403133

ОПИСАН И Е ИЗОБРЕТЕН Ия 403133 Союз Советских Социалистинеских Республикавцсимый от патента Ы твлсцо 22.11.1972 (Ло 1750701/31-16 Ч. Кл. А 611 21/О С 124 9/О1 риоритет 1, М 118674, СШ Государственный комнте Совета Министров ССС по делам изобретений и открытийбликовацо 19.Х.1973. Бюллетень .6 4д К 615.779.931(088.8 ата опубликования описация 16.1 П.1974 Авторыизобрстсци Ицостранць 1В. М. Старк и Д. К. Делоцг1 цые Штаты Америки)остраццял фирмаилли эцд Компани1 пые Штаты Америки). Хамил, (Соедипс Заявитель И 1 Эли Л Соедице ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТ 1,0 г 5,0 г еда Чапека 5,0 млИзобретение относится к области медицицы, к производству яцтиоиотиков.Способ получения антибиотика А, ряцее в патсцтпой литературе пе описанный, заключается в том, что культуру АС 11 пор 1 а 1 тсз зр. АТСС 23342 выращивают в аэробпык условиях ца среде, содержащей источники углерода азота и минеральные соли при температуре 20 - 40 С и при рН 6,5 - 7,8 в течение 4 - 6 д 11 ей, а из филы рата культуряльцой жидкости и щелочного водцого экстракта мицслия выделяют целевой продукт сорбцио 11- ными методами и очищают известпымп приемами.Аптибиотик Аактивсц в отношении ряда микроорганизмов и, в частности, подавляет развитие микроорганизмов, вызывающих околозубпые или зубные заболевания, например кариес.П р и мер. Культуру Ас 11 порапез вр, АТСС 23 выращивают на скошенном агаре в течение 6 дней при 30 С.Агаровая среда имсет следующий состав;Обжареццая овсяцая мука 60 г Дрожжи 2,5 г К,НР 04БардаМицеральцая ср А 1 яр 2 ОО гДеп 011 пзпровяппял Вола 1 л.51 ипсрягВп 11 я срс;1 я Чяпскя содержит 100 гКС 1, 100 г 104 7 Н 0 2 г Гс 50. 711 зО (р 115 створяется В 2 мл коццсцтрировяппой 11 С),1 л дспо 11 изировяпюй воды.Суспснзисй культуры, смытой с агяровогокосяка, ппоупирают 100 мл стсрилыгой срслы, имсющси сле,ующий состав (г): глюкоза10 5,0, дскстрин 20,0, соевая мака 15,0, лрожжсВ 011 экст 11;11,1 2,О, глспс:1 ып к 1 льцп 1 1,0, ВОлопрОВОД 111151 В 0,111 1 л,Выр 11 щивяиис проволлт при 30 С и течение48 час, при встрлкпвя 11 ии, со скоросгью вря 15 щения 250 об/мп 1.10 мл получс 11 пой куяыуряз 11.пой жилкостипереносят в 100 мл срслы указанного состпши ицкубпруют в течение 24 чяс при 30 С прпвстряливя 11 пп, со скоростью врящсппя20 250 об/м 1 ш.Четыре дссятык мл полученной кулыуряльпой жидкости перс 1 ОС 5 т В 1,Олоь солсрж 11- щие по 100 мл фсрмснтной стерилы 1 ой среды,содержащей ьсщсс 1 вя, взятыс в слс;1 ующпк25 соотпопсци 51 к о) .Дскстроза 1,0Декстрпц 3,0Пептоц 1,550 55 60 Соевая мука 0,5 Мд 504 7 НО 0,2 Черная патока свекольная 1,5 Жидкость от замочки кукурузы 0,5 Бетаиц 0,1 К 2 НРО 4 0,05 Деионизироваццая стерильнаявода 25 лрН среды доводят до 7,5 добавлением 5 ц. раствора гидроокиси натрия перед стерилизацией, После стерилизации рН приблизительно 6,9, Ферментацию ведут при встряхивании в течение 96 час при 30"С на круговой качалке со скоростью вращения 250 об/мин, рН в конце ферментации около 7,2.25 л описанной ферментативной среды с добавкой 0,02 О/о антипецного вещества стерилизуют при 120 С в течение 30 миц, помещают в 40-литровый ферментер и засевают одной сотой миллилитра предварительно полученной культуральной жидкости. Инокуляцию ведут в течение 4 дней при 30 С при аэрации стерильным воздухом в количестве 1/2 объема воздуха к объему среды, пропускаемой за 1 мин и перемешивании со скоростью вращения, необходимой для полного перемешива ия пропускаемого воздуха со средой, рН культу- ральной жидкости постепенно возрастает с 6,9 до 7,2.