Способ получения меченных тритиемнуклеози

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 250147 Союз Соеетслиз Сониалистическиз Ресотблив(088.8) Приоритет Комитет ло делам зобретений и открыт лри Совете Министро СССРОпубликовано 12 Л 111,1969. БюллетеньДата опубликования описания 15.1.1970 вторызобретенияЗаявитель СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ УКЛ ЕОЗИД-МОНОФОСФАТ 01 з, йЛ и Н УКЛ ЕОЗ ИД-ДИФОСФАОтз, йЛи НУм 1 ОЗйдРйчОСмАТОВИзвестен способ получения меченных нуклеозидфосфатов путем выращивания соответствующей оиомассы на среде, содержащей радиоактивный предшественникполученные при этом меченые нуклеиновые кислоты известными способами выделяют и гидролизуют, 11 ри этом получают меченыи нуклеозидмоноросфат, который подвергают очистке от продуктов радиолиза, на смоле Дауэкс, а затем - фериентативноиу (росфорилирава нию. Таким образом получают меченые нуклеозидди- и трифосфаты. Эта методика трудоемка, ведет к большим потерям дефицитного меченого нуклеозидмонофосфата.Для упрощения процесса, предложен способ 1 ь получения меченных тритием нуклеозидмонофосщдтов или нуклеозиддифосатов или нуклеозидтрифосфатов, заключающийся в том, что нуклеозидтрифосфат, нанесенный на инертный носитель, подвергают тритированию 20 газообразным тритием в условиях высокочастотного электрического разряда при темпе,ратуре 100 - 150 С, полученную,при этом смесь меченных тритием нуклеозидмоно-, дни трифосфатов подвергают обработке форми атом аммония на смоле Дауэксв формиатной форме. Получают индивидуальные продукты, которые подвергают концентрированию путем обработки активированным углем, а затем раст,вором аммиака.30 В качестве нуклеозидтрифосфата можно применять аденозинтрифосфат, гуанозинтрифосфат, цитидинтриросфат, уридинтрифосрат или их дезоксипроизводные.Г 1 р им ер 1. Тритирование проводят в стеклянной ампуле со впаянным электродом, вокруг которого, помещают нанесеяный на стекловату трифосфат. На стекловату наносят 300 мг аденозинтрифосфата (АТФ). Время тритирования в условиях высокочастотного газового разряда 30 мин. Температура в процессе тритирования 120 - 130 С.После окончания тритирования вещество смывают со стекловаты водой и далее лабиль ный тритий замещают на водород путем об. мена с .водой и вакуумной отгонки,В табл. 1,приведены данные по снятию ла. бильного трития,при тритировании А 1 Ф 1 объем, удельная активность и общая активность,при трех, последовательных отгонках воды в пленочном испарителе при давлении 18 ли рт. ст).Остаток АТФ в колбе после трех отгоно ,растворяют,в 20 смз дистиллированной водьь Разделение нуклеотидов по степени фосфорилирования и очистку от продуктов радиолиза проводят на колонке длиной 20 см и диаметром 1,2 см, заполненной .смолой Дауэкс 1 Х 8 в формиатной форме с размером частиц смо. лы 200,300 меш, Разделяемый раствор помеВес, лг Аденозин 370 128 64 21,87 59,5107,25 Монофосфат Дифосфат Трифосфат Составитель С. Полякова Редактор Л, Г. Герасимова Техред Л. К. Малова Корректор А, С. КолабинЗаказ 3544/15Тираж 480 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва Я(.35, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 щают в верхнюю часть колонки, и элюцию ведут градиентом концентрации формиата аммония (от 0 до 1,7 мольл).В табл, 2 приведены количества и удельные активности полученных моно-, ди- и трифосфатов аденозина. Концентрирование аденозинфосфатов осуществляют сорбцией на угле марки Карборафин. С угля последние смывают аммиачно-опиртовой смесью и далее лиофильно высу 4шивают. Проверка .радиохимической чистоть 1 с,помощью бумажного горизонталвного электрофореза показала электрофоретичсокую однородностьь,продуктов.5 На,профиле активности имелся только одинпик, отвечающий соответствующему нуклеотиду,Предмет изобретения 10Способ получения меченных тритием нуклеозид-монофосфатов, или нуклеозид-дифосфатов, или нуклеозид-трифосфатов, с применением очистки полученных нуклеозид-фосфатов 15 от,продуктов радиолиза на смоле Дауэкс,отличающийся тем, что, с целью упрощения ,процесса, нуклеозид-трифосфат, нанесенный на инертный носитель, подвергают тритированию газообразным тритием в условиях высо кочастотного электрического разряда при температуре 100 - 150, полученную при этом смесь меченных тритием нуклеозид-моно-, дни трифосфатов подвертают обработке формиатом аммония на смоле Дауэксв формиат ной форме с последующим концентрированием,полученных индивидуальных продуктов путем обработки активированным углем, а затем спиртовым раствором аммиака.2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что 30 в качестве нуклеозид-трифосфата,используютаденозин-трифосфат, гуанозин-трифосфат, цитидин-трифосфат, уридин-трифосфат или их дезоксипроизводные.