Способ получения д-кетоглутаровой кислоты

25979 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Соеетскнк Социалистическик РеспуОлик(088,8) Приорите онитет по делан ооретеиий и открыти ри Сосете Мннистрое СССР1.1969. Бюля описания Опубликовано 22,ХЛата опубликован Авторыизобретени А. Б. Л Р. Я, Кар И Жозинов, Т, В, финогенова, М. Е. Беклиньш, Л. Н, Мунтян, Г, К. ЛиепПелцмане, Д. Г. Зариня, 3, А, Каи Ю. О, Якобсон кер, И. Т. Ерма иньш, С. М. Цхо лниныц, В. А. С ова,:,ария","а, г" АН СССРнштейна т биохимии и физиологии микроорганизмов ститут микробиологии имени Августа Кирхе Инстии И аявител ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ,и-К 1Известно, что,при выращивании дрожжей рода СапдЫа на средах, содержащих в качестве источника углерода жидкие парафины или индивидуальные алканы, образуется акетоглутаровая кислота. Однако выход продукта:незначителен.Для повышения выхода продукта предлагается использовать дрожжевые культуры, дефицитные,по тиамину, в частности СапдЫа Иро 1 ц 11 са и СапйЫа гцдоза и процесс вести в среде строго определенных количеств тиамина или 4.амино-окси-метил- метилпиримидина, Концентрация тиамина в среде должна составлять 0,1 - 1,0 мкг/л; концентрация 4-амин - окси - метил - 2 - метилпиримидина 0,05 - 1,0 мкг/л.Осуществляют,предлагаемый способ следующим образом.Культуру дрожжей СапдЫа 11 ро 1 ц 11 са или СапйЫа гцдоза культивируют на среде, содержащей жидкий парафин или индивидуальные углеводороды в качестве источника углерода, а также источники азота, фосфора, натрия, калия, микроэлементы и тиамин или 4-амино-оксиметил.2-метилпиримидин, в условиях аэрации, рН поддерживают 4,0 - 4,5.Продолжительность ферментации 3 - .7 суток.Выход а-кетоглутаровой кислоты составляет 90% от внесенного субстрата (а-кетоглутароЛУТАРОВОЙ КИСЛОТЬ вую кислоту определяют а форме.2,4-динитрофенилгидразона) .Наряду с а-кетоглутаровой кислотой в сре.де накапливается значительное количество5 рибофлавина. Полученную дрожжевую биомассу можно использовать для кормовых ипищевых целей,Процесс можно интенсифицировать, проведя его в две стадии.10 На первой стадии создают услсвия, благо.приятствующие накоплению биомассы (минимальная концентрация тиамина или 4-амино.-5-окси-метил-метилпиримидина). На второйстадии содействуют интенсивному образова 15 нию а-кетоглутаровой кислоты.В среду можно добавлять бактериостатические вещества (полихтиксин, фурацилин идр.).П р и и е р 1. Дрожжи Сапс 1 Ыа Иро 1 ц 11 са20 хранят на агаризованной минеральной средеРидера с парафином.Посевной материал готовят в колбах на качалках на среде состава, %: (КН 4)гЯОг 0,3;МЯО 4 7 НгО 0,07; 1 чаС 1 0,05; Са(1 чОз)г 0,04;25 К НР 04 0.1; КНгР 04 0,11; жидкий парафин -0,8; вода водопроводная кипяченая - до 100.Посевной материал (5% от количества среды),высевают на опытную среду. Ее состав,Предмет изобретения Корректор Е. В, фомйнй Техред Л, Я. Левина Редактор С. Лазарева Заказ 2886/6 Тираж 480 ПодписноеЦНИИПИ .Комитета по делаем изобретений и открытий при Совете Министров СССР, Москва, Ж-З 5, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 0,1; жидкий парафин 2,4; вода водопроводная до 100. В среду вводят тиамин или 4-амин- оксиметил-метилпиримидин в концентрации 0,4 мкг/л.Процесс ведут при 28 - 30 С, рН 4,0 - 4,5, аэрации 0,25 об. воздуха (об. среды) мин. Продолжительность ферментации 6 - 7 суток.Содержание а-кетоглутаровой кислоты в среде в конце процесса равно 21,3 г/л, что соответствует выходу 88% от веса взятого парафина.Одновременно в среде накапливается 8 мкг,л рибофлавина. Выход биомассы составляет 2,9 г/л (по сухому весу).П р и м е р 2. Посевной материал дрожжей СапдЫа гцдоза готовят по,примеру 1. Опытная среда имеет следующий состав, %; (ИН 4)й 04 0,3; Мдс 104 7 НгО 0,07; ХаС 1 0,05; Са(ИОз)г 0,04; КгНР 04 0,01; КНгР 04 0,1; гексадекан 0,8; КагВ 407 10 НгО 0,0087; Мп 504 7 НгО 0,005; Хп 504 7 НгО 0,031; Сц 504 5 НгО 0,0039; ХагМо 04 2 НгО 0,0025; Ге 504 7 НгО 0,025; К 1 0,01; вода бидистиллированная до 100. Концентрация тиамина в среде 0,4 г/л.Процесс проводят в колбах на качалках в течение 2 суток. Затем биомассу отделяют и помещают в фосфатный буфер с рН 4,0, содержащий 0,4% гексадекана, Все операции проводят с соблюдением мер стерильности. Прироста биомассы:не происходит, но интепсивно идет биосинтез а-кетоглутаровой кислоты. За 12 час содержание ее в биомассе достигает 0,34 г/г биомассы.Пр имер 3. Процесс ведут по примеру 1, 5 но в присутствии антисептиков: полимиксина(5 мкг/л), биомицина (50 мкг/л) и соединений фуранового ряда (фурацилина, фуразолидона, фуразидина, 15 мкг/л).Содержание а-кетоглутаровой кислоты 10 13,5 г/л. 15 1. Способ получения а-кетоглутаровой кислоты выращиванием дрожжей рода СапйЫа на средах, содержащих в качестве источника углерода жидкие парафины или индивидуальные алканы, отличающийся тем, что, с 20 целью увеличения выхода продукта, используют дефицитные по тиамину культуры, например Сапс 1 Ыа 11 ро 1 ц 11 са, СапйЫа гцдоза, и процесс ведут в,присутствии строго определенных количеств тиамина или 4-амино-оксиме тил-метилпиримидина.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, чтоконцентрация тиамина в среде составляет 0,1 - 1,0 мкгл.3. Способ по п. 1, отличающийся тем. что Зо концентрация 4-амико-оксиметил-метилпиримидина в среде составляет 0,05 - 0,1 мкг/л.