Способ получения коллагеназы

,ИЗОБРЕТЕН ИЯСаиз СоветскиСвциеиистическик Респубиик АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬ СТ Г 61 ;гоуо Ое г; звт свид-Вт ги вг 51) М, Кл,е С 12 0 13/ 20,03.78 (21) 2592886/28-13 22) 3 аяв оединением заявки с Яе Гасудерствеииый камите 3) П итет звбретевя а леле 0,10.79. Бюллетень4) Опубликова ткрмт публикования описания 30.10.7 45) Дат 72) Авторы изобретени(54) СПОСОБ ПОЛУЧ КОЛЛАГЕНАЗЬ носится к области микется производства бактных препаратов.получения коллагенаирования продуцента 1 сгггп в анаэробных ус .ной среде, содержащей а и азота, с последую очисткой целевого проколлагеназы составляет ичность - 80 Й/. М/мл К 1/,гьтурально-.чорфо.гогические лризнакгг. го жная трам-ннложптельная палочка размером 0,5 - 0,7 КЗ - 5 мкм. Образуетспоры.Агар. Образует колонии в виде комочков ваты.Бульон с глгокозон. 11 ом 1 гненне с образованием на дне легкого осадка.Кровяной агар. Гемолиз.Фтиолого - бггохилгическае рАнаэроб, оптимум роста при 37 С,Углероды не ферментир ет.Индол не образует.Молоко свертывает.Активно продуцирует коллагеназу,Способ осуществляется следующим ооразом,тг изнаки й способ не позволяет продукт, обладающий ю и низкой токсичноОднако известиполучить целевойвысокой активностстью.Целью изобретеактивности и снижвого продукта.Эта цель достигве продуцента испЙцтп Ыз 1 оШ 1 сшп 4ведут на питательв качестве источни ия является ение токсин овышенне сти пелеС. 11 гзо 1 г 1 гсцгпс добавлениеследующего солизатая водаа (1:1000)соль (х. ч 1рошая, что в качестштамм С 1 оз 1 г 1- .льтивированиесодержащей да глюкозу,ается темользуют68, а куной среде ка чглеро ллекции культур рственого контро инских биологиче А. Тарасевича. Шта.мм нится в ко мов Госугда тута медиц тов и,м. Л. о 1 г 11 сггп; хра- микроорганизльного инстиских препараание провод С. Затем фпл;.с 1 нны ф Изобретение от робиологии и каса териальных ферменИзвестен способ зы путем культив С 1 оз 1 г 1 с 1 шгп 1 з Ыо 111 ловиях на питателг источники углерод щим выделением и дукта. Активность ,500 КЕ/мл, токс 11) Культуру2 г 1 бульон Рамонаему) глюкозыМясной гидрВодопроводнМясная вод25 ПовареннаяКровяной поГлгокозаКу льтивиротемпературе 37ЗО стерилизующие засевают в м 10 о (по объостава:250 мл 250 мл 500 мл о) 10 г5 г10 г ят 48 ч при льтруют через ильтра Саль694534 Составитель Е. ДубовицкаяТсхрсд Л. Камыцнкова г,о 1)ректор Л, Степанова Редактор Д. Павлова Подписное Изд, Кв 633 Тираж 549 НПО Поиск осударствснного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская наб., д. 4/5Заказ 7030 Загорская типография Упрполиграсриздата Мособлисполк ма 3янкова. Фильтрат осаждают 60%-,ным сульфатом аимония, оставляют на 16 - 20 ч лри (+6) - (+8)С, Образовавшуюся на поверхности пленку растворяют в 0,85 О/-ном растворе поваренной соли, Полученный ра створ, минуя стадию диализа и высушивания, подвергают очистке методом гельфильтрации на колонке, заполненной сефадексом 6 100. Степень очистки коллагеназы составляет 3300 - 8333 КЕ/мг общ, 10 азота).Пример, 10 мл культуры С 1. Ыйо 1 г,1 сцгп 468 засевают в 4 л бульона Рамона с 1%-ной глюкозой, прогретого до 50 - 60 С, Вытаращенную культуру фильтруют через 5 фильтрующие и стерилизующие фильтры Сальникова, предварительно смоченные физиологическим раствором поваренной соли, Полученный фильтрат осаждают сульфатом аммония из расчета 6 кг соли на 10 л 20 фильтрата. Осаждение проводят при комнатной температуре. Выпавший осадок интенсивно перемешивают с надосадочной жидкостью и оставляют при температуре ,(+6) - (+8)С на 16 - 20 ч. Образовав шуюся на поверхности жидкости пленку растворяют в 0,85%-ном растворе поваренной соли, рН 7,2, в 1:50 первоначального объема. Затем проводят очистку методом гельфильтрации. Для этого полученный раствор наносят на колонку, предварительно промытую физиологическим раствором поваренной соли (рН 7,0 - 7,2) и запо.пси,ную сефадексом Ст 100. Размер колонки 7 К 55 см. Элюацию проводят физиологическим раствором, рН 7,2, Свободный объем 600 в 6 мл отбрасывают и собирают фракции коллагеназы до выхода ппг 4мента и сернокислого аммония. Очищенную коллагеназу стерилизуют через керамические свечи Чамберлена 51. 7, разливают в вакуумные ампулы и лиофильно высушивают в вакуумных аппаратах. Режим сушки: замораживание при - 45 С в течение 20 - 24 ч, продолжительность высушивания 44 - 48 ч при максимальной темпе. ратмире +35 С,Активность коллагеназы составляет 1000 коллагенозных единиц в 1 мл, токсичность 2 1 П, М/мл.Использование изобретения позволит получить высокоактивный, очищенный, атоксичный препарат коллагеназы. Формула изобретения Способ получения коллагеназы путем культивирования продуцента С 1 оз 1 г 1 с 11 цпз 11 Ыо 1111 сцгп в анаэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с последующим выделением и очисткой целевого продукта, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения активности и снижения токсичности целевого продукта, в качестве продуцента используют штамм С 1 оз(г 1 с 11 цгп Ыйо 1111 сц 1 п 468, а культивирование ведут на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода глюкозу. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе