Способ определения качественного состава микроорганизмов в пищевых продуктах

205785 Сокэ Советских Социалистических Республик(088,8) Хомитет обретеии деламоткрытий оетсь Ъ 0 24 ри Совете ССиистро та опубликования описания 22.1.19 АвторыизобретенияЗаяг:итель Афанасьева, Л. Н, Казанская и А. Г. Егороваое отделение Всесоюзного научно-исследовательскогонститута хлебопекарной промышленности инг СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАЧЕСТВЕННОГО СОСТАВ МИКРООРГАНИЗМОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХращва30 С.Выращенную культуру смывают физиологическим раствором и центрифугируют.5 В случае получения люминесцирующих антител против дрожжей осадок высушивают в стерильных условиях при 37 С в течение 5 дней, а затем разводят в физиологическом растворе.О При получении люминесцирующих антителпротив молочнокислых бактерий осадок разводят физиологическим растрором концентрации до 1 млрд. по бактериальному стандарту мутности и прогревают полученную суспен зию в течение 30 лтнн при 56 С.Полученные таким образом суспензин служат антигеном для иммунизации кроликов.Способ иммунизации последних зависит от вида микроорганизмов, идентификацию кото- О рых будут проводить,Так, если предстоит идент дрожжи, то в краевую вену уха к дят ежедневно в течение 10 дне 25 клеток в виде приготовленной с если предстоит идентифицирова кислые бактерии, то приготовлен риальную суспензию разводят ским раствором до концентрации ЗО 600 10 с, после чего в течение 12ифицировать ролика вво" по 1 млн.успензии, а ть молочноную бакте- физиологичеот 50 10 о додней ведчт микроорганизмов, наприассЬагопусев пппег или ерин 1.ас 1 оЬас 1 егцтп, выСпособ определения качественного состава микроорганизмов в пищевых продуктах, например тесте, общеизвестен,Согласно этому способу определение ведут путем идентификации микроорганизмов, заключающейся в высеве закваски или теста на элективные питательные среды, выделении чистых культур и изучении их культурально- физиологических свойств.Для ускорения процесса определения качественного состава микроорганизмов в пищевых продуктах и повышения его точности согласно предлагаемому способу идентификацию микроорганизмов проводят путем люминесцирования смеси суспензии различных ви. дов микроорганизмов, содержащихся в продукте, с высоленными из сыворотки крови животных антителами, выработанными при иммунизации животных предполагаемым видом микроорганизмов (антигеном), которую проводят одним из известных способов.При этом высаливание антител из сыворотки крови следует вести сульфатом натрия, а антитела перед люминесценцией окрашивать изотиоцианатом флуоресцеина.Предлагаемый способ заключается в следующем.Чистую культурумер дрожжи вида Ямолочнокислые бакт от на сусло-агарс в течение 48 час прпим мунизацию, увеличивая ежедневную дозу на 50 млнlмл.Спустя три дня после проведения последней инъекции (как при работе по первому способу, так и по второму), животных обескровливают, из сыворотки крови выделяют антитела путем высаливания их 20 в/в-ным раствором сульфата натрия при 37 С и течение 3 час, центрифугируют в течение 20 мин и подвергают диализу. Диализ ведут до исчезновения следов 504.Для окраски антител применяют изотиоцианат флуоресцеина. К 47 о-му раствору приготовленных антител добавляют равный объем 0,01 М фосфатного буфера с рН, равным 8,6, из расчета 5 мг на 1 мл и отстаивают.Затем добавляют краситель из расчета 2 мг красителя на 100 мл раствора. Полученную смесь оставляют на 6 час при плюс 2 - 4 С при перемешивании. Не вступивший в соединения с антителами краситель удаляют на ионообменной колонке.Полученную сыворотку, содержащую окрашенные антитела, консервируют мертиолятом и лиофилизируют в ампулах, в которых сыворотка может храниться около года.При идентификации дрожжей или молочно- кислых бактерий, взятых, например, из бродящего теста, на предметное стекло наносят каплю исследуемой взвеси, высушивают на воздухе, фиксируют 5 мл этилового спирта, наносят 1 каплю люминесцирующей сыворотки и прокрашивают 20 мин во влажной камере, промывают физиологическим раствором, высушивают и микроскопируют,2057854При этом происходит связывание антителас антигеном. Внешним проявлением этого служит образование вокруг клеток зеленого ободка, видимого под микроскопом.Так, люминесцирующая сыворотка, полученная против определенного вида микроорганизмов, например 1.ас 1 оЬас 1 егшт рап 1 агцп 1, избирательно связывается только с бактериальными клетками данного вида с образованием 10 яркого, желто-зеленого ободка и не реагируетс гетероферментативными молочнокислыми бактериями (Ве 1 аЬас 1 егшгп), бактериями Дельбрюка и другими видами молочнокислых бактерий.15Предмет изобретения1. Способ определения качественного состава микроорганизмов в пищевых продуктах, например тесте, путем идентификации микро организмов, отличающийся тем, что, с цельюускорения процесса определения и повышения его точности, идентификацию проводят путем люминесцирования смеси суспензи и видов микроорганизмов, содержащихся в продукте, 25 с высоленными из сыворотки крови животныхантителами, выработанными при иммунизации животных предполагаемым видом микроорганизмов (антигеном), причем иммунизацию проводят одним из известных способов.30 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтовысаливание антител из сыворотки крови проводят сульфатом натрия.3. Способ по п, 1, отличающийся тем, чтоантитела перед люминесценцией окрашивают 35 изотиоцианатом флуоресцеина.Составитель М. Андреева Редактор Н, Токмачева Текред А. А. Камышникова Корректоры: Е. Н. Гудзова и О. Б. Тюрина Заказ 4579/14 Тираж 535 ПодписносЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4Типографии, пр. Сапунова, 2