308582

О П И С А Н И Е 308582ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических РеспубликК ПАТЕНТУ Зависимый от патента М 1 ПК С 0 д 7/028 аявлено 15,1,1968 ( 121816228-1 Приоритет 16.П.1967, публиковано 01.И 1.1 6 а/122730, ГДР Комитет по делам зобретений и открытий при Совете Министров СССР"ГЛ а 3 БАБг вторыобретен Иностранц арл Цикрик, Иоха(Германская Дем Иностра титут фюр ди Геиппи ика) нн Хубер и Раинеркратическая Респуное предприятиеунгсиндустри, Энзиробиологикратическая Респу Заявитель синс Миоги унд техниш а) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТАИЗ КУЛЬТУРЫ БАКТЕРИЙ МЕЬЕНТЕК 1 С 118 811 ВТ 1118,СПОСОБНОГО ОСАЖДАТЬ БЕЛОК МОЛОКА ц в, В ас 111 ц обладающц Изобретение относится в основном к сыродельной промышленности и касается способаполучения биохимическим путем с помощьюбактерий группы МезеЫег 1 сцз зцЫ 111 з селективно осаждающего молочный белок или же 5предпочтительно обладающего протеолитическим действием ферментного препарата, который может быть использован при изготовлении сыров в качестве заменителя сычужногофермента. Кроме того, предлагаемый иренарат может быть использован при производствемоющих средств, кормов, в кожевенной промышленности, в медицине,Известен способ получения ферментногопрепарата из культуры бактерий МезеЫепсцв 15зцЫ 111 з, способного осаждать белок молока,путем приготовления посевного материала споследующими культивированием его на производственной питательной среде и выделением препарата из культуральной среды одним 20из известных способов.Для получения ферментцого препарата сповышенной активностью предлагается посевной материал для сохранения и высевабактерий готовить на свежем обезжиренном 25молоке, а в качестве питательной среды использовать обезжиренное молоко, овсяцыц шрот, пшеничные отруби, ячменный шрот и неорганические соли.Для получения препарата, обладающего предпочтительно протеолцтической актцвцостью, в производственну 1 о питательную среду дополнительно вводят кукурузное молоко, картофельный крахмал и перетертый сыроц картофель.Предлагаемый способ заключается в следующем. Бактерии группы Мезе 1 йег 1 сцз вцЫ 111 з получают из различных естественных субстратов, например картофеля, помидор, яблок, молока, сырого казеина, и высевают ца следующие питательные среды: агар, приготовленный на мясном экстракте; пептоцовый агар; агар, полученный из соединения хццалазурь-лактоза-мясной экстракт; агар, приготовленный на глюкозном бульоне, и казеццовый агар. Полученные чистые культуры бактерий после нескольких пассажей пересевают в лакмусовое молоко и затем определяют протеолитцческую активность.Обнаруживают несколькоВасИцз зцЫ 111 з, Вас 111 цз се гесегецз айаг, гпусоЫез и другие, -308582 40 45 50 55 60 Изд.943 Тираж 473 Заказ 2248/П Подписное Сапунова, 2 Типография, пр,после выдержки в соответствующих жидких питательных средах энзимной активностью порядка 1:1000, 1:3000 и более.Активный штамм группы Мезе Ыег)сцэ зцЫ 111 з пересевают в обезжиренное свежее молоко, что способствует энзимной адаптации, а затем после окончания инкубационного периода - в колбу на качалке со свежим сепарированным молоком, По достижении необходимой интенсивности полученный материал используют в качестве посевного для выращивания культуры на производственной питательной среде,Подбирая состав последней, получают культуру необходимой протеолитической активности, Выращивание бактерий в питательной среде следует проводить в аэробных условиях. Ферментаторы необходимо снабдить системой принудительной вентиляции и перемешивающим устройством. Температура выращивания 28 - 37 С, а продолжительность выращивания 18 - 32 час. Энзимная активность равняется 1; 1000 - 1: 3000 в пересчете на активность сычужного фермента, Протеолитическая активность зависит от состава питательной среды.