Способ получения -аспарагиназы-2

ОП И САН ИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51) М, Кл.з С 120 13/10 дарственный ком Совета Министров СССРао делам изобретений 57,15,0. С, Рылкин, Т. Б. Т. Березов, Б. Д. Виноградов, В. С. Орлов и А. Г. Чигалейчик Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР(54) СПОСОБ П непре- скоротрацнн г/л. арагп- ЬогеоКроме внроваш и поддер определе высокой снижает Цель цесса н п достигает ют путек синтетич источник и микро продуцеИзобретение относится к микробиологии, в частности к способам получения фермента 1.-аспарагиназы, применяемого в медицине.Известен способ получения 1.-аспарагиназыпутем культивирования ее продуцента на синтетической питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли н микроэлементы 11.Этот способ является наиболее близким к описываемому по технической сущности и достигаемому результату. Однако при культивировании максимальная активность, проявляемая самым активным из испытанных штаммов Е. со 1 в начале стационарной фазы роста, составляет 0,95 мЕ/мг сухого веса. того, периодические условия культия не позволяют регулировать процесс живать культуру длительное время в ином физиологическом состоянии сферментатнвной активностью, что интенсивность процесса.зобретенпя - интенсификация проовышение активности фермента. Это ся тем, что 1.-аспарагиназуполучакультивирования ее продуцента на еской питательной среде, содержащей и углерода, азота, минеральные соли элемнты, прн этом культивирование тта, начиная с поздней экспоненциальной стадии роста, осуществляют при рывном протоке питательной среды со стью 0,2 - 0,25 час -н конечной концен азота в питательной среде 0,006 в ,025Прн этом в качестве продуцента 1.-асп назыиспользуют штамм Рзецс 1 оп 1 опаз ро 11 з 526.Способ осуществляют следующим образом.Продуцент 1.-аспарагиназы, в качестве которого используют штамм Рзецс 1 оп 1 опаз Ьогеоро 11 з 526, культивируют на синтетической питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и микроэлементы.Культивирование продуцента фермента проводят в ферментерах 4, начиная с поздней экспоненциальной сгадии роста, осуществляют при непрерывном протоке питательной среды со скоростью 0,20 - 0,25 час -при 28 С, конечной конценцрации азота в питательной среде 0,006 - 0,025 г/л, насыщении среды кислородом 60% и рН 6,5.П р и м е р. Штамм Рзецдотпопаз Ьогеро 11 з 526 выращивают на синтетической пита гельной среде состава, г/л;Ма;ЯО, 1ХаеНРО 1,4КНсРО, 0,6МЯО, 7 Н,О 0,7Глицерин, мл 1251; 611 свор мула изобретения Составители Т. Серебренникова Редакто 15 Г. Мозжеикова Техред М. Сеченов 1,ОррекГоо И. Поздниковскап Заказ 277119 Изд.1854 Тираж 575 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретен 111 и открытий 113035, Москва, )1(-35, Раушская наб., д. 45Типографии, пр. Сапунова, 2 Посевной материал выращивают в колоах емкостью 750 мл, содсржащих 100 мл мяс- иептонного бульона (МПБ), иа качалке в тсчеиие 24 ч. 11 олучсииой биомассой засевают фЕРМЕНтЕР И КУЛЬтИВИРУЮт и ПЕРВО,1 ИЧССгиХ условиях при 28"С и насыщении кислородом 60 о 1 о, рН среды 6,5. 11 епрерывиос культивиро- ВЯНИС ИЯЧ 1 И 2 ОТ ПРИ ДОСТ 1 Ксппн ЭКСП 1 СИДИ- альной фазы роста, т, с.;ример.о через 21 ч вырацивания. Скорость протока постепенно увеличивают, доводя ес в течение 36 и г 0,05 час вдо 0,25 час в , При этом устанавливается конечная концентрация азота в среде 0,025 г/л.Активность фермента ОИ 1)сделяют 1 етодм НЕССЛСРПЗЯЦИИ. Активность 1.-асиарагииазыкультуры Рзец 1 огОпа 11 огеоро 1 з 526, полученной описаниим способом, составляст 8,20:1 Емг бс.ка и превышает активность 1.-аспарагииазы, проявляемой известными штаммами в начале стационарной фазы роста примерно в 7 раз. 1. Спосоо получения 1.-аспарагиназыпутем1,1 ЬТНВИ 1 Ваи 15 ЕЕ ИРОДУЦСита Иа СпнтстИЧС с;-юй иитатсльпй среде, сдеркащей источш 5- 1 и мглс 1 зда, азота, З 1 ииср 2 льные сОли 11 микроэлсмеСг, о тл и ч а ю ци и с я тем, что, с цс.ьо иггеис 5 и 11 икации процессаповышения активности фермента, культивирование проду :с и 2, ич; ия с ио;дней экспоиенциальнойстад, 1 рс, сущсс 1 нляют при пегрерь 1 виом иртке и 1 татсльпой среды с скоростью 0,2 - 0,25 11 с и кисчиои ки 1 снтрации азта В питательной среде 0,006 в ,025 г/л.15 2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тсм,чт в к 2 чесВс иродуцсита 1 -5 си 15 г.иазы;Спльзуют и;тамм Рвешьсиноп 1: 50 сор в 526.1 и 1 СТОНИК ИифОрМацпп, 1 рниятЫй ВО В 11 И- "и и с ир 11 э С ертизс20 1. С. 11. 1 айквская и др. злии 1 ие ус,1- Вий культивировангя иа биосинтез 1-2 спарагииаз 1 л 11 т.,).12.1 и 1.зс 11 сГСп.я с 01 кур:12, П 1 зикзядияя Оиохим ия и мик 1 зобиолОия, 91 "1, 1 з Х, Вып.иск 3, тр. 369.