагуОбеспечивается контроль нормальной сыворотки человека, которая получается из неразбавленной нормальной сыворотки человека; она является отрицательной в отношении поверхностного антигена гепатита В при испытании ;,атексным реагентом и методом радиоактивных изотопов.Сыворотку положительного контролялоиготавливают и. имеющейся известной(человека).2. Контроль нормальной сывороткичеловека (отркпательный дляповерхностчого антигена гепа;кта В),3. Реагент поглощения ревматоидного фактора.Разбанитель подтверждающегоиспытания,21) 30 Связанные с гегатитам антитела (человека) получают из плазмы челоне 3( ка, которая содержит антитела для по - верхностного антигена гепатита В. Эту плазму принимают из различных плазмофорезисных (плазмопригатовительных) центров, ее тктрируют гепьб диффузией и преобразуют в сывороткс путем добавления хлорида кальция к бычьего тромбина, Затем кз этой сы воротки приготавливают гамма-глобулкн путем прецкпитацки 167-ньгм сульфагсм натрия. Посля промывания прецкпктата (осадка) в 147-11 ом сульфате натрия состав диялизиру 1 от в течение всей но чи против низкой молярности фосфа г . ного буфера и пропускают через цепь 1 люлозу типа ДЕАЕ, уравновешенную тем же буферам. Очищенный гамма-глав булин затем стандартизируют пс концентрации и диализиоуют против буфе рированного фосфатом физиологического раствора поваренной соли,Реагент абсорбента ревматоидного фактора состоит из .г 1 атексных зерен (бусинок, шариков) покрытых нармяльположительной на поверхностный янтиген гепатита В сыворотки человека, Эту сыворотку подвергают термообработке при 60 С в течение 10 ч, а затем дважды последовательно разбавляют в нормальной сыворотке человека, Разбавление, используемое для этого продукта, представляет собой разбавление, дающее определенную реакцию 1 латексным реагентом.1 бДиагностикум состоит кз следующих компонентов.А. Система отсеинающего испытания,Связанные с гепатитом антитела,абсарбираванные на ла.тексных 1:зернах (бусинках, шариках),2. Сыворотка положительного контоным гамма-глосэулином человека. Он образуетс 5: посредством приготовленият ЯНДЯРТ 1 О РЯСТВОРЯ ОЧИЩЕННОГО 1 амма -глобулина в буферированном глкцинс 1 м физиологическом растворе нс 111 аре гной соли с добавлением сус.:Нэик из 0,2 мкм полистироловых .:р 11 и путем нагревания при 57 Стечение 15 мин Затем эту суспензию рс 1 збанляют и оуфериронаннам Глицинам фкзиологиче=ком рантворе поваренной соли,Разбавктель подтверждающего испытания г 1 риготавлинают путем разбавления рас.тнора 307-ного альбуминаоычьей сыноротки оуферированным фосфатом с 11 изкслогического раствора повар;.Нной соли да 5 Е-ной концентрациипроте сна,.1 снь танкя провод.ят следующим образом,11 р 11 готавливают пробы кровк.Сыворотка является предпочтительной формой пробы (образца) крови.Если г 1 роверяемая проба представляет сооои цельную кровь, ее необходимо сначала обработать, чтобы растворить н ней клетки и предупредить коагуляцк;о. Для эгой це;1 И ее обрабатывают водным разбавктелем, содержащим безианное поверхностно-активное вещество ти:,а па 5151 окскэтилкрованного алкилсоенола например изооктилфенокси-полиОксиэ 1 илэта 11 сл:-1 лимонно-кислый нятакйпрс 1 зеряемая проба гсредстянляет сооой сыворотку крови она должна. содержать антикоагулянты, такие как г:кмонло-кислый нагрий, Преимущественно ее также обрабатыва 1 от тем же самым нодньгм разбавителем, содержащим без 51051 нае поверхностно - яктивнае веществокяк к дгяельной крови, чтобы раствор 51 ть л 1 оаые Остаточные клетки присутстг 1 ующив ней. Спе"кфкчность реагента определяют путем сравнения =га с целым рядом ног:ожктельых и отрицательных сывороток поставляемых Бюро Биологических наук, а тя 1 ке с рядам из 100 отрицатеГ 1 гных сьп 1 оратаксоаряннь 1 х от нор мальных добровольцев.Рг, в .Кцконну 1 о способность определякгг путем суспендирования данного реагента энергичныч перемешиванкем, для этого в одно из испытательных углублений на пластмассовых лабораторных пластинах налкна 1 от 3 капли сывороткиположительного контроля. Во второеприлежащее углубление наливают 3 капли сыворотки отрицательного контроля,К каждой пробе добавляют по однойкапле реагента. Перемешивают полностью,используя отдельный миксер для каждого углубления. Вращают пластину намеханическом ротаторе в течение 10 мин"о скоростью вращения 150 оборотовв минуту. Проверяют смеси через освещаемый отраженным или рассеяннымсветом просмотровый прибор.Отчетливо положительная, слабая(1 ) реакция должна наблюдаться припробе сыворотки положительного контроля, Никакой реакции не должно наблюдаться с пробой сыворотки отрицательного контроля.