Способ получения l-глютаминазы

371704 ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Соеетскил Социалистическими РеспубликЗависимый от патентаЗаявлено 12.11,1971 ( 1620861/31-16 34 19/О. Кл риоритет 20,11.1970,Р 2007792.3, ФР публиковано 22.11,1973, Бюллетеньата опубликования описания 8 Х.1973 Комитет по пелам изобретений и открыт при Совете Министре СССРУДК 577.155.3(088 Авторыизобретения странцы Вильфрид еспублик иная фир рикен Ба еспублика Клаус Бауэр и(Федеративная Р КауфманГерманнмаер АГГермани Заявитель ПОЛУЧЕНИЯ 1.-ГЛЮТАМИНАЗЪ П Изобретение о вноси вся к области медицины.Известен способ получения Л-глютаминазы путем обработки клеток продуцента ацетоном с последующей экстракцией водой и выделением фермента из экстракта фракционированием органическими растворителями.Целью изобретения является,распгирение источников получения фермента.Достигается это тем, что в,качестве лродуцента используют штамм АТСС 13985 Рзеийотопаз аигео/астепз.Пр и ме р 1. Выращенную при температуре 30 С скошенную агаровую,культуру из Рзеиг/отопаз аигео/астепз АТСС 13985 смывают 4,0 си 0,9%-ного стерильного раствора МаС 1. 100 см стерильного 2%-ного (но весу) фильтрованного до прозрачности раствора кукурузы в заимочной воде (рН 7,0) заражают 2,0 см полученной суопензии, содержащей бактерим, и вььдерживают в колбе Эрлен- мейера объемом 1 л в течение 8 час при температуре 30 С на машине для встряхиваотия. Полученная таким образом культура, выращенная на качалке, служит в качесгпве заправочного материала для ферментных культур.Затем берут 8 л питательного раствора (на водопроводной воде) слвдующего состава (г): 1.-глютаминовая кислота 64, глицерин 48, молочная кислота 24 КзНР 04 9,2, КН 2 Р 04 5,05, Мф 04 1,12, Ре 804 0,048, Мп 504 0,048, тчаС 1 0,048. С,помощью 1 н. натрового щелока доводят значение рН до 7,0, стерилизуют ь стеклянном ферментере емкостью 10 л в течение 30 иин при 115 С, и после охлаждения заражают 25 смз,выращенной на качалке культуры Рзеийотопаз аигео/астепз АТСС 13985.10 Ферментационную исходную смесь подвергаютаэрации при температуре 30 С четырьмя лит,рами воздуха в минуту при скорости враще.ния мешалки 200 об/мин, Через 5 - 6 часзначение рН ферментной культуры меняется с 15 7,0 на 7,5. В течение дальнейших 14 час в растущую культуру вводят 1,5 л/мин углекислого газа (С 02), в результате чего значение рН повышается до 8,0.Активность У,-глютаминазы культурного, раствора составляет 8,3 ед/смз.20 Клетки бактерий центрифугируют, затем изкультурального бульона в дистиллированной воде вторично су 1 спендируют до объема 0,32 л.Для коагуляции бактерий суспензию вливают в 8 л ацетона, добавляют затем еще 4 л аце тона, и коагулированному клеточному материалу дают осадиться, Затем оставшийся наверху раствор декантируют, осадок промывают,овежим ацетоном и сушат в вакууме371704 Составитель Т, ГоловинаРедактор Н. Спиридонова Техред Е. Борисова Корректор Е. Денисова Заказ 1271/14 Изд.1248 Тираж 467 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 3при температуре 30 С, При этом получают 35,6 г сухого клеточного материала с активностью Л-тлютаминазы 1,63 ед/мг.П р и м е р 2. К 8 л культурального бульона, полученного как в примере 1, при энергичном размешивании добавляют 8 л ацетона. Коагулированному клеточному, материалу. дают осадитыся, затем прозрачный остававшийся наверху раствор декантируют, осадок дважды промывают 4 л свежего ацетона и еще раз незначителыным количеством ацетона, и затем сушат етого в вакууме при температуре 30 С. Получают 39 г сухого клеточного материала с активностью Л-глютаминазы 1,2 ед/мг,П р и м е р 3. Получение сырой глютаминазы посредст 1 вом осаждения ацетоном. 1200 г ,клеточ 1 ното материала с 1,6 ед/мг вещества суспендируют в 21 л цитратного буфера 1 со значением рН 5,0, размешивают в течение 2 час при комнатной температуре и затем, охлаждая, центрифугируют при 20 000 о. Остающийся наверху раствор сметпивают с тем же количестном ацетона и выпадающий при этом осадок, после отстаивания в течение 1 час, 5 центрифугируют при 3000 об/мин, промываютацетоном и сушат.Экстракцию клеток повторяют. Выход:321,2 г или 4,2 ед/мг или 75,2%,10 Предмет изобретения Способ получения У.-глютаминазы путем обрабопки клеток продуцента ацетоном с последующей экстракцией водой и выделением 15 фермента из эистракта фракционированиеморганичеокими растворителями, отличающийся тем, что, с целью расширения источников получения фермента, в качестве продуцента используют штамм АТСС 13985 Рзеийотопаз 20 аитео 1 асгепз.