1аяsckfi

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЯЬСТВУ Зависимое от авт. свидетельства Ле -Ло 165456031-16) М, Кл. С 07 с И 7,00 Заявлено 29.%.197 с присоединением заявки %вПриоритет -Опубликовано 28 Л 111.1973. Бюлль тень Ъе 35Дата опубликования описания 19.11,1973 осударственнын комитет Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий, Г. Бычкова, Б. А. фихте, В, М, Ушаков,а, Н. ф. Ковылкина и Н. Н. Суворов К, Скрябин, К, А Г. Баклашова, Г Л. В. Соколов нститут биохимии и физиологии микроорЗаявител измов СОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕДНИЗОЛОН Изобретение относится к микрооиологии, точнее к опособам получения лекарственных препаратов, в частности преднизолона.Известен опособ,получения преднизолона с помощью МусоЬас 1 епцгп д 1 оЬ 11 оггпе 193. 5 Культуру выращивают в течение 24 - 48 час на кукурузно-,глюкозной среде, затем вносят растворенный в этаноле гидракортизон. Целевой продукт выделяют и перекристаллизовывают. Этот способ позволяет иопользавать 10 концептрацию субстрата не,вьише 1 г/л среды,Цель изобретения - интенсификация процесса.Это достигается тем, что культуру выращивают в присутствии ацетата кортизона, 15 пидракортизон вносят в танкоизмельченном состояпни с,размером частиц не .менее 5 гг,Предлагаемый опособ позволяет использовать исходную концентрацию суострата до 200 г/л среды. 20Пр и м ер 1. Культуру МусоЬас 1 ег 1 цгп д 1 оЬ 11 оггпе хранят на кукурузно-глюкознам агаре: кукурузный экстракт 1%, глюкоза 1%, агар-агар 3%, водопроводная вода 1 л, рН 6,8 - 7,2, или на МПА. Кугльтуру выращивают 25 на косом агаре в течение 4 - 5 суток на этой же среде. Затем водной бактериальной суспензией засевают 50 мл жидкой среды, разлитой в медицинские,качалочные колбы, Используют среду следующего состава: кукуруз- зо ный экстракт 1% (на сырой вес), глюкоза 1/е, водопроводная вода 1 л, рН 6,8 - 7,2.Вместе с бактериальной суопензией в качестве индуктора вносят ацетат кортизона (10 лгг в 1,ц.г метанола на 50 лгг среды), Через 24 час роста (при биомассе 1,6 - 2,5 лг/л.г по сухому весу),в культуральнуго жидкость вносят водную суспензию тоггцсоизмельченного гидракортизона до конечогого содержания 10 г/л среды. Гдрокортпзон предварительно измельчают до .величины частиц менее 5 гг. Трансформацию проводят при 28 - 30 С на качалгке 200 - 220 об/лгггн в течение 18 - 24 час, Содержание преднизолона в культуральной жидкости составляет 90%, гидрокортизона 6,8%, 20 Р-оксипреднизолона 2 - 4/О от исходного количества гидрокортизона,П р и м е р 2. Выращивают гкультурт так же, как описано,в примере 1. Затем в культуральную жидкость вносят водную суспензию тонкопзмельченного гидрокортизона до конечного содержания 20 - 50 г/л среды. При внесении субстрата в кол 1 ичестве 75 - 200 г/л среды увеличивают биомассу до 4 - 5 лгг/л,г (по сухому, весу). Через 24 - 28 час роста биомассу собирают центрифугированием, не отмывая клеток от среды, затем суспендируют в надосадочной жидкости;и вносят стероид. Трансформацию проводят в тех же условиях, что и выращивание. Через 12 - 24 час в зави366712 Выделение преднизолона Составитель Т. ГоловинаТехред Е. Борисова Корректоры Е. Михеева и Л. ЧуркинаРедактор Д. Пинчук Заказ 690/2272 Изд.943 Тираж 523 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, )К, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк. фил. пред. Патент симости от исходной,конценпрации гидрокорпизона процесс дегидрирования оканчивается. При сверхвысоких,концентрациях гидрокортизона 150 - 200 г/л,дегидрированне идет медленнее и не,доходит до конца при 200 г/и. Контроль за ходом трансформации такой же, как описан в примере 1, Содержание преднизолона в культуральной нкидкости 90 - 92% (от теоретического) по данным,количественной хроматографии,на силуфолеЛ/з 4. Содержание приьмесей следуюшее, %: гидрокортизона 6 - 8, 20/з-преднизолона 1 - 2. 1 варцант.Культуральную жидкость из 6 колб (330 мл) быстро отфильтровывают через пористую воронку (фильтр1) с одним бумажным и двумя полотняными (бязь) фильтрами. Осадочек с фильтра переносят в,колбу и кипятят 30 мин с 50-кратным объектом изопропилового спирта. Раствор декантируют, а осадок вторично кипятят с 50-кратным количеством изопропилового спирта. Объединенный изопропиловоспиртовой,раствор преднизолона обрабатьпвают 0,3 г активированного угля при комнатной тегмпературе. Уголь отфильпровывают, и спирт упаривают в вакууме до 15 мл.Сконцентрированный раствор охлаждают в течение 16 час,при 0 С. Осадок преднизолона отфильтровывают, промывают охлажденным,изопропиловым спиртом и высушивают в сушильном шкафу до,постоянного веса при 60 - 70 С. Получают 2,48 г преднизолона, что составляет 83,2% (от теоретического), т. пл, 231,5 С, Е", = 402 (в метаноле), (а) -" ==+104 (в диоксане), пргимесь 20 р-оксипред.низолона 0,5%, гидрокортизона 3 - 4%.Из культуральной жидкости после отделения кристаллов преднизолона дополнительно5 выделяют путем экстракции хлористым метиленом 0,23 г продуктакоторый перекристаллизовывают из,изопролилового спирта,Выделяют 0,11 г преднизолопа с, т. пл.228,0, Е," =- 400, (а) дз" -- +102 (в диоксане).П вариант,Культуральную жидкость экстрагируют3 раза эгилацетатом (по 1 л) объединенныйэкстракт упаривают до 300 мл, добавляют150,3 г активированного угля, кипятят 5 -10 мин, уголь отфильтровываютпромываютгорячи:и этилацетатом и растворитель отгоняют до 45 мл. Раствор охлаждают 16 часпри 0 С для,полного выделения преднизолона, Осадок отфильтровывают, промывают охлажденным этилацетатом и высушивают допостоянного веса при 60 - 70 С. Получают2,52 г преднизолона с т, пл, 230, Е ";, = 400(в метаноле) (а) до -- +104 (в диоксане).Примесь 20 Р-оксипреднизолона 0,5/о, гидрокортнзона 2 - 3%. Выход 85% (от теоретического). 3 О П р е д м е т,и з о б р е т е н и я Способ получения преднизолона путем выращивания культуры МусоЬас 1 ег 1 цгп д 1 оЬ 11 оггпе 193 на питательной среде с последующим внесением гидракортизона, трансформации его с,помощью культуры, выделения и перекристаллизации стероида, отличающийся тем, что с целью интенсификации процесса, культуру выращивают в присутствии ацетата кор О тизона, а гидроко 1 ртизон вносят,в тонкомзмельченном состоянии с размером частиц менее 5 Р.