407453

о Ый.с;м-ни е ИЗОБРЕТЕН ИЯ 407453 Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимый от патента3066 Заявлено 28 Л 1.1969 ( 1316952/28-13) М.Кл. С 126 13/1 О итет 28,П 1.1968,6 а/131144, ГД судврственный камнтетавета Мнннстрав СССРаа делам нэаеретеннйи аткрытнй Опубликовано 27.Х.1973. Бюллетень46 7 (088.8 УД Дата опубликования описания 27 Л,197 Лвторыи зоб р ете 1 щИност,ранцыепфель и Клаус Мушикемократическая Республика) ДитерЗаявитель ностранная фирмаерунгсиндустри, ЭнзимологиМикробиологиДемократическая Республик форшуигсинститут диид Технише ИОЛОГИЧЕС ОСОБ ВЫДЕЛЕ КТИ ВН ЫХ ВЕЩЕСТВ Изоо ой пр еделе По п ения б ологичеспособам ществ.об выдев, напри- жидкостидубильгр чипы мер фе путем в ных вещ спнтана соон 1 че: пт) 3; п =0; 1, 2,О = 1,2; р =0; 1;У=ОН или МН;Х= - С(Й)е - где 1 х=Н или - СНэ,С - мостики;1,2 Х = - 50 - сульфон - мостики;1,3 = - 50 - сульфокси - мостики;1,4 = - ЯОТИН - сульфонимид - мостики1,5 = - МН - имин - мостикитделения полученного осадка с последующеикстракцией из него дубильных веществ оргаическим растворителем и вьесушиваем егоПредлагаемый способ позволяет более поло выделять ферменты. 3; ретение относится к микрооомышленности, а именно, кия биологически активных веатенту306638 известен спосиологически активных вещестрментов, из культуральнойведения в нее синтетическихеств, например соединений, общей формулы: Для этого в культуральную среду наряд ссоединением группы синтана вводят соли органических и/или неорганических кислот илиоснований,При применении анионных соединений группы синтана в культуральную среду целесооб.разно добавлять соли одновалентных катионов, при применении катионных соединенийгруппы синтана в культуральную среду целесо.то образно вводить соли одновалентных анионовв таком количестве, чтобы концентрация ихсоставила 1 - 107 о и больше,Активность готовых конечных продуктов темвыше, чем лучше растворима применяемая15 соль в смеси вода - органический растворптель.С солями многовалентных катионов анионные синтетические дубильные вещества образуют труднорастворимые соединения, которые20 значительно ухудшают активность препаратпосле экстракции растворителями и снижаютвыход ферментов, по сравнению с применениемодновалентных катионов.При высокой концентрации в жидкости двух 25 валентных катионов можно избежать образования и выпадения труднорастворимых соединений путем добавления необходимого количества одновалентных катионов перед введениемдубильных веществ соединений группы синта(- Снг - 4 5 10 3П р и м е р 1, Для осаждения амилазы используют фильтрат культуральной жидкости Вас 111 цз зцЬ 11111 з, в который предварительно добавляют СаС 1 г 6 НгО, при рН 6,5.В фильтрат при перемешивании добавляют анионное дубильное вещество группы синтана, имеющее формулу СНз СНзСн, СцгЯОфа, он ОЧ где ) 3 в количестве 2 г на 100 мл фильтрата.Образующийся осадок отделяют и промываютсмесью ацетона с водой при температуре0 - 5 С и высушивают.Активность, полученной амил азы составляет133 ед. на 1 мг твердого продукта, выход 32,9/ОП р и м е р 2. Условия проведения способате же, что и в примере 1. После осажденпяпродукта (протеин-дубильное вещество) добавляют 10% сульфата аммония, Смесь выдер.живают в течение трех часов .при перемешивании, Осадок обрабатывают так же, как в примере 1, Выход амилазы составляет 61,5% судельной активностью 503 ед. на 1 мг твердогопродукта,П р и м е р 3, К фильтрату культуральнойжидкости Вас 111 цз зцЫ 111 з при рН 6,5 добавляют вещество группы синтана, как в примере 1 в количестве 2,5%. Полученный осадокпромывают смесью ацетона с водой,Выход амилазы составляет 18,5/О с удельнойактивностью 195 ед. на 1 мг твердого продукта.П р и м е р 4. К фильтрату культуральнойжидкости Вас 111 цз вцЫ 111 з при рН 6,5 добавляют соединение группы синтана (такое, которое используют в,примере 1) в количестве 1,5 гна 100 мл фильтрата. Окончательное осаждс.ние наСтупает после введения 6 г сульфатааммония на 100 мл фильтрата.Активный выход составляет 92,5%, а актвность амилазы 2350 ед, на 1 мг твердого продукта.П р и м е р 5. В фрльтрат культуральнойжидкости Вас 111 цз зцЫ 111 з при рН 6,3 добавляОт 6 г сульфата аммония, затем 1,5 г синтетического дубильного вещества па 100 млфильтрата,Используют вещество, имеющее следуогпуОформулу Сяз СН,ь 0 г 80 гХлОН ОН Ооразовавшийс 5 Ос 1,1 Ок экстра 11 р 10 т смесьО воды с ацетоном . высу 1 пивают. 15 ыход протеязы состявл 51 ет 82,8 /О тве 1)лОГО прспярят 11 с активностью 4,3 тирозин-протеазных единиц на 1 мг.Пр имер 6. К 2000 мл культуральной жид. кости Азрегр 11 цз идег с активностью карбометилцеллюлазы 3260 ед. при значении рН 6,2 добавляют 2/О раствора катионного синтана, имеющего формулу прр п)3Коагуляция комплекса фермент-синтан ускоряется добавлением 50 г СаС 1 г 6 НгО Смесь перемешивают в течение 2 час.Осадок отделяют, синтан экстратируют 75 млацетона. Осадок высушивают в вакууме. Получают 6,5 г сухого препарата, что составляет 9,1/О. Активность 2580 ед.П р и м е р 7. К 1,5 л питательного фильтрата, соде 1 ржащего амилазу, добавляют 1 при рН 6,5 и 22 С г анионного синтана на 100 мл жид кости. Как только к этому синтану 5 г уксуснокислого натрия на 10 л 1 л жидкости, выпадает осадок, который после отцер 1 трифугирования, промывания смесьО ацетона и воды (в целом 60/О ацетона по объему), повторного цензо трифуп 1 рования и высушивания дает 3,70 гпродукта с обшей активностью 1765000 амилазных единиц. Сравнение с общей активностью исходного раствора с 2140000 единиц тзет выход 82 5%П р и м е р 8. К 1 г протеазосодержащегофильтрата питательной среды Ягероптусез югзеив с общей активностью 29800 единиц протеазы добавляют при рН 6,02 г анионного спнтана на 100 мл жидкости и 5 г хлористого тетраметиламмония. Обработка образующегося осад 1 ка, как и в предыдущем примере, даег 1,60 г сухого продукта с общей активностью 22250 единиц. Это соответствует выходу 74,8%. Предмет изобретения 4 З1. Способ выделения биологически активныхвеществ, например ферментов, по патенту306638, отличающиися тем, что, с целью более полного выделения вещества, в культурально ную среду наряду с соединением группы синтана вводят соли органических р/1 ли неорганических кислот или оснований.2. Способ по п, 1, отличающийся тем, чтопри применении анионных соединений группы яз синтана в культуральную среду добавляют соли одновалентных катионов и одно- или многовалентных анионов.3. Способ по п, 1, отличающийся тем, чтопри применении катионных соединений группы 60 синтана в культуральную среду вводят солиодновалентных анионов и одно- или многовалентных катионов.