Реактив для качественного определения пролина

пп 566873 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУСоюз Советских Социалистицеских Республик(23) ПриоритетОпубликовано 30,07.77, Бюллетень28Дата опубликования описания 20,10.77 осударстееннын комнтеСоаета Мннистроа СССРоо делам нэооретеннйи открытий(72) Авторы изобретения М. ф,. Томашевская и Б, С, ЗименковскийЛьвовский государственный медицинский инстит 71) Заявитель) РЕАКТИВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИ ПРОЛИНА2 микробиологиче ется применения атина и его про лизатинтиосеми бщей формулы- с - ко.5 СН Изобретение относится кской промышленности и касатиосемикарбазона1-метилиизводного 1,6 - бис - (1 - меткарбазон - 3 - ил - 4) гексана о где К - водород или - (СН,), - ,в качестве органических реактивов для качественного определения пролина, в частности для специфического проявления пятен пролина на роматограммах, и может быть использовано в биохимических и клинических лабораториях.Неза мещенный тиосемикарбазон1-метилизатин, известный под названием Метисазон, применяется в настоящее время только в качестве лекарственного средства 1.Для выявления аминокислот применяют очень много реагентов, из которых наиболее известны нингидрин, аллоксан, незамещенный изатин, хинизатин, индандион,3 12.Указанные соединения неспецифичны для отдельных аминокислот и применяются наиболее часто для полихромного проявления этих кислот на фоне тонкослойпых хроматограмм. Целью изобретения является выявление среди производных изатина соединений, которые могли бы быть использованы в качестве специфических проявителей пятен аминокислот 5 на хроматограммах.Это достигается применением известноголекарственного препарата метисазона и его производных в качестве специфических реагентов лишь на пролин, которые позволяют 10 идентифицировать его наличие даже в смеси сдругими 1.-аминокислотами.При взаимодействии пролина с тиосемикарбазоном1-метилизатияа образуется соединение, для которого определен максимум по глощепия Хс -- 586 нм (в метаноле),П р и м е р 1, На хроматографическую бумагу Г 111 га 114 наносят микропипеткой по 0,01 мл, 0,02 мл,до 0,07 мл водного раствора, содержащего в 1 мл 0,02 мг пролина, 20 После кратковременного высушивания при50 С бумагу протягивают через 0,4%-ный раствор метисазона в ацетоне, подкисленном уксусной кислотой (смесь 96 мл ацетона и 4 мл ледяной уксусной кислоты), Затем бумагу по мещают на 3 - 5 мин в термостат, нагретыйдо 115 С, при этом пятна, содержащие 1 мг и более пролина, окрашиваются в зеленый цвет.Аналогично проявляют пятна пролина припомощи 1,6 - бис - (1 - метилизатинтиосеми карбазоп - 3 - ил - 4)-гексана, применяя болееКорректор Л. Денискина Редактор Г. Лановая Заказ 1885/14 Изд. М. 635 Тираж 563 НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 415Подписное Типография, пр. Сапунова, 2 сильно подкисленные (до получения прозрачного раствора) растворы препарата. Чувстви,При мер 2. Одну каплю водного раствора аминокислот, содержащую по 1 мг Р 1.-а-аланина, 1.-аргинина солянокислого, аминоуксусной кислоты, 1.-аспарагина, Р 1. Р-аланина, Р 1-р-фенил-а-аланина, Р 1.-валина, 1.-гистидина солянокислого, 1. - глутаминовой кислоты, Р. - лейцина, Р 1. - лизина солянокислого, Р 1.-метионина, Р 1.-норвалина, Р 1.-норлейцина, Р 1.-орнитина солянокислого, 1. - цистеина солянокислого, Р 1. - серина, Р 1. - триптофана, 1.-оксипролина и пролина, наносят на хроматографическую бумагу РШга 1 с14. Бумагу высушивают и производят хроматографирование в системе растворителей н-бутиловый спирт в ледяная уксусная кислота - вода (4: 1: 5 - верхний слой). Через 18 ч хроматограмму высушивают в термостате при 70 С и опрыскивают растворами (как в примере 1) тиосемикарбазона1-метилизатина и его гексаметиленбиспроизводного. После нагревания хроматограммы в течение 3 - 5 мин при 115 С проявляются только пятна пролина.Предлагаемые реагенты не дают цветных пятен на хроматограммах с 1.-аминокислотами (за исключением пролина), даже в количестве 20 мг. В то же время пролин дает заметное зеленое пятно уже при количестве 1,0 мг, при 20 мг пятно является темно-сине- зеленым, фон хроматограммы - светло-оранжевый,тельность выявления пролина почти аналогична предыдущему способу. Предлагаемые реагенты позволяют быстрееи качественнее по сравнению с существующи ми методами проводить анализ по определению наличия пролина в аминокислотной смеси. Формул а изобретения Применение тиосемикарбазона1- метилизатина и его производного 1,6-бис-(1 - метилизатинтиосемикарбазон - 3- ил) гексана общей формулы15 20где К водород или - (СН )в качестве реактива для качественного определения пролина. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент США3253991, кл. 424 - 274,1966.30 2. Аналитические методы белковой химии.М., изд-во иностранной литературы, 1963,с, 491 - 560.