Способ определения эффективности мембранопротекторов

(5)5 6 01 К 33/68 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Од ,4 О Ы(56) МатериалыВсесоюзн,конф. Биоантиоксидант, М.: 1989, т.1, с.107-108,Изобретение. относится к способам тестирования различных лекарственных препаратов и химических соединений при проведении фармакологического скрининга, конкретно к способу оценки эффективности мембранопротекторов и может найти применение в экспериментальных исследованиях в области фармакологии.Известны способы оценки мембранопротекторного действия по их влиянию на проницаемость сосудистых стенок микрососудов для макро-и микромолекул, регистрируемую с помощью прижизненной микроскопии в сочетании с микрофлюориметрией.К недостаткам данного способа относятся необходимость уникальной дорогостоящей импортной аппаратуры и наличия дефицитных реактивов.Известен также способ оценки эффективности мембранопротекторов, где в качестве биологического материала используются эритроциты крови, а эффективность действия оценивается по степени увеличения резистивности эритроцитов к механическому воздействию, гипотонииЯ 21734023 А 1(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕМБРАНОПРОТЕКТОРОВ (57) Использование: медицина, биология, скрининг веществ, обладающих мембранопротекторным действием, Сущность изобретения: пучки мышечных волокон инкубируют с исследуемым веществом. Регистрируют содержание белка в опытной и контрольной пробах. Мембранопротекторный эффект определяют по степени торможения выхода белка в среду инкубации. 1 табл. перекисной атаке, Способ заключается в следующем. Исследуемое вещество вводят экспериментальному животному до экстремального воздействия (термического повреждения). Спустя 1-2 ч после ожоговой травмы животное забивается декапитацией и производится забор крови с гепарином, выделяются центрифугированием эритроциты и трижды отмываются физраствором, Определяется резистентность мембран эритроцитов к перекисному гемолизу. Активность препарата оценивается по изменению резистентно:ти мембран к перекисной атаке,Недостатками указанного способа являются длительность выполнения анализа (8 ч 10 мин), трудоемкость, так как выполнение его включает семь процедур, лабильность биологического материала (мембран эритроцитов), недостаточная специфичность, так как нельзя использовать его для тестирования препаратов с миотропным действием,Целью изобретения является ускорение и упрощение спо:оба,1734023 25 30 35 40 Составитель Носова И.М,Техред М.Моргентал Корректор М. Демчик Редактор Ю. Середа Заказ 1667 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101,Поставленная цель достигается за счет сокращения числа процедур, инкубации исследуемого препарата 1 и асго с пучками мышечных волокон, а мембранопротектроный эффект определяют по степени торможения выхода белка в среду инкубации,П р и м е р, Из икроножной мышцы экспериментального животного выделяли пучки мышечных волокон массой 1-2 мг каждый и отмывали в течение 5 мин физраствором на льду, затем промакивали фильтровальной бумагой, взвешивали на торсионных весах и группы пучков волокон массой 20-100 мг помещали в среду инкубации объемом 2 мл, В опытные пробы добавляли неотон в конечной концентрации 500 мгlо. Инкубацию проводили в течение 120 мин в роторном смесителе при 4 С, По окончании инкубации в контрольных и опытных пробах определяли содержание белка, используя реактив Фолина (фирма "МегсК"), Мембранопротекторный эффект определяли по степени торможения выхода белка в среду инкубации, Выход белка выражали вотносительных единицах и рассчитывали поразнице между значениями оптическойплотности опытных и контрольных проб по 5 сле и до инкубации(ЛЕ) к массе волокон(мг),умноженной на 1000, Полученные данныепредставлены в таблице,Формула изобретенияСпособ определения эффективности10 мембранопротекторов путем обработки биологического материала исследуемым соединением с последующим определениемуровня белка в среде инкубации и сравнением с контролем, о т л и ч а ю щ и й с я тем,15 что, с целью ускорения и упрощения спосо- .ба за счет сокращения числа процедур, обработку проводят и чсго, в качествебиологического материала используют пучки мышечных волокон, а эффективность20 мембранопротекторов определяют по степени торможения выхода белка в среду инкубации,