Способ отделения трипаносом от форменных элементов крови

(51)5 6 01 й 33/53 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ6 дФбд К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Казахский научно-исследовательскийветеринарный институт Восточного отделения ВАСХНИЛ(56) Хочоян В,ННалбандян Е.С. Флотацияи отделение трипаносом от форменных элементов крови, - Айясгани гексапанасанантес, 1967, М 2, с.99-101.(54) СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ ТРИПАНОСОМОТ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из кровиинвазированных животных для изготовления биологических препаратов,Цель изобретения - повышение выходапаразитарной массы.П р и м е р, В опыте были использованы3 группы белых мышей, по 10 в каждой,Мышей заражали лабораторным штаммомвозбудителя случной болезни лошадей и напике паразитемии (200 - 300 параз;". ов в 1поле зрения микроскопа) брали от нихкровь.Отделение трипаносом от форменныхэлементов крови мышейгруппы проводилипо общипринятому методу, включающемуфильтрацию и многократное центрифугирование крови при 2000 - 3000 об/мин в течение 15 - 20 мин. Выход паразитарной массысоставил 500, причем оказалось невозможЖ 1631431 А 1(57) Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из крови инваэированных животных для приготовления биологических препаратов, Целью изобретения является повышение выхода паразитарной массы, Кровь гепаринизируют, смешивают с забуференным физиологическим раствором, при рН 7,0 - 7,2, наслаивают на растворы сахарозы молярностью 1,75 и 1,46, центрифугируют при 1000- 1200 об/мин 5 - 10 мин, отделяют трипаносомы и промывают от сахароэы забуференным физиологическим раствором центрифугированием при 2500 - 3000 об/мин в течение 5 - 10 мин,ным полностью отделить трипаносомы от форменных элементов крови.Отделение трипаносом из крови мышей 2 группы проводили по методу-прототипу, Метод позволяет получить концентрат трипаносом почти в плотном виде, но для этого необходимо многократное центрифугирование при 6000 - 8000 об/мин во флотационной жидкости. Выход паразитов составил также 50% с примесью форменных элементов крови.Отделение трипаносом от форменных элементов крови мышей 3 группы проводили по предлагаемому нами способу следующим образом, 10 мл гепаринизированной крови белых мышей, содержащей 1-2 10 паразитов, смешивали с равным обьемом забуференного физиологичесокго раствора (ЗФР) рН 7,2, В центрифужную пробирку обьемом 10 мл вносили 2 мл 1,75 М раствора сахарозы, сверху наслаивали такое же коли1631431 Сравнительная оценка эффективности способов Составитель И.МарченкоТехред М.Моргентал Корректор М,Максимишинец Редактор М.Товтин Заказ 541 Тираж 406 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 чество 1,46 М раствора сахарозы, На градиент осторожно наносим 4 мл разбавленной крови, пробирки помещали в центрифугу с вертикальным ротором и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин, 5Трипаносомы концентрировались между слоем эритроцитов и плазмы, образуя белое кольцо. Паразитарную массу осторожно отсасывали и отмывали от раствора сахарозц ЗФР при 3000 об/мин в течение 10 5-10 мин. Выход паразитов составил 80- 90 О, без примесей форменных элементов крови,Проведенные испытания данного способа показали его высокую эффективность, 15 Были проведенц сравнительные испытания известных и предложенного способов в лабораторных условиях.Результаты исследований показали,что 20 при использовании известных способов выход параэитарной массы составил 50-60, полностью отделить трипаносомы от форменнцх элементов крови не удалось, При использовании предлагаемого способа выход паразигарной массы составил 80 - 90,. сравнительно чистой паразитарной массы.Результаты приведены в таблице.Применение предлагаемого способа в ветеринарной паразитологии позволит получить эффект выхода 90-ной паразитарной массы для получения антигена.Формула изобретения Способ отделения трипаносом от форменных элементов крови, включающий центрифугирование крови, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода паразитарной массы, кровь предварительно гепаринизируют, смешивают с равным обьемом забуфереиного физиологическогораствора рН 7,0 - 7,2, наслаивают на растворы сахарозы с молярностью 1,75 и 1,46, центрифугирование проводят при 1000 - 1200 об/мин в течение 5 - 10 мин, затем трипаносомы отмывают от сахароэы забуференным физиологическим раствором центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 5 - 10 мин,