Устройство для выделения мононуклеарных клеток из крови

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 151) 4 "А 61 Е ДЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСКОМ ательскии и сывороисаре е 1. А Ь.,НОСУ;(:Впр а дпд. СО,:; -ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ И(56) СЬ)п Р., Коне . 1., ЬЗСЬге 1 Ь1 зоа 11 оп о 1 сц 1 цгед Ьцв ап и;пасгорЬаоев и зцврегвОп ц 1 7.апд зо)д рЬазе деа 11 п,. - -1 гппщп 1).и. 1983, 12, ъ 4, р. 404 - 417.(54) )(СТРО:СВб(.1) ВЫДЕЛЕНИЯ М 011 И.УКЛЕАР 11-1 Х К, ВТОК ИЗ КРИВИ (57) 11 зобрете; Гнснтся к меди; (1 и( Цельн зобрстс(я )(1,1);от;я ниропение процесса выделениязс,.ение количества ВЫДРЛЯЕ)1 ЬХ МОНОН;ЛЕ 1)11.(. К 1 СТК., СТ- ройсзво содержит сосуд 1, соединенный трубопроводом 7 с змеевиком 2, размещенным в резервуар 3., со;диенным с термостатом 4, слиВнОЙ розе(1."р О с зажимом 9. Выделение монон. ИлеарВ)л : . сток из кроВи Ос 11 цествляется;-. :(а. На первом и втором зта 1;й( ).)1; ,; )Нтир) ется и под:. О- тав 1 ИВВЕ " (1 С., 3.31 НИО, .(,.1) СГО (СРЕЗ змеевик " )рог"к.;Тг раствор ЗвердНз ного ькелатина.,)атем )срез змеевикпров:. канет кровь. носа; чего змеевик 2 и 1(Вв Ва;1 РаСТОРОМ .С(Кс;: 1) КОТО)ОМ СОДСР:+ат- ср ся")и ; (еап 1(ы("и 1Изобретение относится к медицинскоймикробиологии, а именно к проведению иммунологических исследований,Целью изобретения является упрощениепроцесса выделения мононуклеарных клетоки увеличение количества выделяемых мононуклеарных клеток,На чертеже представлено устройство длявыделения мононуклеарных клеток.Устройство состоит из сосуда 1, змеевиа 2, размещенного в резервуаре 3, соеиненном с термостатом 4 и сливным резеруаром 5, трубопроводов 6, 7, штатива 8,ажима 9.Для регулирования скорости прохождеия крови и раствора Хенкса в устройствемогут быть использованы регуляторы стан 1 цартных систем для переливания крови.В качестве сосуда 1 могут быть испольованы стандартные флаконы объемом50,0 мл.При изготовлении змеевика 2 может быть 20спользована стеклянная или пластиковаярубка длиной 5 м (предусмотренная длиа трубки оптимально обеспечивает эффектприлипания клеток при прохождении крои), имеющая диаметр просвета 3 мм. Внутренний диаметр кольца змеевика 30, мм. 25Соединение сосуда 1 со змеевиком 2 осуществл яется посредством трубопровода 6.Устройство работает за счет эффекта прилипания мононуклеарных клеток на внутреннюю поверхность змеевика 2, покрытую твер- З 0дофазным желатином.Выделение мононуклеарных клеток с использованием разработанного устройствароводится в 4 этапа: монтаж устройства;годготовка устройства; пропускание крови;олучение мононуклеарных клеток. 35Монтаж устройства осуществляется поомплектующим деталям и блокам, предва)рительно подвергнутым стерилизации. Стеклянный змеевик 2 герметически закрываютс обеих сторон трубопроводами 6, 7. Монтажпредварительно простерилизованных деталей 40Проводят в асептических условиях.Выходы резервуара 3 через резиновыеШланги подсоединяют к термостату.Этап подготовки устройства состоит в нанесении желатина на внутреннюю поверх ность змеевика 2 в качестве слоя прилипания мононуклеарных клеток. Для наполнения змеевика 2 используют 10 Я-ный раствор желатина медицинского, предназначенного для инъекций. Перед заполнением системы ампулу раствора желатина выдерживают в течение 5 - 10 мин на водяной бане при 50 - 60 С. Для заполнения змеевика 2 используют 10 мл 10 Я-ного раствора желатина, который вводят в асептических услоВиях из шприца. Средняя толщина слоя прилипания желатина к поверхности змеевика составляет 0,2 - 0,4 мм. Избыток желатина отсасывают под вакуумом 0,5 атм в течение 5 мин. Внутренний просвет змеевика 2 после нанесения желатина составляет 2,2 - 2,6 мм. Для перевода желатина в твердофазное состояние через резервуар змеевика 2 пропускают воду, имеющую температуру 10 -5 С в течение 30 мин с последующей циркуляцией в том же температурном режиме.Этап пропускания крови включает забор крови и введение ее в устройство.Забор крови осуществляется стандартными методами в объеме не менее 6 мл во флакон, содержащий гепарин (125 М.Е. на 1 мл крови), При потребности получения большего количества мононуклеарных клеток объем пропускаемой крови может соответственно увеличиваться.Кровь вводят в змеевик 2 с температурным режимом резервуара 3 при 10 - 15 С (оптимальный режим для перевода желатина медицинского в твердофазное состояние), Скорость прохождения крови регулируется зажимом 9. По мере выхода крови из сосуда 1 устройство переключают на пропускание раствора Хенкса. Объем использованного раствора Хенкса регулируется заполнением системы змеевика с избытком дополнительного пропускания 20 мл для выделения из змеевика 2 неприлипших клеток. После этого систему змеевика 2, заполненную раствором Хенкса, отключают от сливного резервуара.Этап получения мононуклеарных клеток. Режим водяной рубашки змеевика 2 переключают на 37 С и выдерживают при данной температуре в течение 20 мин с целью перевода желатина из твердофазного в жидкофазное состояние, после чего сливают раствор Хенкса, содержащий клеточную взвесь, в стерильные центрифужные пробирки. Взвесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, что обеспечивает перевод клеточной взвеси в осадок. Надосадочную жидкость сливают, а полученный осадок ресуспендируют в-избытке раствора Хенкса и повторно центрифугируют в том же режиме, Надосадочную жидкость сливают, В осадке содержится целевой продукт - мононуклеарные клетки.Формула изобретенияУстройство для выделения мононуклеарных клеток из крови, содержащее сосуд для твердофазного желатина, отличавшееся тем, что, с целью упрощения процесса выделения и увеличения количества выделяемых мононуклеарных клеток, устройство снабжено термостатом, подающим и сливным резервуарами, штативом, жестко установленным на основании, сосуд для твердофазного желатина выполнен в виде змеевика, размещенного в резервуаре с жидкостным обогревателем, связанным с термостатом, к1454386 Составитель В. Баганов Редактор М. Бандура Техред И. Верес Корректор И.Мтска Заказ 73717 Тираж 644 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 45 Производственно-издательский комбинат сПатент, г. Ужгород, ул. Гагарина, 101входному и выходному отверстиям змеевика через трубопроводы подсоединены подающим и сливной резервуары соответственно,4причем последний, а также резервуар с жидкостным обогревателем жестко соединены со штативом.