Способ определения серотонина в биологических жидкостях

.л,-;ь,"л: ".гт .ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 33) 312 Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт, свидетельстваМ. Кл. б 01 п 33/16 Заявлено 21.7.1970 ( 1428560/31-16)с присоединением заявкиПриоритетОпубликовано 07,111.1972. Бюллетень9Дата опубликования описания 17.1 т/.1972 Комитет по делам изобретений и открыт при Совете Министре СССРаявитель ПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕРОТОНИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХИзобретение относится к биохимии и касается способа определения серотонина в биологических жидкостях,Известны способы определения серотонинав биологических жидкостях, например, в плазме, путем перевода его в органическую фазуиз тканевого гомогената, промывания, перевода в водную фазу и спектрофлуориметрирования. Эти способы, однако, недостаточно чувствительны и не исключают ошибок определения,Целью изобретения является увеличениечувствительности и точности метода. Это достигается тем, что серотонин из тканевогогомогената непосредственно переводят в органическую фазу, а в качестве органическогорастворителя применяют гептиловый спирт.Для выполнения анализа в центрифужнуюпробирку с 0,5 мл Зо/с-ного раствора трилонаберут из локтевой вены 5 мл крови и осторожно перемешивают. Для подсчета тромбоцитовкрови в лейкоцитарный меланжер набираюткровь до метки 0,5 и до метки 11 3/о-ныйраствор солянокислого кокаина. Кровь центрифугируют при 45 д и 0 - 5 С в течение 5 мин, 252 мл надосадочной плазмы с тромбоцитами переносят в другую пробирку, из которой аналогично забирают плазму в меланжер для подсчета тромбоцитов, Подсчет проводят через1 - 3 час после взятия крови или плазмы. 30 Прц определетши серотонина в тромбоцптах отделенную плазму центрифугируют при 1600 д и 0 - 5 С в течение 20 лгин и сливают надосадочную плазму в другую пробирку. Осадок тромбоццтов (или 2 мл плазмы в случае определения серотонина в плазме) быстро охлаждают до минус 40 С, оставляют на 3 - 6 дней и оттаивают. Процедуру замораживания и оттаивания повторяют еще раз, после чего к 2 лгл плазмы цли к осадку тромбоццтов добавляют бпдцстцллцрованцую воду до 4 лгл, перемешивают ц прибавляют 4 лтл боратного буферного раствора (рН 10,0). Смесь насыщают поваренной солью и добавляют 12 лгл гептилового спирта. После перемешивания в течение 10 мин пробирки центрцфугцруют прп 1600 д в течение 10 лгин, 10 мл органической фазы переносят в другую пробирку с 1,2 лгл О,1 н. соляной кислоты, встряхивают 5 лгин ц центрифугируют прц 36 д в течение 10 мин. В кювету с 1 мг 6 н. соляной кислоты добавляют 1,0 лгл водной фазы. Флуориметрцрование проводят при максимуме спектра возбуждения 295 ммк и сканнированцц спектра флуоресценции (максимум при 540 лглгк) на флуоресцентном спектрофотометре. Одновременно анализу подвергают 0,5 лтнг серотонпна, 4 лт,г бидистиллированной воды и 1 лтл надосадочной плазмы без тромбоцитов с добавлением 0,5 лйсг серотонина в качестве внутреннего331312 Предмет изобретения Составитель В, Таратута Техред 3, ТараненкоКорректор Е. Исакова Редактор Д. Пинчук Заказ 919/11 Изд,342 Тираж 448 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров ССС 1Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 стандарта, Неспецифическую флуоресценцию реактивов вычитают. Для внесения добавочной поправки на неспецифическую флуоресценцию в кювету с исследуемым раствором добавляют каплю концентрированной перекиси водорода и после смешения смесь повторно сканнируют. Измерение интенсивности флуоресценции плазмы без тромбоцитов и внутреннего стандарта позволяет определить содержание серотонина в исследуемой плазме или осадке тромбоцитов, При подсчете тромбоцитов в крови и плазме можно полученный результат пересчитать на концентрацию,Способ определения серотонина в биологических жидкостях, например, в плазме, путем 5 перевода его в органическую фазу из тканевого гомогената, промывания, перевода в водную фазу и спектрофлуориметрирования, отличаощийся тем, что, с целью увеличения чувствительности и точности метода, серотонин 1 О из тканевого гомогената непосредственно переводят в органическую фазу, а в качестве органического растворителя применяют гептиловый спирт.