Способ получения ацетата д-дегидрокортизона

376440 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН Ия К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУСоюз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельства МеЗаявлено 30.11.1971 (И 1642306.31-16) 12 д 1 Л,00 611; 17/12 Кл с присоединением заявки Ю иоритетубликовано Комитет по делам зобретений и открытий при Совете Министров СССР1 Ч.1973, Бюллетень М 17 5.45:615.361.4 У ата опубликования описания 7 Х.19 Авторыизобретен и К, А, Кощеенко, Л, В, Соколова, Е. А. Борман, Н. Ф. Ковылкина,Т. Г. Баклашова, Л. В, Андереев, Н, Н, Суворов и Г, К, СкрябинИнститут биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР Заявитель СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦЕТАТА Л-ДЕГИДРОКОРТИЗОНА 2 Изобретение относится к микробиологическим способам получения лекарственных препаратов и касается, получения ацетата Л-дегидрокортизона (ацетата преднизона).Известные способы получения ацетата 5 Л-детидрокортизона путем микробиологического превращения ацетата кортизона и дальнейшего выделения целевого продукта малопроизводительны.Целью изобретения является интенсифнка ция процесса получения конечного продукта,Эта цель достигается тем, что трансфорхгацию осуществляют с помощью культуры МусоЬас 1 епцпт д 1 о 1 т 1 оггпе 193, выращенной в присутствии индуктора ацетата кортпзона, а 15 исходный стероид рносят в количестве 5 г/л среды и более.Ацетат кортизона можно вносить;в виде раствора в горячехт метаноле, или малкодисперсной водной суспензии. 2П р и м е р 1, Культуру МусоЬас 1 епцгп д 1 оЬЙоггпе 193, сохраняемую на кукурузноглюкозпом агаре (1/о,кукурузного экстракта, 1% глюкозы, 3% агар-агара, рН после стерилизации 6,8 - 7,2), выращивают на этой же 2 среде в течение 4 - 5 суток и,полученной водной бактериальной суспензией засевают колбы емкостью 0,5 л со 100 мл среды того же состава, но без агар-агара. Вместе с бактеуиальной суспснзией вносят 15 мг ацетата 3 кортизона. Через 24 часа, когда концентрация биомассы достигает значения 1,6 - 1,7 г/л (сухой вес), вносят горячий метанольный раствор адетата кортизона (500 мг в 16 лгг метанола) при энергичном переме 1 шпванни, Концентрация исходного стсроида составляет 5 г/л среды. Трансформацию осуществляют при 28 С на качалке при 200 - 220 обlлгин в течение 9 - 12 час. Ход реакции дегидрнрования контролируют методом хроматографии на тонкослойных пластинах 811 ц 1 о 1 1.1 Ч 254 в системе бензол-ацетон (3: 1), а также с помощью полярографии. В получанной культу- ральной жидкости содержание ацетата преднизона составляет 90 - 92%, ацетата кортизона 3 - 4%, преднизона 4 - 5/о, 20 р-оксипроизводного преднизона 1 - 2% (на исходное сколичество ацетата кортизона). Выделение ацетата преднизона проводят периодической экстракцией. 500 м г культуральной жидкости трижды экстрагируют хлористым метиленом (по 250 ттл), растворитель отгоняют в вакууме, а остаток перекристаллизовывают из 43 мг абсолютотого изопропиловото спирта с 0,2 г активированного угля. Кристаллизацию проводят прои 0 в течение 16 час, Осадок отфильтровьввают, промывают 2 - 3 м г охлажденного изопропилового спирта и сушат пари 100 С, Выход 2,01 г препарата с т.,пл. 237 - 238 С (86% от теоретического количества),376440 Составитель В. Таратута Техред Т. Курилко Редактор Т. Караиова Корректор А, Степанов Заказ 1651/8 Изд.422 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская паб., д. 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 Из маточного раствора можно дополнительно выделить 0,07 г препарата.1 П р и м е,р,2, Культуру,;выращиваемую, как это описано в примере 1, через 28 час роста разводят в 2 раза водопроводной водой и вносят раствор ацетата кортизона в горячем метанольном растворе из расчета 5 г/л среды, После траноформации в тех же условиях в течение 15 - 18 час и обработки, аналогично описанной в примере 1, получают 2,34 г ацетата преднизона (84,2% от теоретического).П р и м е р 3, Исходную культуру хранят и выращивают, как это описано в примере 1. Затем 0,5 г ацетата кортизона растворяют в 16 мл горячего метанола,и смешивают с 16 мл холодной, воды. Из полученной смеси отгоняют метанол под вакуумом и смешивают полученную водную .суспензию с культуральной жидкостью. Трансформацию проводят в колбах емкостью 250 мл в условиях, описанных в примере 1, в течение 18 - 20 час.300 мл культуральной жидкости обрабатывают тремя порциями по О,5 мл хлороформа; а дальнейшую обработку хлороформенного экстракта ведут, как это описано в,примсре 1, Получают 2,35 г ацетата преднизона (83% от 5 теоретического) . Предмет изобретения11. Способ получения ацетата Л-дегидрокортизона путем микробиологического превраще ния ацетата кортизона и выделения конечногопродукта известными методами, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса, трансформацию осуществляют с помощью культуры МусоЬас 1 егшгп доЬ 11 оггпе 193, вы ращенной,в присутствии индуктора ацетатакортизона, а исходный стероид вносят в количестве 5 г/л среды и более.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, чтоацетат кортизона вно 1 сят в виде,раствора и 20 горячем метаноле.13. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтоацетат,кортизона вносят в виде мелкодислсрсной водной суспензии,