Способ получения аминокислот

) М. Кл. С 12 с 1 13/О 2) Заявлено 09,06.72 (21) 1795220/28-1 рисоединением заявкиГасударственныи комитет Совета Министров СССР по делам изобретениян открытий 1 орит 53) УДК 663.18,07(72) Лвторы изоб етен С. Булычева,Л. К, Кашковсантибиотиков р я М. М. Левитов, Е, М. Савицкая, П, С. Ныс,Р. М. Петюшенко, В, И. Коровкин, И. А, Редькин ,71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский инстит НОКИСЛО 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1.та ф еакц Получают 24,96вещества. Нигидртельная.После перекрис25 горячего спирта)теории, считая нафенилаланина.Т. пл. 129130 СВычислено азот см (ЗОО, г (47,7%енацетилаллизацпи из о получают 12,7 феш 1 ча танин) 4,9%, найдено Изобретение относится к получению аминокислот, в частности к получению оптически чистых 1.-а-аминокислот.Известен способ получения 1.-а-аминокислот путем асимметрического гидролиза К-фенацетильных производных 1.-а-аминокислот (ФЛК) в присутствии культуры Е. со 11. Однако при использовании известного способа гидролиз М-фенацетильных производных аминокислот протекает с низкой скоростью при нсудовлетворитсльном выходе продукта.Для ускорения процесса гидролитическое расщепление К-фенацетильных производных рацсматов аминокислот предлагается проводить ацилазами штамма9637 культуры Е. со 11 с последующим подкислением гидролизата и дальнейшую обработку не смешивающимся с водой органическим растворителем проводить до рН рКфлк - 1,5, где рКфлк - отрицательный логарифм. константы ионизации фенацетильного производного 1.-аминокислоты.Для выделения оптически чистой 1.-аминокислоты водный слой обрабатывают сильно- кислым катионитом, взятым в количестве, обеспечивающим максимальную сорбцию целевого продукта. Десорбцию сорбированной аминокислоты осуществляют в щелочной среде при рН, равном рК 2=1,5, где рК 2 - отрицаотельньш логарифм константы ионизации аминогруппы выделяемой аминокислоты.П ример 1. Получение 1.-фспилаланина,1. Получение фенацетил-фенилаланина. 9,9 г5 (0,6 моля) фенилаланина при перемешиваннирастворяют в 40 см" 2 н. ХаОН. Затем одновременно прибавляют 16,5 см (0,12 моля)хлорангидрида фенилуксуспой кислоты и100 смз 2 н. МаОН. Реакционную смесь пере 10 мешивают 50 мин. Во время реакции поддерживают рН 13, Для этого прибавляют ецс40 см 2 и, МаОН, Реакцию проводят при охлаждении льдом, После окончания реакцииреакционную смесь подкисляют концентриро 15 ванной НС 1 до кислой реакции по Конго иоставляют в холодильнике на ночь. Выпатзшийосадок отфильтровываот и высушивают сначала на воздухс, а затем - в сушильном шкафу при 40 - 50 С,20г (147%енилаланин)ннов ая р ия - отрица487940 Формула изобретения Составитель П, НысТсхред Т. Миронова Редактор Л, Тюрина Корректор А. Степанова Заказ 320,16 Изд.1875 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, М(-35, Раушская наб., д. 45Типография, пр. Сапунова, 2 11.Асимметрический ферментативфый гидролиз и ионообмефное выделение 1.-изомсра из ферментного гидролизата. К 500 мл водного раствора фенацетил-Д, 1.-фенилалафина с концентрацией,2 10 - - М и рН 7,5 добавляют 40 мл суспензии клеток Е. со 1 (штамм .р 1 ов 9637) с концентрацией 130 мг/мл. Смесь инкубируют 3,5 ч при 42 С и рН 7,5. Клетки отделяют центрифугированием. Гидролизат подкисляют до рН 2, обрабатывают 1650 мл бутилацетата. К 490 мл водного слоя добавляют 19,5 г катионита КУк,4 в Н-форме. Сорбированный 1.-фенилаланин элюируют 60 мл 2 н. ХаОН при постоянном рН 10,8. Элюат подкисляют до рН 5,6, Нейтрализованный элюат упаривают до 10 мл в вакууме и при 60 С прибавляют 90 мл спирта. Смесь выдерживают 14 ч при 20 С, выпавшие кристаллы 1.-фенилаланина промывают спиртом до отсутствия С 1-ионов и сушат при 70 - 80 С,Выход 48 о/о.Вычислено азота 8,5%; найдено 8,4/о.Удельное вращение (а)22 = - 34,2 (С 0,5; Н,О), что соответствует оптической чистоте 99,0%. 111. Рацсмизация фенацетил-Д-фенилаланина, 1,42 г (0,005 моля) фенацетил-Д-фенилаланина суспендируют в 10 смз воды, содеркащей 0,4 г уксуснокислого натрия, К полученной суспензии прп 45 С при встряхивании медленно добавляют 6 см уксусного ангидрида. Раствор оставляют стоять 5 - 6 ч при комнатной температуре, а затем ставят в холодильник. Выпавп 1 ий осадок отфильтровь 1 вают и высушивают. Получают 1,25 г (88,2 о/о теории) вещества.Т. пл. 119 - 121 С.После перекристаллизации из 150 см (30% горячего спирта) получают 1,01 г вещества.Т, пл. 127 в 1 С.Вычислено азота 4,9%, найдено 4,9 о, Удельное вращение (а) и= - 0,5 (С 2;5 н. НС 1),П р и м е р 2, Получение 1.-С-фенилглицина.Получение целевого продукта отличается отпримера 1 тем, что при,подкислении элюатадорН 4,7 (стадия осаждения 1.-изомера из элю 5 ата) сразу выпадают кристаллы 1 фенилглицина (1.-СФГ), Их промывают ацетоном дополного удаления С 1-ионов.В ы ход 93 /,.Вычислено азота 8,3%; найдено 9,3/о.10 Удельное вращение (а)рв -- +168 С (С 1;5 н. НС 1), что соответствует оптической чистоте 99,9%.П р и м е р 3, Получение 1.-треонина. Получение целевого продукта отличается от примеров 1 и 2 тем, что 1.-изомер из нейтрализованного элюата осаждают спиртом. Выпавшийпосле осаждения спиртом осадок перекристаллизовывают из воды и сушат.Выход 43 до20 Вычислено азота 11,8%, найдено 11,8/о.Удельное вращение (а) = - 28,2 (С 0,5;НО), что соответствует оптической чистоте98,9%,Результаты анализов показывают, что выделенные продукты обладают высокой степенью чистоты,30 Способ получения 1.-а-аминокислот путемферментативного расщепления рацематов Х-фенацетильных производных а-аминокислот культурой Е, со 11 при нагревании в слабощелочной среде с дальнейшим выделением целе вых продуктов из ферментных гидролизатовионообменной хроматографией, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью ускорения процесса, ферментативный гидролиз проводят ацилазами штамма Мв 9637 культуры Е, со 11 с 40 последующим перед ионообменной хроматографией подкислением гидролизата до рН р К флк - (1,5.+0,5), где рКфлк - отрицательный логарифм константы ионизации фенацетильного производного 1.-аминокислоты.