Способ получения

Союз Советских Социалистических Республик. св висимое от Заявлено 17 Л 1.1970 (1 че 1450072/231. Кл. С 07 с 167/00С 07 с 167/14 С 07 с 169/34 присоединением заявк иоритет Ковтите по делаи зооретений и открытий юллетеньУДК 547.689.6(088.8) 11.197 публиковапо 3 и Совете Министре СССРДата опубликования описания 6.Ъ.1972 вторызобретениаявитель А. А. Ахрем, Н, Е. Войшвилло, Л. Е, Куликова и 1 О, А. Титов Институт органической химии им. Н. Д, ЗелинскогоСПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РОИЗВОДНЫХ 1,2-ДЕГИДРОПРОГЕСТЕРО С ДОПОЛНИТЕЛЬИЫМ КОЛЪЦОМ ЕИзобретение относится к способу получения производных 1,2 - дегидропрогестерона, обладающих ценными фармакологическими свойствами.Известен химический синтез производных 1,2-дегидропрогестерона, включающий проведение реакций гидролиза Зр-ацетокситруппы, окисления образовавшейся Ь"-Зр-оксигруппы в Ь 4-3-кетогруппировку и дегидрирования до Ь -З-гетогруппы.По предлагаемому способу получение производных 1,2-дегидрапрогестерона осуществляют в одну стадию путем окислительной микробиологической трансформации исходных Ьо-Зр-ацетоксистероидов.Способ получения производных 1,2-дегидропротестерона с дополнительным кольцом Е заключается в том, что ЬЗ-ацетоксисоединения подвергают взаимодействию с мико- бактериями М. д 1 оЬ 11 огтпе, М. 1 ас 11 со 1 цтп, М, тпцсоэцтп, М. рЫе 1, М, эгперпа 11 э с выделением целевого продукта известными приемами.П р и м е р 1. Получение Ь 4-циклогексено, 2, 16, 171-Ь 4-прегнадиендиона,20 из ацетата Ь 4-циклогексено, 2, 16, 17 - Ь" - прегнен-Зр-ол-она(1) .А. Культуру МусоЬас 1 ег 1 цгп д 1 оЬ 11 огтпе 193 выращивают при 28 С 70 час в 100 мл среды, состоящей из 1% кукурузного экстракта и 1% глюкозы (рН 7,0). Все процессы выращивания и трансформации проводят в конических колбах объемом 750 мл на качалке(200 об/мти). Полученный посевной материал5 переносят,в 100 мл среды того же состава вколичестве 10 мг сухой биомассы и выращивают 48 час. Затем к культуральной жидкостиприбавляют физиологический раствор с 10 - МСоС 1 з с такпм расчетом, чтобы полученная10 суспензия содержала до 1 г/л сухой биомассы. В 150 мл данной суспензни вносят 50 мгацетата (1), растворенного в 2 мл диметилформамида, Всего трансформируют в 30 колбах 1,5 г стероида при 32 С в течение 48,5 час.15 Объединенную культуральную жидкость послеокончания трансформации экстрагируют дваж.ды (по 1 л) хлористым метиленом. Экстракт сушат над Мсг 504, фильтруют или упариваютдосуха. Получают 1,79 г маслообразного веще 20 ства, которое фильтруют через, колонку с А 1 зО,под давлением азота при элюированин смесьюгептан - эфир, Получают 0,39 г исходногоацетата и 0,84 г продукта реакции, После кристаллизации из ацетона с гексаном выделяюг25 аналитический образец с т. пл. 155 - 158 С.УФ-спектр: Р макс246 нм (г 15250); ИКспектр (КВг) 1690 см - 1 (20-кетон), 1660, 1630,1600 и 890 см-т (Ь 4-3-кетон) .30 Найдено, %: С 82,37; Н 8,71,15 20 25 30 35 40 45 Предмет изобретения 5055 Составитель Г. ЖуковаТсхред 3. Тараненко Корректор Л. Бадылама 1 едактор О. Кузнецова Заказ 1046/7 Изд.518 Тираж 448 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров ССС 1- Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Сапунова, 2 Типография, пр,С 25 Н 3202.Вычислено, о/о. С 82,37; Н 8,85.При пересчете на превращенный стеропд выход указанного продукта реакции составляет 76 о/о.В. Преврагцение полученного ацетата в Л -3-кетостеропд способны осуществлять также хгпкобактерпп, принадлежащие к видам М. 1 ас 11 сошп, М. пгпсозгнп, М. р 1 ге 1, М. згпедгпа 1 з.