Реакционную способность сыворотки положительного контроля испытывают 20латексным реагентом, чтобы гарантировать реакционную способность порядка 1+Сыворотку отрицательного контроляиспытывают латексным реагентом, чтобы гарантировать отрицательную реакцию.Контроль нормальной сывороткичеловека,Проверку на специфичность правадятЗОдля того, чтобы убедиться, что онане реагирует с латексным реагентоми что она не подавляет положительные,сыворотки в отношении поверхностногоантигена гепатита В. 35Связанные с гепатитом антитела(человека).Реакционную способность проверяютпутем гель-диФфузионного титраванияпосредством использования стандартного поверхностного антигена гепатита В.Испытания на специфичность проводят, чтобы определить, будет ли этасыворотка специфически подавлять положительные пробы поверхностного антигена гепатита В,Реагент поглощения.Реакционную способность определяютпутем испытания реагента с сывороткаОми, содержащими ревматоидный фактор,чтобы гарантировать его реакцию сэтим фактором и частичное поглощениеего из сывороток. Разбавитель подтверждающего испытания.Испытания на специфичность проводят с использованием этого разбави 1 теля, чтобы убедиться, что он не реагирует с латексным реагентом и что ан не подавляет положительные сыворот ки поверхностного антигена гепатита В.Испытание проб сыворотки (отсеивающее испытание) проводят путем отделения 120 и. сыворотки в углубление на пластмассовой пластине.Добавляют одну каплю латексного регента.Полностью смешивают, используя отдельный находящийся в пользовании миксер для каждой пробь (образца).Вращают пластину на механическом роторе в течение 10 мин со скоростью 150 оборотов в минуту.Проверяют смеси через совмещаемый отраженным или рассеянным светом просмотровый прибор,Реакции подсчитывают по баллам на шкале ат 11 до 41, соответствующей увеличению интенсивности агглютинации,Подтверждающая процедура нейтрализации.Помечают одну пробирку объемом10 х 75 мм идентификационным номеромпробы и индексом "А". Помечают вторую пробирку идентификационным номером пробы и индексом "В",Добавляют две капли (примерно80 о.1) связанного с гепатитом антитела (человека) в пробирку, снабженной индексам "А".Добавляют две капли нормальнойсыворотки человека отрицательногоконтроля в пробирку, снабженную индексом "В".Добавляют 240.1 испытательной пробы в каждую из пробирок, отмеченныхиндексами "А" и "В".Перемешивают содержимое этих пробирок и подвергают инкубации в течеоние 30 мин при 37 С в водяной ванне.Испытывают 1204. из пробирок "А"и "В", используя атсеивающие реагенты и процедуры. Для большинства относительно мало титрованных положительных проб дифференциация между специфическими и неспециФическими положительными результатами может быть бездальнейшего испытания, посколькупроба А нереагирующая, в то время,как проба "В" остается положительной,показывая специфическое подавлениеантителом человека. Для тех образцов,которые являются специфическими, ноболее сильно титрованными, а такжедля тех, которые являются неспецифическими, требуется дальнейшее испытание.Для каждой пробирки, требующей 5дальнейшего испытания, помечают дополнительные шесть пробирок с разбавлениями от 1 : 4 да: 128, атакже идентификационным номером пробы и индексами "А" или "В", 10Добавляют 200 о. разбавителя подтверждающего испытания в каждую пробирку, включая пробирки, которые содержат пробу пациента и антисывороткучеловека или нормальную сыворотку 15человека, т.е. исходные пробирки "Аи "В", делая разбавление в них примерно 1 : 2.Дважды разбавляют переносом 200 р.1,используя отдельные микрапипетки для Окаждой пробирки и хорошо перемешивают перед удалением проб.Испытывают 120 р.1 из каждой пробирки, используя отсеивающие реагенты и процедуры,)5Титр, полученный в ряду. "В" (пра -ба и нормальная сыворотка человека),должен быть в четыре раза (две пробирки) выше, чем в ряду "А" (пробаи нейтрализующее гепатит связанное 10антитела (человека) для того, чтобырассматривать пробу (образец) в качествеспецифического позитива поверхностного антигена гепатита В.В случае, когда, как титр нА", таки титр "В" является выше, чем 1:128,разбавление должно производиться далее до тех пор, пока не будет определена конечная точка.