Способ получения фибриногена

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 5 Ц ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ВСЕВВЗММ АВТОРСКО ВИДЕТЕЛ ЬС а и Научно-исематологии и рства здравочик, Г.Н,Бычка, ат Э И Тайц СССР1983,ФИБРИ ГЕ я к трансфуэиообам получения жет быть исполь(21) 4848196/14(71) МГУ им, М.В.Ломоносовследовательский институтпереливания крови Министохранения БССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯНА57) Изобретение относитслогии, в частности к споспрепаратов из крови, и мо Изобретение относится к трансфузиологии, а именно к способу получения препаратов из крови, и может быть использовано для получения фибриногена,Целью изобретения является повышение выхода и степени очистки от плазминогена целевого продукта.П р и м е р. 1250 мл донорской плазмы пропускают через колонку со 100 мл равновесно набухшего сополимера акриламида, й,й метиленбисакриламида и метакрилоил-:лизина (степень набухания сополимера в воде 700%), так что соотношение сорбента к плазме составляет 1:12,5, со скоростью 800 мл/ч. К полученной плазме при постоянном перемешивании добавляют 250 мл 30%-ной взвеси сульфата бария и инку.,Ж 1222839 А 1 К 35/16 зовано для получения фибриногена. Целью изобретения является повышение выхода и степени очистки препарата от плазминогена, Способ осуществляется посредством перфузии плазмы крови через сорбент - сшитый сополимер акриламида, М,И -мети ленбисакриламида и (мет)акрильного производного лизина со степенью набухания в воде 700 - 1000%, при объемном соотношении набухший сополимер. плазма, равном 1:(10 - 12,5). Путем последующего осаждения протромбина, криофибриногена и пере- осаждения фибриногена сернокислым натрием и фосфатным буферным раствором. Способ позволяет повысить выход фибриногена и получить препарат, очищенный от примесей плазминогена, что повышает его устейчивость при хранении. 2 табл. в течение 20 мин, Осадок отделяют угированием при 2000 об/мин в темин. К полученному супернатанту ) при постоянном перемешивании ют 300 мл 30%-ной взвеси сульфата инкубируют еще 20 мин, Осадок т центрифугированием при 2000 в течение 10 мйн. К супернатанту 52 мл) при постоянном перемешибавляют 150 мл глицинового буфе,1) и 900 мл 16%-ного раствора а натрия так, что конечная концентли в растворе составляет 5,0%, По-минутной инкубации осадок бриноген) отделяют центрифугиропри 2000 об/мин в течение 15 мин. дочной жидкости прибавляют 20 мл о раствора сульфата натрия (конечбируютцентрифчение 101727839 Таблица 1 Выход фибриногена по количеству сверты вающего белка % Объемноесоотношение сорбент:плазма Содержание плазминогена в фибриногене, мас, % УстойчиПример Производное -лизина Степень набухания, % вость сгустка фибрина, ч Метакрилоил:лизинАкрилоил:лизинАкрилоил.лизин 99,8 0,1 99,8 0,1 99,7 +0,1 1;12,5 700 12 1:11,0 1:10,0 850 12 1000 12 Таблица 2 ная концентрация соли составляет 8,5%). Смесь инкубируют 20 мин, осадок фибриногена отделяют центрифугированием, затем растворяют его в 800 мл 0,2 М раствора хлорида натрия и из полученного раствора. выделяют центрифугированием осадок, который растворяют в 800 мл 1/12 М фосфатного буфера. К раствору вновь добавляют 800 мл 2 М фосфатного буфера, инкубируют 20 мин и осадок отделяют центрифугированием, Полученный белок растворяют в 150 мл 0,2 М раствора хлорида натрия и послелиофилизации хранят на холоду. Все операции проводят при 4 С, общее время выделения 7 - 8 ч. Белок свободен от примесей Лиз-плазминогена и Глу-плазминогена полностью (по данным гель-электрофореза степень чистоты белка 100%), Устойчивость сгустка фибрина, полученного из выделенной указанным способом фибриногена, составляет 12 ч, свертывающая способность 99,8 . 0,1 с (табл, 1). Данные стабильности препаратов фибриногена, выделенных с помощью лизинсоХа акте истика со бента держащих сорбентов, при хранении в сухомвиде при 20 С приведены в табл, 2,Таким образом, при использовании способа повышают выход фибриногена и пол 5 учают препарат, очищенный от примесиплазминогена, что повышает его устойчивость при хранении,Формула изобретенияСпособ получения фибриногена путем10 пропускания плазмы крови через сорбент сковалентно иммобилизованным -лизиноми последующего осаждения протромбинасернокислым барием, осаждением криофибриногена и переосаждения фибриноге 15 на сернокислым натрием и фосфатнымбуферным раствором, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения выхода и степени очистки от плазминогена, в качествесорбента используют сшитый сополимер ак 20 риламида, К,М -метиленбисакриламида и(мет)акрильного производного-лизина состепенью набухания в воде 700-1000%, аплазму пропускают при объемном соотношении набухший сополимер:плазма -25 1;10,0 - 12,5,