После окончания процесса выращивания культуральную жидкость отфильтровывают, а фильтрат сгущают. Полученный концентрированный продукт (при концентрации 1: 10 - 1: 12) пригоден для использования в сыроделии, его активность 1: 10000 - 1: 15000. Могут применяться также сухие продукты осаждения, имеющие активность сычужного фермента 1:100000 и более.Чтобы содержащий протеазу фильтрат можно было применять в других областях, его необходимо переработать и очистить. Так, для применения в медицине энзим осаждают с помощью сульфата аммония или танина, или органических осадителей, например ацетона, этилового спирта, изопропилового спирта. Продукт осаждения можно экстрагировать, например, 10/в-ным раствором ХаС 1, затем повторно осадить и после этого высушить.Если энзим хотят использовать в промышленности, производящей моющие средства или корма, то можно ограничиться сырым (необработанным) продуктом осаждения.П р и м е р 1. Активный штамм группы МезеЫепсцв зцЫ 111 з пересевают в сепарированное свежее молоко и выращивают при 30 С в течение 30 - 48 час, после чего пересевают в колбу на качалке, содержащую свежее обезжиренное молоко. Затем выращенный материал используют для засевания производственной питательной среды, состоящей из 20% молока; 1 о/о овсЯного шРота; 1 пшеничных отрубей; 1/о ячменного шрота; 0,01 КН 2 РО 4, 0,05% (МН) 304 и 0,01 /о Мф 04, рН среды после стерилизации б,7 - 7,2. 5 10 15 го 25 30 35 После окончания процесса выращивания культуры берут пробу и определяют коагулирующую молочный белок энзимную активность ее в единицу времени, причем определение проводят в обезжиренном молоке.П р и м е р 2. Для получения препарата с предпочтительно протеолитическим действием процесс ведут, как указано в примере 1, но в производственную питательную среду вводят 1 "/о ячменного шрота, 0,8 в/, пшеничных отрубей, 0,7 овсяного шрота, 1,2/о протертого сырого картофеля и 0,01% СаС 12.11 р и м е р 3. В ферментаторах емкостью 500 л готовят питательный раствор из 1 а/в ячменного шрота, 1% овсяного шрота, 20% сепарированного свежего молока, 0,5% картофельного крахмала, 0,02 о/о СаСОз и 0,01% Мд 04, Затем раствор стерилизуют при перемешивании, рН после стерилизации 6,5 - 7,0.После засева культуры, полученной по примеру 1, ферментатор содержит 200 - 350 л культурального раствора. Содержимое перемешивают и продувают через него воздух (лучше всего в количестве 70 - 120 л/мин), Для гашения пены используют растительные, животные масла или пеногасители, приготовленные на силиконовой основе.Спустя 18 - 28 час процесс выращивания оканчивается, Культуральный раствор отфильтровывают, фильтрат концентрируют, например, в соотношении 1:10. Затем полученный концентрат с активностью 1:10000 - 1:20000 в пересчете на активность сычужного фермента или продукт, осажденный из концентрата, с активностью 1: 100000 поставляют сыро- дельной промышленности. Предмет изобретения1. Способ получения ферментного препарата из культуры бактерий МезеЫег 1 сцз вцЫ 111 з, способного осаждать белок молока, путем приготовления посевного материала с последующими культивированием его на производственной питательной среде и выделением препарата из культуральной среды одним из известных способов, отличающийся тем, что, с целью получения ферментного препарата с повышенной активностью, посевной материал для сохранения и высева бактерий приготовляют на свежем обезжиренном молоке, а в качестве питательной среды используют обезжиренное молоко, овсяный шрот, пшеничные отруби, ячменный шрот и неорганические соли,2. Способ по и, 1, отличающийся тем, что, с целью получения препарата, обладающего предпочтительно протеолитической активностью, в производственную питательную среду дополнительно вводят кукурузное молоко, картофельный крахмал и перетертый сырой картофель.