Поскольку целый ряд проб содержа-"О щих ревматоидный Фактор, реагирует с латексным реагентам, необходимо диф-. Ференцировать пробы, содержащие как поверхностный антиген гепатита В такь 15 и ревматаидный фактор,Присутствие ревматоидного Фактора можно определить испытанием сыворотки реагентом поглощения ревматоидного Фактора (латекс, покрытый гамма-гло 50 булином человека) путем смешивания ь120 мл пробы и одной капли поглощающего реагента на пластмассовом слайде и вращения в течение пяти минутьЕсли проба содержит ревматоидный Фактор, она может поглощаться посредствам добавления 720 р. пробы в пробирку 10 х 75 и добавления шести капель поглошающего агента в эту пробирку, Хороша перемешать и инкубировать при комнатной темгерагурев ечени няги минуьт, Выполнить подтверждающую процедуру нейтрализациина абсорбированной проСе,Приготовление очищенного антителаповерхностному антигену гепатита В,;1 орских свинок иммунизируют поверхностным антигеном гепатита В,очишенным известным способом.Первичная иммунизация антигеномв полном вспомогательном лекарственном веществе фреунда в подушечки лапморских свинок сопровождается двумявнутрибрюшинными прививками этогоантигена без вспомогательного лекарственного вещества, После объединениясывороток, собранных от иммунизированных животных, остаточный протеин,если это необходимо, удаляют посредством контактирования антисывороткис нормальной сывороткой человека.Гамма-глобуьлин затем очищают посредством преципитации с 14 вес,%/объемводным сульфатам натрия, диализируютпротив буферированного водным фосФатом физиологического раствора поваренной соли и предпочтительноо,нагревают при 56 С в течение примерно 30 мин чтобы разрушить комплемент. Очищенную сыворотку смешивают с сывороткой человека, содержащей поверхностный антиген гепатита В, подвергают инкубации при 4 С. Полученный таким образом приципитаг антиген-антитела затем дважды промыва 1 от в холодном буферированном фосФатом Физиологическом растворе пова - ренной соли, чтобьь удалить большинство остаточных неспецифических протеинов, Затем этот преципитат антиген-антитела растворяют в холодной 0,2 11 уксусной кислоте (2% саха- розы, рН 2,3 или хаотропических. ионов),ьЗти диссоциированные антигены и антитела разделяют центрифугированием при 25000-28000 оборотах в минуту ь течение 12-5 ч, или при 30000 оборотах в минуту в течение 4 ч на непрерывном 10-40%- ном градиенте сахарозы в зональном роторе Бекмана типа Т 1 - 15. Ротор разгружают посредством нагнетания 50% сахарозы в него, чтобы смешать градиент, а 20 мл фракции проверяют на ультрафиолетовое поглощение в 1 см ячейки при 280 мл, а пиковь 1 е Фракции объединяют чтобы давать очищенную, 1091844 12специфическую фракцию антитела, которую затем нейтрализуют 0,1 н. ИаОН. Фракцию антитела концентрируют до исходного объема сыворотки и диализируют в течение ночи против буфериро ванного глицином физиологического раствора поваренной соли, Затем очищенные антитела титруют и стандартизируют,Эти антитела оптимально разбавляют путем приготовления малых дозировок диагностикума с различными разбавлениями антитела и испытания ихпротив целого ряда сывороток человека, относительно которых известно, что они содержат поверхностный антиген гепатита В. Разбавление, дающее наилучшее показание против этого ряда, когда нанесено на частицы смолы, выбирают для приготовления диагности кума.Диагностикум готовят следующим образом,П р и м е р 1. 30 вес.7/объем водной суспензии 0,23 мкм полистироловых шариков разбавляют до 8 вес.7/ /объем буферированным глицином физиологическим раствором поваренной соли и диализируют против буферирован 30 ного глицином физиологического раствора поваренной соли в течение всей ночи, Затем ее немедленно добавляют к 9 объемам очищенной антисыворотки морских свиноксодержащей антитела поверхностному антигену гепатита В 5 (разбавленному до 0,05 вес.%/объем) и постоянно перемешивают в течение 30 мин. После этого добавляют один объем альбумина бычьей сыворотки (1 вес.7/объем) и затем - азид натрия, чтобы концентрация была порядка 0,1 вес.7/объем в окончательном продукте.П р и м е р 2. 30 вес.7/объем 1 еуспензии полистироловых шариков45 (0,05-2,0 мкм) разбавляют до8 вес.