Кукурузно-глюкозную среду (состав приведен выше) разливают по 100 мл в конические колбы объемом 750 мл, стерилизуют 30 мин при давлении 0,5 атм и засевают 7-суточными культурами указанных микобактерий, выращенных на сусле-агаре с МПА (1:1). После 70 час роста культуральную жидкость каждого штамма разбавляют в 2 раза стерильной водой, разливают в две колбы и,вносят ацетат, растворенный в метаноле. Появление Л 4-3-кетопроизводного через 24 час трансформации устанавливают методом тонкослойной хроматографии на окиси алюминия путем сравнения величины Рг с заведомым образцом.П р и м е р 2. Получение циклогексапо,2;16,171 - Л 4 - прегнадиендиона - 3,20 из ацетата циклогексано - Г,2; 16,171 - прегненЗр-ол-она,М, д 1 оЬ 11 оггпе 193 выращивают аналогично примеру 1, но для приготовления трансформирующей суспензии берут более молодые клетки в возрасте 23 час, 30 мг стероида вносят в 2 мл диметилформамида на 150 юг суспензии, содержащей 1,7 г/л сухой биомассы. В 30 колбах трансформируют 0,9 г стероида в течение 48 час при 32 С. Объединенную культуральную жидкость экстрагируют 3 раза (по 1 л) хлороформом. Экстракт сушат Мд 504 и упаривают. Получают остаток 1,78 г, который разделяют на колонке с ЯОз при элюировании смесью гептан - эфир. Получают 0,3 г исходного ацетата, 0,075 г Л 4-3-кетопроизводного и 0,35 г целевого продукта, После кристаллизации из ацетона с гексаном получают аналитический образец с т. пл. 163 в 1 С. Уф-спектр Х ма,с250 нм (е 15500); ИКспектр (КВг) 1690, 1670, 1630, 1610 и 890 см - т. 1-1 айдено, /о. С 81,82; Н 9,35, СззНз 40 а. Вычислено, /о. С 81,92; Н 9,35. Выход Л 4-3-кетопроизводного в пересчегена превращенный стероид составляет 59/,. П р и м е р 3. Получение 5-метил-Л"-циклогексено - 1,2,16,171 - Л 4-прегнадиендиона,20 из ацетата 5-метил-Л 4-циклогексено 1, 2; 16, 17 - Лв - прегнен-Зр-ол-оназ 20,Аналогично примеру 1 трансформируют 1,5 г ацетата с культурой М. д 1 оЫоггпе 193 в возрасте 46 час. После экстракции и упаривания растворителя получают 2,2 г маслообразного продукта, который хроматографируют на колонке с %02 в системе петролейвый эфир (70 - 100 С) - эфир, Выделяют 0,14 г исходного ацетата, 0,07 г Л 4-3-кетопроизводного, 0,6 г Л"-3-кетопроизводного и 0,83 г смеси сильно полярных соединений. После кристаллизации из ацетона с гексаом получают аналитический образец с т. пл. 147 - 158 С,Уф-спектр Х245 нм (и 15840); ИК- спектр (КВг) 1700, 1670, 1630, 1610 и 890 см-т,Найдено, о/о. С 82,56; Н 9,20.С 26 Н 3402,Вычислено, /о: С 82,49; Н 9,05.Выход указанного соединения при пересчете на превращенный ацетат равен 44/о.Г 1 р и м е р 4. Получение 3-метил-Л 4 нциклогексено - 1,2; 16, 17 - Л 4 - прегнадиендиона - 3,20 из ацетата 3-метил-Л-циклогексено,2, 16, 17 - Л" - прегнен - ЗД - ол - она - 20.Аналогично примеру 1 трансформируют с культурой М. д 1 оЬ 11 оггпе 193 в возрасте 42 час 1,75 г ацетата,в течение 5 час. После экстракции культуральной жидкости и отработки экстракта получают маслообразный продукт, который храматографируют на колонке с 5102 в системе гептан - эфир. Выделяют 0,74 г исходного стероида, 0,03 г Л"-3-кетопроизводного и 0,6 г Л 4-3-кетопроизводного, кристаллизацией которого из ацетона с гексаном получают аналитический образец с т. пл.228 в 2 С. УФ-спектр Ханаке 247 нм (в 16660); ИКспектр (КВг) 1700, 1600, 1620, 1600 и 910 см - . Найдено, /о. С 82,51; Н 9,04. С 2 оНЗ 40 з. Вычислено, %: С 82,49; Н 9,05. Выход полученного стероида составляет62/о, считая на превращенный субстрат,Способ получения производных 1,2-дегидропрогестерона с дополнительным кольцом Е, отличающийся тем, что Л-Зр-ацетоксисоединения подвергают взаимодействию с микро- бактериями М. д 1 оЬПоггпе, М. 1 ас 11 со 1 пгп, М. пшсозшп, М. рЫе 1, М. згпедгпа 11 з с выделением целевого продукта известными приемами.