Способ определения фосфамида в биологических средах

(я)5 0 01 М ЗЗ/483 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Киевский научно-исследовательский институт гигиены труда и профзаболеваний(56) Лещев В.В. и др. Определение фосфамида в молоке и тканях животных газожидкостной хроматографией. В кн.: Методыопределения микроколичеств пестицидов впродуктах питания, кормах и внешней среде. М.: Колос, 1977, с. 152-153,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФАМИДА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ(57) Изобретение относится к медицине иможет быть использовано для определенияуровня содержания пестицида-фосфамидапри интоксикации фосфорорганическимисоединениями, Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в клинических лабораториях для определения уровня содержания пестицида при интоксикации фосфорорганическими соединениями.Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа,Способ определения фосфамида в биологических средах осуществляется следующим образом.Отбирают для анализа 0,5 мл сывороткии 0,5 мл эритроцитов после разделения пробы крови на фракции сыворотки и эритроцитов. Приливают к пробе по каплям 20-ный раствор трихлоруксусной кислоты до полной коагуляции белков и других козкстракп 9) Й 2 и) 1 6243 1 9 А 1 способа. Для этого проводят осаждение белков, мешающих определению, добавлением 20;(-ного раствора трихлоруксусной кислоты. После восстановления рН раствора до нейтрального значения экстрагируют исследуемое вещество органическим растворителем, высушивают экстракт. Растворяют сухой остаток в 1 мл ацетона или гексана и осуществляют газохроматографический анализ с помощью электронно-захватного детектора при температуре колонки 190 С и скорости газа-носителя 60- 70 мл/мин. Нижний предел обнаружения фосфамида в эритроцитах и сыворотке крови 0,06 мкг/мл, в тканях внутренних органов 0,017 мкг/г. Относительная ошибка определения фосфамида в сыворотке крови + 8,5, в эритроцитах + 13,1 ф(, в тканях внутренних органов .ф.7,2. тивных веществ. Затем добавляют 2 мл дистиллированной воды, перемешивают и прибавляют по каплям 10-ный раствор едкого натра до получения нейтральной реакции раствора (рН 7) рН раствора можно контролировать по универсальной лакмусовой бумаге. Экстрагируют фосфамид трижды свежими порциями хлороформа по 3 - 5 мл, встряхивая по 30 мин на холоду, при 0 - 5 С (можно использовать баню со льдом), Экстракты обьединяюг, фильтруют через бумажный фильтр, на который предварительно насыпают 1-2 г сернокислого безводного натрия, Отгоняют органический растворитель до обьема раствора примерно 0,1-0,2 мл на ротационном или другом аналогичном испарителе при темпе1624319 5 10 15 20 25 Формула изобретения Способ определения фосфамида в биологических средах путем экстракции его органическим растворителем, удаления белков, высушивания экстракта растворения и последующего гаэохроматографического анализа, отл ич а ющи йся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности способа. осаждение белков проводят до экстракции, экстракцию проводят при нейтральном рН, а гаэохроматографический анализ осуществляют с помощью электронно-захватного детектора при температуре колонки 190 С и скорости газа-носителя 60 - 70 мл/мин. 30 35 40 Составитель В. МитюшинРедактор О, Спесивых Техред М.Моргентал Корректор И, Эрдейи Заказ 184 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 ратуре бани 40 - 50 С. При нагревании вещества при высоких температурах может произойти его иэомеризация. Оставшийся в отгонной колбе растворитель испаряют в открытой колбе в вытяжном шкафу. К сухому остатку приливают 1 мл ацетона или гексана и анализируют раствор на содержание фосфамида на газовом хроматографе с электронно-захватным детектором (или детектором постоянной скорости рекомбинации-ДПР). Условия хроматографирования; колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, насадка колонки - хроматон М-АВ/-ОМСК (эернение 0.16-0,20 мм), пропитанный 5 ХЕ, температура колонки 190 С, испарителя 210-220 С, детектора 190 С, Скорость по- тока газа-носителя азота особой чистоты 60 мл/мин, Продувка детектора 6 лч. Шкала электрометра 20 10 - 50 10 А. Время выхода (время удерживания) фосфамида 7,5 мин, Минимально детектируемое количество фосфамида 0,2 нг в 6 мкл раствора. Нижний предел обнаружения фосфамида в эритроцитах и сыворотке крови 0,06 мкг/мл или 2,62 10 мкмоль/мл, Относительная-4ошибка определения фосфамида в пробах эоитооцитов крови по способу-прототипч +96,5 ф , а по предлагаемомуспособу эта ошибка +13,1 в эритроцитах и+8,5;6 в сыворотке крови, Фосфамид определяется в присутствии его метаболитов,П р и м е р 1. Определение фосфамида в тканях внутренних органов.Отбирают для анализа 5 г гомогенизированной ткани внутренних органов (печень, почки, сердце, легкие, селезенка, стенка желудка), приливают 5 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивают содержимое. Добавляют 20-ный раствор трихлоруксусной кислоты (примерно 1 - 2 мл) для осаждения белков, После перемешивания приливают 10 мл воды, снова перемешивают и затем добавляют 10-ный раствор едкого натра (примерно 0,5-1 мл) до получения рН раствора 7, Экстрагируют фосфамид трижды по 15 мл хлороформа, встряхивая в течение 30 мин при охлаждении. Порции экстракта объединяют, фильтруют через бумажный фильтр с насыпанным на него безводным сернокислым натрием и далее поступают по примеру 1: отгоняют растворитель до объема раствора примерно 0,2 мл, упаривают остаток в вытяжном шкафу, К сухому остатку приливают ацетон или гексан и аликвотную часть раствора (1- 6 мкл) вводят в хроматограф. Условия анализа; колонка длиной 1 м, насадка колонки хроматон И-АИ-ДМСЯ, пропитанный 5 ХЕ, Температура колонки 190 С, детектора 190 С, испарителя 210-220 С. Скорость газа-носителя 70 мл/мин. Шкала электрометра 20 - 50 10 А. Время удерживания фосфамида 6,4 мин, Нижний предел обнаружения фосфамида в тканях внутренних органов 0,017 мкг/г или 7.42 10 мкмоль/г.Относительная ошибка определения фосфамида в тканях .ф.1,2 ;