Способ определения функциональной активности клеток крови доноров

)5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР МИТЕТОТКРЫТИЯ ЗОБРЕТЕНИЯ ОПИСАК АВТОРСК СВИДЕТЕЛЪСТВ КЦИОРОВ, А. аЬоЬача, всцсОоп о а 1 ога с 1 ег с 1 угп р) осу 1 ез.531 - 535. Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии и трансфузионной терапии, и может быть использовано при переливании крови больным.Цель изобретения - упрощение и повышение точности способа за счет расширения спектра оценки функций клеток.Способ осуществляется следующим образом.Из 10-15 мл гепариниэированной венозной крови человека получают суспензию лимфоцитов методом центрифугирования в градиенте плотности фиколл-гипака, Концентрацию лимфоцитов доводят до 2 10 клетокб в 1 мл среды 199 и по 0,2 мл разливают в четыре пробирки, после чего проводят инкубирование при 37 С в течение 40 мин, При этом в первой (контрольной) пробирке содержатся интактные лимфоциты, во вторую пробирку перед инкубированием добавляют 0,2 мл 10 э М раствора гидрохлорида ау)еиалина, в третью пробирку - 0,2 мл 10 М рас(56) Н. Кааа 1, А. Кагп Цаса, М. Катоо ,. Муацача, Т. АКаЬацс 1 успрйоИпеастча 1 ес 1 О 1 ег апс и ассчтез 1 гопз сгуоргезегчес ТгапзТозоп, 1988, ч, 28, М 6, р(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУН НАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК К И ДОНОРОВ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и переливанию крови, и может быть использовано для оценки функциональной активности больших гранулярных лимфоцитов (5 гл). Целью изобретения является повышение точности способа. Способ заключается в определении суммарного коэффициента аминосодержания (СКА) больших гранулярных лимфоцитов цитохимическими методами и.если величина СКА находится в интервале от 2,1 до 3,6, БГЛ считают функционально активными, а кровь донора пригодной для трансфуэии,твора креатининсчзльфата серотонина, в четвертую - 0,2 мл 10 М раствора гидрохло рида гистамина. После инкубации все четыре пробы подвергают центрифугированию, иэ осадков готовят мазки, последние фиксируют - д реактивом Севки (12 мл 40 -ного раствора ( формалина, 50 мл 5,ь-ного раствора двухро- ,(ф мовокислого калия,20 мл 1 М раствора уксусно- )( кислого натрия, до 100 мл дистиллированной воды) в течение 16-18 ч. Фиксированные мазки 1,5 ч отмывают в дистиллированной воде, затем 30 мин окрашивают по методу Романовского. В готовых мазках определяют раздельным подсчетом процентное содержание (по отношению к общему количеству лимфоидных клеток) БГЛ, имеющих гранулы фиолетового цвета - адреналинсодержащие, оранжевого цвета - серотонинсодержащие, красного цвета - гистаминсодержащие. По результатам определения рассчитывают СКА:СКА = Кадр+ Ксер+ Кгист,1686361 В 240 проб исходная функциональная активность выражалась в величинах СКА больше 3,6, а в 16 - меньше 2,1, В этих пробах исходный процент жизнеспособных клеток статистически достоверно был ниже (79,1 ф) и начинал снижаться после 3 дн. консервации.Таким образом, суммарный коэффициент аминосодержания, отражающий функциональную активность больших гранулярных лимфоцитов, может служить критерием при контроле клеток крови доноров в процессе консервации и при значениях от 2,1 до 3,6 показывает пригодность крови к трансфузии,Составитель Р, ГуменюкТехред М,Моргентал Корректор М, Демчик Редактор Н, Яцола Заказ 3594 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производсгвенно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 где К - коэффициент, характеризующий количественное соотношение БГЛ для кажДого способа инкубирования в присутствии тестируемых биогенных аминов, В свою очередьа с+с -г+а г 5а с+с г+а ггде а - процент БГЛ, несущих гранулы адреналина; с - процент БГЛ, несущих гранулы серотонина; г - процент БГЛ, несущих гранулы гистамина. В числителе - результаты определения для лимфоцитов, инкубированных с одним из биогенных аминов; в знаменателе - показатели для интактных лимфоцитов. Значения СКА в интервале от 2,1 до 3,6 говорят о пребывании натуральных киллеров в состоянии функциональной активности, СКА2,0 расценивается как показатель насыщения гранулярного аппарата натуральных киллеров у данного субьектэ биогенными аминами, а СКА3,7 свидетельствует об 20 истощении аминосодержащих гранул,П р и м е р. Проведено исследование функциональной активности больших гранулярных лимфоцитов в крови 43 доноров в процессе консервации, у 60 проб исходная функциональная активность, выраженная в значениях СКА, находилась в интервале от 2,1 до 3,6. Исследования повторяли каждые 3 дн. Было показано, что в течение 6 дн. от момента забора крови СКА находятся в этом же интервале, а после 6 дн. консервации принимал значения выше 3,6 или ниже 2,1. В эти же сроки начинал статистически достоверно снижаться и процент жизнеспособных клеток с 87 2,3 до 75+1,9, определяемый в пробе с трипановым синим,Фомула изобретенияСпособ определения функциональной активности клеток крови доноров путем исследования больших грэнулярных лимфоцитов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности за счет расширения изучения спектра функций клеток и упрощения способа, лимфоциты инкубируют параллельно в средах, содержащие адренэлин, серотонин, гистэмин и не содержащие их, в течение 40 мин при 37 С, далее пробы центрифугируют, из каждого осадка готовят мазок, обрабатывают по методу Севки, определяют в каждом количество больших гранулярных лимфоцитов, содержащих адреналин, серотонин и гистамин, вычисляют процент клеток, содержащих моноэмины во всех исследовэнных мазках, рассчитывают суммарный коэффициент аминосодержания и при его значении от 2,1 до 3,6 определяют клетки функционально активными,