Способ количественного определения днк-содержащих вирусов плесневых грибов

Союз Советских Социалистических Республик3,07.73 (21) 1972313/31 ением заявки Хо 1 с 1/О 22) Заявлен(32) ПриоритетОпубликовано 15,08,75. БюллетДата опубликования описания Совета министров ССС, Лебедь и Т. И, Тихоненкоо-исследовательский иистит вирусологии им, Д, И. Ива артошеви 71) Заявители т антибиотиковского с области медиие относится Лактоза Глюкоз МН 41 ЧО 2,00,73991) и специальной литеенного определениякисл отсодержащих не описаны,о способа определеых кислотсодержарибов заключаетсяна бактериальных ои патентнои обы количеств онуклеиновых есневых грибовпредложенног рибонуклеинов в плесневыхвирусы титруют штами 0,20,0250,10,05 КН,РО МдЬО, Хао 820 Ма,504 Полученная культуральрН 6,8.Для засева посевной сровый материал штаммпшене. Посевной материментации в количестве 20Эрленмейера с 40 мл феследующего состава, вес. идкость имеет П р и м е р 1. Штамм 39, Высокоактивный продуцент пенициллина. Устойчив к повышенному содержанию 1 ЧН 4 ХОз в среде (0,7)в посевной среде и 1,1% в ферментационной).На 12 сутки роста на среде Райстрика при 24 С оливково-зеленые колонии, умеренно растущие, порошистые, хорошо спорулирующие, радиально складчатые с приподнятым кратерообразным центром, окрашенным несколько светлее. Растущий край белый, Диаметр колонии 27 - 28 мм.Для получения культуральной жидкости и мицелия штамма Юо 39 предварительно в течение 48 час выращивают посевной материал в колбах Эрленмейера, содержащих 100 мл среды следующего состава, вес. %;Мел технический 0,3Курурузный экстракт 4,0 зу ют спо егося на час ферт в колбы ной среды исполранящерез 4 ренос ацион а, х л ч/о пмен Кукурузныи экстраЛактозаГлюкозаМд 504КН 4 КО,1,50,0211 ммыи 91) 0,05 0,5 10(ш а 504Н,Р 041 ел техничеса 25 еОз Изобрете цины,В извести ратуре спос дезоксириб вирусов пл Сущность ния дезокси щих вирусо в том, что культурах.О П И С А Н И Е п 11 4651 ООИЗОБРЕТЕН ИяН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТСОДЕРЖАЩИ ВИРУСОВ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ465100 Предмет изобретения Состагптсль С. МалютинаРсдактор Т. Загребельная Текоед 3. Тараненко Корректор Л, Котова Тираж 5" 9 Подписи:е 1 д 1 1411 П 11 Гссударсгвенпого комитета Совета Министров СССР по делам изобретснпй и открытий 113035, Москва, 1 К, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 Полученная культуральиая жидкость имеет рН 6,2 - 6,3.Для предупреждения вспепивания в ферментационную среду вносят кашалотовый жир (2,5% в каждую колбу). Ферментацию ведут на круговой качалке при 24 С.Продолжительность ферментации 2 суток для выделения вирусов и б суток для определения антибиотической активности.В процессе ферментации дробно дооавляют предшественник пенициллина - фенилацетамид. (Добавление четырехкратное в количе. стве 0,05% при передаче посевного материала и по 0,1% в последующие 3 суток ферментации, всего 0,35%, ферментация 6 суток).При двухсуточной ферментации дчя выделения вирусог, фепилацетамид подают в количестве 0,05% при передаче посевного материала и 0,1% на первые сутки ферментации.Ежесуточно контролируют стерильность посевных и ферментационных колб,Определяют антибиотическую активность методом спектрофотометрии или иодометрии,Мицелий в количестве 10 г сырого веса отмывают 0,1 М ХаС 1 на 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,0, и разрушают на ультразвуковом диспергаторе в течение 2 мин при охлаждении, не допуская повышения температуры выше 30 С Затем препараты разрушенного мицелия встряхивают с хлороформом в соотношении 1: 1 в течение 5 мин, центрифугируют в течение 30 мин и титруют, добавляя экстракт мицелия в количестве 0,3 - 0,5 мл в пробирку с 0,8%-ным агаром Хоттингера, в которой в качестве индикаторной культуры содержится Езс 1 тег 1 с 11 еа со 11 С в количестве 0,2 мл в логарифмической фазе роста, эту смесь при 39 - 40 С выливают па чашку Петри с 15%- ным агаром Хоттингера и равномерно распредел яют п о всей поверхности.Через 5 час проводят подсчет негативных 5 колоний и определяют количество вирусныхчастиц на 1 г сырого веса мицелия.Инфекционная активность препаратов, полученных из мицелия Реп 1 с 1111 цгп сЬгузореппгп - штамм39, в отношении Езсйег 111 теа ;0 со 11 С составляет в среднем величину, рав.нас 4 2 104Антибиотическая активность штамма составляет в среднем 10000 ед/мл.П р и м е р 2. Штамм91 устойчив к повы шенной температуре 28 С.На 12 сутки роста на среде Райстрика притемпературе 24 С колонии светло-зеленые, быстрорастущие, с белым слегка приподнятым очень пушистым центром, с сильной радиаль ной складчатостью, с белым паутинистым краем, Обратная сторона колонии темно-бурая.Диаметр колонии 34 - Зб мм.Культуральну 1 о жидкость и экстракты мицелия получают аналогично примеру 1. Ин фекционность препаратов, полученных из мицелия Реп 1 с 1111 птп с 1 тгузодепшп - штамм91, в отношении ЕзеЬег 1 стеа со 11 С практически пе обнаруживается, Лнтибиотическая активность штамма составляет 1000 ед/мл.30 Способ количественного определения дезоксирибонуклеиновых кислотсодержащих виру сов плесневых грибов, о т л и ч а ю щ и й с я тем,чпго вирусы титруют на оактериальпых культурах.