Способ получения гормона роста из гипофизов человека

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕПДЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик,161) Дополнительное к авт. саид.ву -22) Заявлено 06,06,73(21) 1946800/28-13 М, Кл,А 61 К 37 Государственный комитет Совета Миниотров СССР по делам изаоретеиий и открытий(088 Ф, Лазаре 72) Автор изобретени ковский научно-исследовательский онкологический институт им, П, А, Герцена(7 тел СОВ ПОЛУЧЕНИЯ ГОРМОНА РОС 4 зобретение относится ышленности, а именно дицинскои ормон м аммония приывкой сырца диорением его в ат опного г8-2, 2% юлучению насыше нной во М шел ем рас ияу ой,пр до т стиллиров 0,15-0,2 подкислен р едком кали, 8,0-8,2, разтечение приблиподкислениел и, наприме ора до рН 7-39 С в ешиванием и 1,5 ч,8-5, 2,зи дальнейшим твляют едуюшим обраенно приенный8-2,2%ют придка. Обия осТГ с ра.:,т с присоединением заявки М(45) Дата опубликования кринных препаратов,Известен способ получения гормона роста(соматотропного гормона, СТГ) из гипофизов человека, заключаюшийся в том, что гипофизы высушивают и обезжиривают ацетоном, измельчают, экстрагируют ледяной укосусной кислотой при 70 С, фильтруют, белковые примеси осаждают ацетоном, а сырецСТГ выделяют из центрифугата серным эфиром, затем растворяют в 0,1 н уксусной .кислоте, сорбируют на оксицеллюлозе, фильтруют, фильтрат подшелачивают крепким раствором КОН, подкисляют до рН 8,5, центрифугируют, удаляя образовавшийся осадок, агормон выделяют из центрифугата этанолом,,Однако известный способ частично денатурирует гормон, не обеспечивает его чистоту и является относительно сложным, 2С целью упрошения способа и повышениястепени чистоты целевого продукта экстракцию осуществляют разбавленной уксуснойокислотой, например 2 М, при 4 йС, аочистку проводят осаждением сырца гпмато ж,цдумр.асщрр,и,Взамен ранее изданндщ Способ ес слзом,100 г высушенных ацетоном человеческих гинофизов (или 250 г замороженныхопри - 20 С) измельчают и размешиваюто1,5 ч при 40-43 С с 2000 мл 2 М уксусной кислоты, затем центрифугируют при комнатной температуре 0,5 ч при 6000 об/мГипофизарный остаток вновь экстрагируют в1500 мл той же кислоты и в тех же условиях в течение 1 ч.К объединенному экстракту медлперемешивании добавляют полунасышраствор сернокислого аммония до 1,его насышения и смесь выдерживао4-8 С до полного формирован аразовавшийся осадок сырца С обицентрифугированием и смешивают с 2000 млпостепенно добавляемой дистиллированнойводы, а затем центрифугируют 45 мин при6000 об/м и центрифугат отбрасывают.Промывку повторяют, уменьшая количествоводы до 1500 мл.Промытый осадок сырца СТГ суспендирукт в 450 мл воды и к суспензии добавляют при перемешивании 50 мл 1,5 М КОН,При этом осадок должен полностью раствориться, в противном случае количество добавляемой щелочи немного увеличивают.Раствор сразу же затем начинают подкислять, приливая понемногу 2 М уксусную кислоту до рН 8,0 - 8,2, При этом рН и тем-пературе 37-39 С слегка мутный раствормедленно перемешивают в течение 1,5 ч,а затем продолжают подкислять уже оез подогрева до РН 4,8 - 5,2, проверяя полноту образования осадка, Смесь выдерживаюто2-3 ч при 4 - 8 С и центрифугируют. Оса -док переосаждают из 400 мл водного раствора (рН 8,0 - 8,2), повтоояя подкислениедорН 4,8 -5,2,Бентрифугаты от основного осаждения ипереосаждения осадка обьединяют и посленейтрализации диализируют против нескольких смен дистиллированной воды в течение10-12 ч, Лиализат, который должен бытьабсолютно прозрачным, охлаждают и медлен-Зно смешивают при интенсивном охлаждениис равным объемом постепенно добавляемогохолодного этилового спирта. Через 1 ч добавление спирта заканчивают, однако, размешивание продолжают на холоду еще 30 м уи смесь выдерживают в холодильнике до полного формирования осадка, Образовавшийся осадок высокоактивного, низкомолекулярного СТГ собирают центрифугированием приохлаждении, промывают холодным спиртом,а затем ацетоном и досушивают в вакуумэксикаторе, Выделение СТГ спиртом можнозаменить лиофилизацией, подвергнутого стерильной фильтрации диализата.Выход готового препарата СТГ составляет в среднем до 4% от веса гипофизарного высушенного ацетоном порошка при условии, если гипофизы были свежими и хранились в высушенном состоянии в холодильнике в герметической упаковке не более6 месяцев, Выход из замороженных гипофизов до 8 А,Формула изобретенияСпособ, получения гормона роста путем экстракции измельченного гипофиза человека уксусной кислотой, освобождения экстракта от примесей и выделения целевого продукта из фильтрата о т л и ч а ю щ и йс я тем, что с целью упрощения способа и повышения степени чистоты целевого продукта. экстракцию осуществлякгг разбавленной уксусной кислотой, например 2 М, приа40-43 С, а очистку проводят осаждением сырца гормона сульфатом аммония при 1,8- 2,2 насыщения, промывкой сырца дистиллированной водой, растворением в 0,15- 0,2 М щелочи, например едком кали, подкислением раствора до рН 8,0-8,2, размешиванием при 37 - 3 9 С в течение приблизительно 1,5 ч, дальнейшим подкислением до рН 48 - 5,2, Составитель С. МалютинаРедактор П, Горькова Техред 3. Фанта Корректор И. ГоксичЗаказ 3134/55 Тираж 677 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проек дичая, 4