После окончания ферментации культуральную жидкость фильтруют, Мицелий промывают 32 л воды. Затем мицелий заливают еще 32 л воды и р Н смеси доводят до 10,5 добавлением 5 и. раствора гидроокиси натрия, перемешивают в течение 45 миц и фильтруют.Полученный фильтрат и промывную воду сливают с фильтратом культуральной жидкости и рН доводят до 4,0 добавлением Н 504 Подкисленную смесь пропускают через угольную колонку с 1 кг активированцого угля, Колонку промывают до тех пор, пока вытекающая жидкость це потеряет свою окраску. Активный А, адсорбировапцый на угле, элюируют с помощью 1%-ного раствора НЬО в смеси ацетон: Н,О (1; 1); элюат, содеркащий активный А, обрабатывают насыщенным раствором гидроокиси бария.Смесь фильтруют и осадок сульфата бария удаляют. Фильтрат, содержащий активный А, концентрируют и выпаривают под вакуумом. Сухой остаток, заключающий в себе активный А, составляет приблизительно 80 г.Приблизительно 80 г активного Апомещают в 5 л воды и затем производят обработку 500 г активировашюго угля.Смесь перемешивают 1 час и затем фильт. руют, Фильтрат удаляют. Угольный фильтрованный осадок, содержащий активный Л, промывают 1 л воды и промывочную воду удаляют. Угольный осадок еще раз промывают 1 л 0,05 ц. водного раствора соляной кислоты и 5 10 15 20 25 30 35 40 45 промывочную воду также удаляют. Промытый угольный осадок подвергают элюированию перемешивацием в течение 30 миц с 500 мл водного раствора соляной кислоты и ацетона (0,05 ц. 1-1 С 1: ацетон=7: 3). Смесь фильтруют и фильтрат оставляют.Элюирование активированцого угля повторяют четыре раза и каждый фильтрат оставляют. Пять элюатов, содержащих активный А, сливают, Смесь элюатов концентрируют выпариванием под вакуумом до объема приблизительно 100 мл, К концентрату, содержащему активный Л, добавляют 200 мл метанола. К этому водно-метацоловому раствору добавляют 2 л ацетона, В полученной смеси образуется осадок, состоящий из сырого соляцокислого А. После фильтрации и высушивация осадка выделяют 60,9 г сырого солянокислого Л.25 г солянокислого Лрастворяют в 20 мл воды,Раствор соляцокислого Апропускают через промытый водой слой полиамидцоц смолы, заключенной в стеклянной колонке (приблизительно 7 К 60 см), Пропущенный раствор оставляют, Колонку с цолиамидной смолой промывают водой при скорости тока приблизительно 8 - 10 мл/миц.Антимикробную активность пропущенной жидкости измеряют соответствующим методом. Пропущенные жидкости, содеркашие антимикробцый компонент, смешивают и концентрируют высушиванием под вакуумом. Сухой остаток растворяют смесью 25 мл воды и 50 мл метанола. Этот водцо-метацоловый раствор солянокислого Аподкисляют 5 и. НС 1 до рН 2,0. К водно-метаноловому раствору добавляют 1,5 л ацетона для осаждеция соляцокислого А 4696.Смесь профильтровывают и осадок соляцокислого Лотделяют от нее.Осадок, содержащий соляцокислый Л, растворяют в минимальном количестве воды. Затем к раствору добавляют двойной объем этацола и смесь нагревают приблизительно до 60 С. Затем смесь охлаждают, полученные кристаллы Аотфильтровывают и просушивают. Выделяют около 9 г кристаллического солянокислого А. Предмет изобретения Способ получения антибиотика, отличаю. иийся тем, что культуру Ас 11 порапез зр. АТСС 23342 выращивают в аэробцых условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли при температуре 20 - 40 С и при рН 6,5 - 7,8 в течение 4 - 6 дней, а из филырата культуральцой жидкости и щелочного водного экстракта мицелия выделяют целевой продукт сорбциоццыми методами и очищают известными приемами,