%/объем буферированным глицином физиологическим раствором поваренной соли и стерилизуют посредством добавления раствора гипохлори О та, Затем диализируют против буферированного глицином физиологического раствора поваренной соли, чтобы удалить гипохлорит. Затем этот состав добавляют к 9 объемам с соответству ющим образом разбавленной, очищенной сыворотки морских свинок - антителам поверхностного антигена гепатита В. Полистироловую суспензию добавляют медленно с перемешиванием, которое продолжается в течение одного часа. Полистироловые шарики центрифугируют, дважды промывают на центрифуге буферированным физиологическим раствором поваренной соли и снова суспендируют в исходный объем в буферированном физиологическом растворе поваренной соли. Альбумин бычьей сыворотки добавляют с перемешиванием в течение 30 мин. Одну десятую объема разбавленной нормальной сыворотки от неиммунизированных морских свинок (разбавленной 1:3,5 буферированным глицином физиологическим раствором поваренной соли) добавляют к этому составу и смесь снова перемешивают в течение 30 мин, и, наконец, эту смесь энергично встряхивают, чтобы диспергировать любые агломерации частиц. Все растворы, которые использовались, стерилизуют посредством фильтрации и содержат в себе 0,1 вес.%/объем азида натрия в качестве стабилизатора дисперсии (антикоагулятора).П р и м е р 3. Сыворотку положительного контроля готовят из целого ряда известных в качестве положительных на поверхностный антиген гепатита В сывороток человека. Эту сыворотку подвергают тепловой обработке при 60 С в течение примерно 10 ч, а затем дважды последовательн 9, разбавляют в нормальной сыворотке человека. Используемое разбавление является таким, которое дает (1-4) реакцию с латексным реагентом по примерам 1 и 2. Затем этот состав стерильно Фильтруют и помещают в стерильные контейнеры.П р и м е р 4. Сыворотку отрицательного контроля получают из неразбавленной сыворотки человека, которая показала себя отрицательной в отношении поверхностного антигена гепатита В при использовании латексного реагента по примеру 1 или примеру 2 в применении метода радиоактивных изотопов. Состав стерильно фильтруют и помещают в стерильные контейнеры.П р и м е р 5. Плазму человека, которая содержит антитела поверхностному антигену гепатита В, титруют гельдиффузией и преобразуют в сыворотку посредством добавления хлорида кальция и бычьего тромбина, Гамма-глобу10918 чч СоставительСмирноваРедактор С. Тимохина ТехредЖ,Кастелевич Корректор С. ШекмаР Заказ 3104/56 Тираж 688 ВНИИПИ Государственного комит.та СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб , д, - /5Подписное филиал ППП "1.атент" г. Ужгород., ул, Проектная, А лин затем приготавливают из этой сыворотки посредством преципитациис 16 вес.7./объем сульфатом натрия.После промывания этого преципитатав 14 вес,7/объем сульфата натрия 5его диализируют против фосфатногобуфера низкой молярности и пропускают через целлюлозу типа .ЕАЕ, котораябыла ранее уравновешена тем же самымбуфером, Очищенный гамма-глобулин 10затем стандартизируют и диализируютпротив буферированного фосфатом фи-.зиологического раствора повареннойсоли. Затем этот состав стерильнофильтруют и помещают в стерильные 15контейнеры,П р и м е р 6, Стандартный раствор очищенного гамма-глобулина чело-.века в буферированном глицином физиологическом растворе поваренной солн 2 Одобавляют к суспензии 0,2 мкм поли-.стирольного латекса и нагревают при57 оС в течение 15 мин, Суспензию, используемую для абсорбирования ревматоидного фактора в испытываемых сы - 25воротках, разбавляют в буферированномглицином физиологическом растворе поваренной соли и помещают в стерильныеконтейнеры,П р и м е р 7, Разбавитель подтверждающего испытания приготавливают посредством разбавления раствора30 вес,Е/объем раствора альбуминабычьей сыворотки в буферированномфосфатом физиологическом раствореповаренной соли до 5/-ной концентрации протеина. Зтот раствор затем стерильно фильтруют и помещают в стерильные контейнеры.П р и и е р 8, Относительно концентрации очищенных антител морских свинок; объем суспензии полистирола смешан с таким объемом очищенной антисьпзоротки морских свинок, что получаемая в результате суспензия будет иметь концентрацию антител.равную 0,05 процента в/в, т.е, продукт содержит около 0,8 процента в/в сфер полистирола и примерно 0,05 про/цента в/в антител по отношению к поверхностному антигену гепатита В.П р и и е р 9. Аналогично примеру 1 продукт содержит 0,8 процента сфер полистирола. Кроме того, он содержит одну десятую объема (10 процентов в/в) разбавленной в отношении 1:35 нормальной сыворотки морских свинок, Разбавленная в отношении 1;3,5 сыворотка соответствует раствору, который содержит примерно 30 процентов в/в сыворотки, Соответственно, конечный продукт содержит около 3 процентов в/в нормальной сыворотки моро сях свинок Предлагаемый диагностикум обладает высокой чувсгвительностью для выявления антигона гег:атита В за счет того, чзо используют высоко очищенные антитела и нормальную сыворотку тои же разновидности животньгх, от которых были получены сг,ецифические антитела, что позволяет снизить число ложно положительных результатов.