Способ определения биосинтеза белка

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ И АВТОРСКОМУ СВИДИВЛЬСТВУ Союз СоевтскниСоцналнстнцеаааРеспублнк(11) 602863. т полнительн эву вт. св 76 (21) 2326174/28-1 1) М. Кл.й 01 И 33/16 22) Заявлено присоедине заявкиГесудерстеенный иоиитеСовета Мииистрое Сео.делам иэооретеия открытий.78 2) Автор изобре 1) Заявитель ПРЕЛЕЛЕНИЯ БИОСИНТЕЗЛ БЕЛКЛ Изобретение относится к обпасти мопекулярной биологии и может быть использованов медико-биологических исследованиях,Известен способ опредетения биосинтезабелка в цитоппазме зародышевой ткани путем фетксвции, гидропиза срезов панкреатической рибонуклеазой, специфического окрашивания количественной оценки остаточныхРНК 1 Ц, Однако известный способ не обеспечивает получения данных о количестве транслирующих ри босом.Цепью изобретения является получениеданных о количестве транслирующих рибосом.Эта цепь достигается тем, что среды обрабатывают;трипевцом и оценку функциоиальной активности рибосом проводят по остаточному копичеству РНК и белка,Способ осутцествляют следующим образом,Проводят фиксацию исследуемого материала в денатурируюших смесях. Готовят серийные препараты исследуемого материапа, срезы тканей ипи их отпечатки и мазки, Последепарафинизвции и обводнения серийные препараты подвергают гидропизу в растворахкриствппических. ферментов рибонуклеаз в то- д чепце 15, 30 мпн, 1 - 4 чс интервальнымразличием в 30 мин в течение 24 ч и трипсина в течение 30 мин с интервальным различием в 3 мин и в течение 1, 5, 2 ч, Гидролизированные, кисл отораствори мыв фр агме иты удаляют 5%-ной трихлоруксуской кислотой,Употребляют растворы ферментов допустимо высокой концентрации и проводят ексгракцию при повьппенной температуре до 41 С,очто обеспечивает насыщение фермейтвми суострата и его исчерпывающую сорбцкю,Затем гидропизированные в ферменте рибонуклеаза и контрольные, неподввргавщиесяферментативному гидропизу, препараты вцетилируют и для воспроизведениях РНК, окрашивают краситеттам гадлоцивнином с хромовыми квасцами контрольные и гидролизовацные в трипсине препараты, дпя воспроизведения суммарного белка окрашивают красителем бромфеноповым синим с сулемой, Выборкрасителей зависит от их пригодности дляколичественной питохимии,Все препараты обезвожнвают, диф 1 ерепиируют, просветляют и заключают в бальзам,Проводят морфо-фотометрию исследуемых суб"( "кувтЯИоирсЛЬ С ИклИЯЛКИУИНЯРедактор Ао "пииовоанлова :.Нхрзд Зб Фанта Корректор С, ГарасиннкЗаказ 184 О/4 О 7 ирюк 13.12ПодписноеЦНИИГП 4 Гоцдарсюзнииого кощтета Совета Министров СССРчо пел рик ик зобр Йени Й ик открьти й11 ЗИЗЗ, Москва, к Зб, Рнушсквн нвбд, 4/ЬРнлнн ППП Пнкннг", г. Ужгород, ул. ИИкснкгннн, 4 Кпвт сииио..",:.,. "., ".,. Ои р ко, .ини,Л Ь уй их .к Г: ди 3 О ЛИЗЧРОВдВЕ Г иУ" ЙЯП дик ЯХ к Г РОРУк 8 БпкиЬи ДЯБ ным оц зделзгит отнв-ителик кпяе обгче и остато.ДЬЗ Кж:".:=.ЕСТВЯНй И ОЯПКОВс СтРОЯтСроки ппфпывари ец; ИЙнР.;укииз .-.пйоявлякиице Госфн Еи,дн,"ило",.,б иб Уоо .м, к.44 Йивогпл Эсд. р ,Дф, ВЬИИ, фчбак И ИИУИ Ил ВОЗ .",УИИ.КД ИЛИИ Ио 7 ИОЛИИК ИЙ.ГОСЧ 8 ЭТОТО кприевоуилт Б,.ПИЭ ЯКТИВНОСТей Иогни уи 1 ивкка лцг и -пн -,.;,.", лункуоМ Йивк,:кнТия .Уки, Вянякцк 8 др ок яд " " "-о:ии ОС"ка окоСЧкклиоя Я дкв И бикп КОВ дпни И:,В .ф,-,.,-";аУ -ЯаикдоетРЫ фНЙкпик(ОВЯЩЬ, ИЫХИ 68 ПОУАЯБтеэдИП;ХкОЙПИХ ЯКТИВВИЖТЕЙ ПибОСфЯ 1 ИЧИПИуд ИИ Я.ОИк-кнИЛ -гА.Зиск В 8 ПИНИИИИХ 06- фкгондол ггн,;к;,б,-;:р-.;, в ки Уды;,щтл уиви 4 идз Соиил. ЮЗХ ЭЩНжииДЗХ Уивпк"ЗИн."."Ри иИнОЦЗРЯЯВИЙиерньий ПифД. ЯгоЪ".р ОЛОконцтеэир 7 Юиицей ЯКТИВВОС 1 рц иъкбИуд-ки рокк-зоскр-уу,-кнк к цеЕ кИЗСкккй О Я коакрИЗ)нк, к ," . :. , ИИ н" фн Т ЙиидиЕСТВв Онбргъп" инигИиие:ридпиПки цирк ц ИЮ ГЕ Н 8%и кпп, исикк ип.;-ЗО 1 Иврит и, Я оп кол".оп дсукигрихПоокинзЩПЯиЬНии кпт кбькИРИ К Зсд ОиЩК МокВТ.,ОИЙ ИИЯЦЗВИГ;-И, .л:.ИЗ О-,СИННК,"ИЧНГ;И,-ЗЙ ЯКТНВНОСТЙииЦбик д кннк. ичкуокурует Об ивк ЛИЧЗСТВО Виу 1 ркнпнбОСРЙкиВЬБЬЙ: ЙОГИМЕЗНЗМ"ОВ щиц ЧОКНСЛ От Ч пп ииопивсгу с- ни кн",уикиутк О и ки;и, и-,т. руинах рибосом, так как одна рнбосома сиьтезирует топько одну белковую мопекулу вОДИН ОТР 8 ЗОК ВР 8 Ме НИ вГЙрежаГаемьй способ обеспечивает получ 8 Б 28 данных О количестве транслирующихрнбжом,Использование предлагаемого способа определеьща биосинтеэа белка позвонит установить роль изменений активности етого проц 8 сса при тех илн иных функциональных и паТОПОГИЧЗСКИХ СОСТОВНИЯХн ЧТО ПОМОЖет Рапиональной выработке рофипактических и пеюбных вероприитий,Ф ор мул Й и э обре те Ви ВСпособ определения биосиитеэа белка вцитопцаэме эародьпцевой ткани путем фиксации гидрмиэа срезов панкреатической рибонуклеазой, спепнфичейсого окрашивавни, копи-ЧеонвВИЭВНОЙ ОНЕВКИ ОСТЯТОЧВЫХ .РНКф О Т Л Ич а ю щ и й с и тем, что, с цепью попуч 9%":я джБ 1 ьи О копич 8 стве транслирующих рибОСОМИ СреЗЫ ОбрабатЫВЯЮТ трИПСИНОМ И ОцЕНку фущпионедьной активности рибосом проводят по остаточному капичеству РИ и белка.Источники информации, принятые во внтмяии при зкспртизе